Ciência Animal, 18(2):75-80,2008 DENSIDADES DE INCUBAÇÃO DE OVOS DE TILÁPIA DO NILO (Oreochromis niloticus) EM SISTEMA ALTERNATIVO (Evaluation of small volume incubators for tilapia eggs) Leonardo Luiz CALADO 1*, George Shigueki YASUI 2, Oswaldo Pinto RIBEIRO FILHO 1, Luiz Carlos dos SANTOS 1, Eduardo SHIMODA 2 & Manuel Vazquez VIDAL JUNIOR 2 1 Universidade Federal Viçosa/Depart. Biologia Animal/Ranário Experimental; 2 Universidade Estadual Norte Fluminense/Centro de Ciências e Tecnologia Agrária/Laboratório de Zootecnia e Nutrição Animal RESUMO A incubação dos ovos de tilápias (Oreochromis niloticus) sob condições controladas proporciona inúmeras vantagens aos produtores, visto que é possível incrementar a taxa de sobrevivência das larvas e permite a padronização em idade e tamanho. Objetivou-se com o presente trabalho avaliar a eficácia de incubadoras de pequeno volume construídas a partir de garrafas PET de 2 L. Ovos oriundos de 16 fêmeas adultas de tilápia do Nilo (linhagem Chitralada) foram coletados durante a incubação oral, e distribuídos em 12 incubadoras nas seguintes densidades: T1-250, T2-500, T3-1.000 e T4-1500 ovos por incubadora, mantidos sob renovação constante de água (2,736 L/h; 25 ± 0,5ºC; >68% saturação de oxigênio). As taxas de eclosão obtidas foram de 85,33 ± 5,82%; 70,33 ± 7,03%; 53,4 ± 5.92%; 27,84 ± 2,21% para o T1, T2, T3 e T4, respectivamente, resultando em uma tendência linear (Y = 95,208 0,0443X; R 2 = 94,83; P<0,05). Os respectivos números de larvas resultantes foram de 213 ± 15; 352 ± 35; 534 ± 59 e 418 ± 33, apresentando comportamento quadrático descrito pela equação Y = -27,685 +1,047X 0,0004983X 2 (R 2 = 91,84%, P<0,05). De acordo com esta equação, sob a densidade de 1.050 ovos o número de larvas foi maximizado (522), apesar da taxa de eclosão ter sido maximizada nos tratamentos com menor densidade. PALAVRAS-CHAVE: aqüicultura, eclosão, incubação, peixe, tilápia. ABSTRACT The incubation of tilapia eggs under controlled conditions provides several advantages for hatchery managers since it enables increased survival rates and standardization of size and age. The present study evaluates the efficacy of small-volume incubators made from 2-liter PET bottles. Eggs from 16 adult females of Nile tilapia (Chitralada strain) were collected during oral incubation and divided into twelve incubators at the following densities: T1-250, T2-500, T3-1000 and T4-1500 eggs per incubator, maintained at a constant water flow rate (2,736L/h; 25 ± 0.5ºC; >68% oxygen saturation). The hatching rates were 85.33 ± 5.82%; 70.33 ± 7.03%; 53.4 ± 5.92% and 27.84 ± 2.21% for treatments T1, T2, T3 and T4, respectively, resulting in a linear trend (Y = 95.208 0.0443X; R 2 = 94.85; P<0.05). The respective numbers of fry were 213 ±15; 352±35; 534±59 and 418±33, resulting in the regression Y = -27.685 + 1.047X 0.000498X 2 (R 2 = 91.84%, P<0.05). According to this regression, the number of fry was maximized (522) at a density of 1050 eggs, despite the fact that the hatching rates were maximized in the treatments at lower densities. KEY WORDS: aquaculture, hatching, incubation, fish, tilapia. *Autor para correspondência e-mail: leonardocalado@hotmail.com Ciência Animal, 18(2):75-80,2008 75
INTRODUÇÃO A larvicultura de peixes possui importância fundamental na cadeia produtiva da piscicultura, visto que está relacionada com o fornecimento de sementes para a etapa inicial do cultivo. O fornecimento de juvenis destinados à engorda depende não só da obtenção de gametas viáveis, mas também do domínio das etapas iniciais do desenvolvimento íctico (Andrade & Yasui, 2003). Nesse estágio, os embriões necessitam de água com aspectos peculiares, tais como a temperatura, ph, salinidade e teor de oxigênio dissolvido, que então proporcionem condições adequadas para o desenvolvimento ontogênico. Em ambiente natural, essas características são obtidas principalmente por meio de migrações reprodutivas, da desova em locais específicos como raízes de plantas e ninhos, bem como o comportamento ativo de proteção e oxigenação dos ovos (Woyranovich & Horvath, 1989; Vazzoller, 1996; Wooton, 1998). Em ambientes de cultivo, na maioria dos casos, os ovos são incubados artificialmente, utilizando-se de metodologias que propiciam condições similares ao desenvolvimento natural. No caso de tilápias (gêneros Oreochromis sp e Sarotherodon sp), a incubação é realizada em aparatos específicos para ovos de alta densidade, promovendo oxigenação semelhante ao observado na incubação natural, realizada na cavidade oral (Rothbard & Pruginin, 1975; Trewavas, 1982). Essa técnica de incubação proporciona a padronização em tamanho e idade dos animais, possuindo, inclusive, aplicações em tecnologias de indução de sexo fenotípico e manipulação cromossômica (Mair, 1993; Zimmermann, 1999; Yasui et al., 2006). Embora sejam bastante evidentes as potencialidades de aplicação desta técnica, os equipamentos necessários para tal procedimento não são comumente disponíveis no mercado, principalmente no caso de incubadoras de pequeno volume. Diante dessa realidade, objetivou-se com o presente trabalho avaliar a eficácia de diferentes densidades de incubação de ovos de tilápia em um modelo de incubadora alternativa de baixo custo, confeccionada a partir de garrafas plásticas tipo politereftalato de etileno (PET). MATERIAL E MÉTODOS Foram confeccionadas 12 incubadoras utilizando-se materiais plásticos de fácil aquisição no comércio: garrafas plásticas de 2 L (PET), tubo para aeração de aquários de 9 mm com diâmetro interno de 3,75 mm, controladores de fluxo e resina epóxi. As garrafas plásticas, de formato cilíndrico e transparentes, foram cortadas a uma distância de 10 cm da porção inferior. A parte superior da garrafa foi invertida e então encaixada na parte inferior (Fig. 1A), servindo como base. Na porção côncava da incubadora foi utilizado resina para proporcionar um formato em U (Fig. 1B). O abastecimento de água foi provido por tubos plásticos conectados à controladores de fluxo. O volume útil das incubadoras foi de 1 L. O fluxo de água das incubadoras foram direcionados para caixas de coleta. Os ovos utilizados no presente experimento foram coletados de fêmeas de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), linhagem Chitralada, durante a incubação oral. Ovos provenientes de 16 fêmeas adultas foram adicionados a um recipiente plástico contendo água, recebendo aeração constante. Posteriormente, os ovos foram quantificados e distribuídos em doze incubadoras divididos em quatro tratamentos com três repetições cada, nas seguintes densidades: 250 (T1), 500 (T2), 1.000 (T3) e 1.500 (T4) ovos por incubadora. O fluxo da água foi constante, com vazão de 2,736 L/h, provido por um tubo a uma distância de 10 cm da curvatura inferior da incubadora. A temperatura da água de abastecimento foi de 25 ± 0,5 ºC, e os níveis de oxigênio dissolvido se mantiveram acima de 68% de saturação. Os ovos foram mantidos nesse sistema até a eclosão, quando as larvas natantes foram observadas na caixa de coleta (Fig. 1C). Durante todo o processo de incubação, os ovos mortos, evidenciados pela coloração clara, foram retirados em intervalos de 6 horas. Após a 76 Ciência Animal, 18(2):75-80,2008
Figura 1. Incubadora de pequeno volume construída a partir de garrafa PET de 2 L. (A), Detalhe da confecção da incubadora. (B) Abastecimento de água realizado por tubos e caixa de coleta (C). eclosão, foi obtido então o percentual de eclosão. Para as inferências estatísticas foram realizadas a análise de variância (ANOVA) e o teste de comparação de médias sendo os dados expressos como média ± desvio-padrão e analisados por meio de análise de regressão, optando-se pelo modelo de equação em função da significância e do coeficiente de determinação (R 2 ). Nas regressões ora obtidas, a densidade de ovos foi considerada como variável independente, e o número de larvas e o percentual de eclosão como variáveis dependentes. A otimização do número de larvas e eclosão foram estimadas por meio das equações obtidas. RESULTADOS E DISCUSSÃO As médias que diferiram estatisticamente entre si foram aquelas pertencentes aos tratamentos T1 e T4 (Tab. 1 e 2). O número de larvas em função da densidade inicial de ovos apresentou comportamento quadrático, descrito p e l a e q u a ç ã o Y = -27,685+1,047X 0,0004983X 2 (R 2 = 91,84%, P<0,05). Esta equação apresenta Ciência Animal, 18(2):75-80,2008 ponto de máximo em 1.051 ovos/l, indicando que a máxima produção de larvas na incubadora é de aproximadamente 500 (Fig.1). Nos mesmos tratamentos, o percentual de eclosão obtido foi de 85,33 ± 5,82%, 70,33 ± 7,03%, 53,4 ± 5,92% e 27,84 ± 2,21%, resultando em uma regressão linear decrescente em função do aumento na densidade de ovos, descrita pela equação Y = 95,208-0,0443X (R 2 = 94,83%, P<0,05) (Fig 2). Esta relação destaca o efeito negativo da adição de ovos, com um decréscimo de 0,0443% na taxa de eclosão quando um ovo é acrescido à incubadora, possivelmente em função de deficiência na oxigenação dos ovos sob maiores densidades. De acordo com Chapman (2000) e Brooks Jr. (2002), a taxa de eclosão para ovos de tilápia varia entre 70 a 90% e, considerando esta faixa como referência, as incubadoras utilizadas no presente trabalho teriam uma capacidade de incubação estimada entre 569,1 a 117,4 ovos (70% e 90% de eclosão, respectivamente). Contudo, valores inferiores aos autores mencionados também são descritos na literatura (Myers et al., 1995; Shelton, 2000). A eficácia do sistema de incubação 77
Produção de larvas 700 600 500 400 300 200 100 0 y = -27,685 + 1,0469x -0,0004983x 2 R 2 adj = 0,9184 0 250 500 750 1000 1250 1500 Densidade (ovos/l) Figura 2. Número de larvas obtidas em função do número de ovos estocados nas incubadoras. depende da espécie de peixe e da característica dos ovos. Para ovos pelágicos, os sistemas de incubação do tipo afunilado e com abastecimento de água pela parte inferior parecem ser os mais adequados (Sutela et al., 2007; Jensen et al. 2008). Rana (1986), comparando dois sistemas de incubação para tilápias, verificou melhores resultados em incubadoras côncavas (conforme utilizado no presente experimento), quando comparadas com outras de formato afunilado e com entrada de água na parte inferior, embora este último modelo já tenha sido utilizado satisfatoriamente em ciclídeos (Rothbart & Hulata, 1980). O abastecimento de água do presente trabalho difere de Rana (1986) por apresentar abastecimento de água na região central da incubadora. A taxa de eclosão referente ao trabalho supracitado foi de 91,6%, valores superiores aos encontrados no presente trabalho. Em contraste, Myers & Hershberger (1991) encontraram valores de 68% de eclosão em sistema de incubação semelhante, embora não descrevam detalhes do referido sistema de incubação. Afonso et al. (1993) utilizando incubadoras que mantinham os ovos estáticos, sobre telas, obtiveram taxas de eclosão variando Eclosão (%) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 y = 95,208-0,0443x R adj 2 = 0,9483 0 500 1000 1500 2000 Densidade Figura 3. Taxa de eclosão em função do número de ovos de tilápia estocados nas incubadoras. 78 Ciência Animal, 18(2):75-80,2008
Tabela 1. Resultado da análise de variância FV GL SQ QM F p Tratamentos 3 161138 53713 35,46 0,00005 Resíduo 8 12118 1515 Total 11 173256 de 91,58 ± 7,58% a 94,75 ± 6,34%, valores superiores ao encontrado no presente trabalho (27,84 ± 2,21 a 85,33 ± 5,82%). Contudo, a capacidade de incubação do referido trabalho (~300 ovos por incubadora) é inferior quando comparado ao presente trabalho (250-1.500 ovos) o que implica em uma menor produção de larvas quando considerados conjuntamente os parâmetros de número de ovos e eclodibilidade. Em sistema semelhante ao de Afonso et al. (1993), Brooks Jr. (1994) encontrou taxa de eclosão de ovos de tilápia variando de 70 a 90%, próximo ao encontrado no presente trabalho nos tratamentos de menor densidade. Possivelmente um maior controle no abastecimento de água, alterando-se a vazão, a distância do tubo de abastecimento ao fundo ou o seu diâmetro possam permitir uma maior taxa de eclosão dos ovos de tilápia nestas incubadoras alternativas. Contudo, no tratamento de menor densidade, a taxa de eclosão (85,33%) foi próximo ao encontrado em outros sistemas de incubação (Brooks Jr., 1994 e 2002;Chapman, 2000). Existe também a possibilidade de que parte dos ovos não estava fertilizada ou vieram a morrer em função do manejo pré-experimental (contagem e manipulação). Isso indica que a produção máxima de larvas e a taxa de eclosão obtidas no presente experimento possam estar Tabela 2. Médias ± desvio padrão da taxa de eclosão submetida a densidades diferentes. Tratamentos Médias 1500 534 ± 59 a 1000 418 ± 33 ab 500 352 ± 35 ab 250 213 ± 15 b Médias seguidas por letras distintas diferem entre si estatísticamente ( p<0,05). subestimadas. Além disso, outras variáveis importantes, e que não foram consideradas no presente experimento, poderiam incrementar as taxas de eclosão, como a utilização de fungicidas e/ou bactericidas, bem como o uso de esterilizadores (UV, ozonizadores) (Rana, 1986; Celada et al., 2004). Soma-se a esses fatores, a variação da taxa de eclosão em função da linhagem utilizada segundo Lovshin (2000). No presente trabalho, ressalta-se que foi utilizada a linhagem Chitralada. Embora a pequena capacidade de incubação de ovos, o modelo de incubadora possui baixo custo e pode ser utilizado em espaços reduzidos, exigindo também uma taxa de renovação de água baixa. Essas informações sugerem que um maior número de incubadoras pode ser utilizado para compensar a baixa capacidade de incubação. Ressalta-se, ainda, o potencial para utilização tanto na produção em pequena escala quanto na experimentação, já que, além de permitir a incubação individual de desovas em um espaço reduzido, pode também atuar como ferramenta em estudos que envolvam características importantes no tocante à embriologia, variação de parâmetros físicoquímicos da água (oxigênio dissolvido, temperatura, ph, dureza, utilização de fungicidas) e outras variáveis relevantes no processo de incubação. A produção máxima de larvas de tilápias do Nilo na incubadora de pequeno volume é maximizada quando se utilizam 1.000 ovos por incubadora (522 larvas), embora a taxa de eclosão seja otimizada em quantidades menores. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS AFONSO, L. O. B., GUDDE, D. H., LEBOUTE, E. M., SOUZA, S. M. G. Método para incubação artificial de ovos de tilápia nilótica (Oreochromis Ciência Animal, 18(2):75-80,2008 79
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