ANTI IgG (Soro de Coombs)

ANTI IgG (Soro de Coombs) Soro Anti Gamaglobulinas Humanas PROTHEMO Produtos Hemoterápicos Ltda. PARA TESTES EM LÂMINA OU TUBO SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO Conservar entre: 2º e 8ºC Não congelar Conservante: Azida de Sódio 0,1 % Responsável Técnico: Janaina Martins CRF: 30.331

PRINCÍPIO DO TESTE O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) Prothemo destina-se à pesquisa de anticorpos da fração gamaglobulina humana, quer estejam adsorvidos às hemácias humanas in vivo (Teste de Coombs Direto), quer estejam livres no plasma, o que se detecta após adsorção in vitro (Teste de Coombs Indireto). Este reagente NÃO SE DESTINA a demonstrar anticorpos NÃO GAMAGLOBULINAS HUMANAS os quais são detectados por sua propriedade de fixar frações do complemento às hemácias, tais como os anticorpos dos Sistemas Kidd, Lewis, Etc. Para a pesquisa destes anticorpos deverá ser utilizado o soro Anti-Humano (Poliespecifico) Prothemo que, além de Anticorpos Anti-IgG contém anticorpos contra a fração do complemento (C 3 d). DESCRIÇÃO DO PRODUTO O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) Prothemo é preparado a partir de soro de coelhos e/ou cabras imunizados à fração IgG (gamaglobulina) do soro humano. O diluente do reagente contém: Cloreto de Sódio, Albumina Bovina, Tampão Fosfato, Potencializadores e Azida de Sódio à 0,1%. Os reagentes foram otimizados para serem usados como fornecidos sem adições ou diluições. O produto é fornecido em frascos de 10 ml, acompanhados de conta- Gotas. Cada gota equivale a 50 L. SORO ANTI-IgG (SORO DE COOMBS) PROTHEMO Código Embalagem 1082 10 ml 1083 5x10 ml MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS Teste em Lâmina: lâminas de vidro, pipetas Pasteur e solução salina à 0,9%. Teste em Tubo: tubos de vidro (0x75mm ou 12x 75mm), pipetas Pasteur, Banho-Maria a 37ºC, centrífuga e solução salina à 0,9%. ARMAZENAMENTO E PRECAUÇÕES Conservar em geladeira entre 2º e 8ºC. Não congelar ou expor o produto a temperaturas elevadas. Não utilizar após o vencimento. Não utilizar o produto se observar nítida turvação, o que pode indicar contaminação bacteriana ou deterioração do produto. Evitar a contaminação do reagente. Não reutilizar os frascos vazios. SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO

Os materiais de origem biológica devem ser considerados como se fossem potencialmente infectantes. Devem ser estabelecidos métodos adequados para o manuseio e descarte equivalente aos utilizados para as amostras de sangue. O não seguimento das instruções de uso pode resultar na diminuição da performance ótima do produto. COLETA DA AMOSTRA O sangue deve ser coletado por procedimento asséptico aprovado, com ou sem adição de anticoagulante. As hemácias obtidas de coágulo podem ser utilizadas em até 5 dias após sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser utilizadas em até 48 horas. Se a demora para a execução do teste for inevitável, hemácias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em solução preservativa de glóbulos. Estocar a 2º a 8º C, por no máximo, 20 dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser utilizado até a data de expiração, se armazenado entre 2º e 8ºC. O armazenamento prolongado de hemácias antes da execução do teste pode causar deterioração de antígenos e resultar em reações mais fracas. PROCEDIMENTO DO TESTE TESTE DE COOMBS DIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA DIRETO Este teste é empregado na pesquisa de anticorpos (gamaglobulinas) já fixados às hemácias, como ocorre na Doença Hemolítica do Recém- Nascido, Anemia Hemolítica Adquirida e em pacientes que tenham recebido transfusões incompatíveis. 1. Colocar em um tubo de hemólise uma gota de suspensão de hemácias do paciente a 5%, previamente preparadas em solução salina à 0,9%. 2. Lavar as hemácias do tubo por três vezes com solução salina à 0,9%. Desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo na última lavagem para retirar toda a solução. 3. Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) PROTHEMO. Misturar bem. 4. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos. 5. Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presença ou não de aglutinação.

TESTE DE COOMBS INDIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA INDIRETO Este teste é utilizado na pesquisa de anticorpos bloqueadores (incompletos), os quais se fixam às hemácias in vitro mas não as aglutinam. Para que a reação seja observada é necessária à adição do Soro Anti- IgG (Soro de Coombs) PROTHEMO ao teste. O teste de Coombs Indireto é realizado nas pesquisas de anticorpos bloqueadores, nas pesquisas de antígenos (usando o soro classificador apropriado) e nas provas de compatibilidade, desde que tais reações não dependam de complemento para a sua detecção. Nos casos em que a reação pode ser mais bem detectada pela fixação de complemento, deve-se usar o Soro Anti-Humano (Anti-IgG e Anti- C 3 d) Poliespecífico PROTHEMO. PROCEDIMENTO DO TESTE 1. Colocar em um tubo de hemólise uma gota de suspensão de hemácias a 5% escolhidas para o teste, previamente preparadas em solução salina à 0,9%. 2. Adicionar duas gotas de soro a ser testado. 3. Acrescentar duas gotas de Albumina Bovina a 22% PROTHEMO. 4. Incubar o tubo em Banho-Maria durante 15-30 minutos a 37ºC. 5. Lavar as hemácias do tubo por três vezes com solução salina à 0,9%, secando as bordas do tubo na última lavagem para retirar toda a solução. 6. Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) PROTHEMO. Misturar bem. 7. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos. 8. Agitar suavemente o tubo para pesquisar aglutinação INTERPRETAÇÃO: POSITIVO: (Presença de aglutinação): Presença de anticorpos livres no soro do paciente, os quais correspondem a um ou mais antígenos presentes nas hemácias usadas no teste. CONTROLE POSITIVO E CONTROLE NEGATIVO PARA O TESTE DE COOMBS INDIRETO 1. Na execução do teste de Coombs Indireto é de primordial importância realizar em paralelo os controles positivo e negativo. 2. Colocar em dois tubos de hemólise uma gota de suspensão a 5% de hemácias O Rh Positivo, previamente preparadas em solução salina à 0,9%. Identificá-los.

3. Adicionar ao tubo controle negativo uma gota de solução salina à 0,9% e ao tubo controle positivo uma gota de reagente Anti-D PROTHEMO. 4. Executar o mesmo procedimento técnico descrito para o teste de Coombs Indireto a partir do item n o 3. TÉCNICAS PARA PESQUISA DAS FORMAS FRACAS DO ANTÍGENO D (D U ) O antígeno D u é uma variante do antígeno D e embora se comporte de maneira diferente nas técnicas rotineiras de determinação do antígeno D é tão antigênico quanto este. O indivíduo portador do antígeno D u deve ser, para todos os efeitos, considerado como Rh Positivo. 1. Colocar em um tubo de hemólise uma gota de reagente Anti-D PROTHEMO. Identificá-lo e em um segundo tubo, colocar uma gota de Controle Rh PROTHEMO como controle negativo. 2. A cada tubo acrescentar uma gota de suspensão de hemácias a 5% previamente preparadas em solução salina à 0,9%. Misturar bem. 3. Incubar os dois tubos a 37ºC durante 15 a 30 minutos 4. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos. 5. Agitar suavemente os dois tubos para pesquisar a presença ou não de aglutinação. 6. Lavar as hemácias dos dois tubos por três vezes com solução fisiológica. Após a última lavagem, desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo para retirar toda solução fisiológica. 7. A cada tubo adicionar duas gotas de Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) PROTHEMO. Misturar bem. 8. Centrifugar a 3.400 rpm por 15 segundos. 9. Agitar suavemente os tubos para pesquisar a presença ou não de aglutinação. INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS Se não houver aglutinação em nenhum dos tubos, o sangue deve ser classificado como Rh negativo. Se houver aglutinação apenas no tubo que recebeu o reagente Anti-D PROTHEMO o sangue é portador do Fator D u e deve ser considerado como Rh positivo. Se houver aglutinação em ambos os tubos, a determinação do Fator D u fica prejudicada e portanto, estaremos diante de hemácias já sensibilizadas por algum anticorpo. Se o sangue for de um doador, o mesmo não poderá ser usado para fins transfusionais. LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO TÉCNICO I - Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer: 1. Quando as hemácias não forem apropriadamente lavadas ou globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralização das antiglobulinas humanas. 2. Quando os anticorpos se eluem das hemácias durante incubação

inadequada, não permitindo uma apropriada sensibilização dos glóbulos. 3. Quando hemácias e/ou reagente não são adequadamente conservados na temperatura indicada, perdendo a reatividade. 4. Quando o Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) foi omitido durante o teste. II - Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer: 1. Quando hemácias com teste de Coombs Direto positivo são usadas durante o procedimento técnico do teste de Coombs Indireto. 2. Quando são utilizadas amostras de sangue contaminado. 3. Quando for realizada uma centrifugação excessiva. 4. Quando o soro, as hemácias e o Soro Anti-IgG(Soro de Coombs) estiverem excessivamente frios, detectando a presença de aglutininas frias. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1-Walker Rh, ed. Technical Manual. 11 th Edition. Bethesda: AABB, 1993. 2-Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6 th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers,1975. 3-Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7 th Edition. Oxford Blackwell Scientific, 1983. 4-Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O. GARANTIA Este produto é garantido por Prothemo Produtos Hemoterápicos Ltda durante o prazo de validade indicado no rótulo se conservado e utilizado segundo as instruções recomendadas. PROTHEMO PRODUTOS HEMOTERÁPICOS LTDA. CNPJ 44.058.162/0001-56 Rua Augusto Ferreira de Morais, 328 - Socorro - CEP: 04763-000 São Paulo - SP - BRASIL Atendimento ao consumidor: Fone (11) 5521-1808 e FAX (11) 5523-9232 Data da edição: Nov/2009