Chlamydia Bivalente IgG

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1 . Chlamydia Bivalente IgG Chlamydia trachomatis & Chlamydia pneumoniae B nucléicos fornecem altos níveis de especificidade e sensibilidade. Entretanto, com a exceção da análise urinária, existe ainda um viés de amostragem devido à coleta da amostra. Além disso, os métodos moleculares são caros e requerem um alto nível de habilidade para os executar e analisar corretamente. A detecção sorológica de anticorpos para Chlamydia constitui um método mais conveniente e altamente sensível para o diagnóstico de infecções por Chlamydia. Este método também facilita o diagnóstico em casos de acesso físico problemático e tem sido usado como teste complementar para detecção de antígeno. Na maioria dos testes, contudo, a reação cruzada entre as espécies impede a interpretação clínica significativa dos resultados. O teste de microimunofluorescência (MIF), que é considerado uma técnica de referência e permite a discriminação entre as espécies, requer um alto nível de habilidade para ser realizado e para ser interpretado corretamente. Dependendo do nível do título e de sua cinética, a presença de IgG anti-chlamydia trachomatis pode ser indicativo para uma infecção passada ou para o estado ativo em infecções agudas, crônicas ou recorrentes por Chlamydia. A detecção de anticorpos IgG específicos facilita o diagnóstico para infecções clamidianas; estudos clínicos mostram de fato uma alta correlação entre a detecção sorológica de IgG anti-chlamydia trachomatis em soro e a presença do antígeno clamidiano. O kit ImmunoComb Chlamydia Bivalente IgG utiliza duas cepas distintas em dois pontos diferentes: Cepa L2 (Chlamydia trachomatis) Cepa IOL207 (TWAR) (Chlamydia pneumoniae) A extração e a eliminação da fração comum de LPS antigênica, gênero específico destas duas cepas, permite o diagnóstico específico e diferencial de infecções por Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae. Código: Somente para Uso em Diagnóstico In vitro Formato: 3 x 12 Testes Uso Pretendido O kit ImmunoComb Chlamydia Bivalente IgG é um teste rápido destinado à determinação semiquantitativa de anticorpos IgG para Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae em soro ou plasma humano. Podem ser realizados trinta e seis testes com um kit. Introdução As Chlamydias são bactérias não móveis, Gram negativo, com um ciclo de vida intracelular obrigatório em células eucaróticas. O gênero Chlamydia consiste de quatro espécies, Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci, Chlamydia pneumoniae, e Chlamydia pecorum, as quais causam um amplo espectro de doenças humanas e animais caracterizadas e conhecidas. Todas as quatro compartilham um antígeno lipopolissacarídeo (LPS) gênero-específico comum, além de outros antígenos espécieespecíficos de proteína de membrana. A Chlamydia trachomatis era conhecida como o agente causador do tracoma. Contudo, infecções genitais por Chlamydia trachomatis são as doenças sexualmente transmissíveis (DST) mais comuns em muitos países. Os tipos mais frequentes de DST por Chlamydia trachomatis são: infecções urogenitais, em particular a uretrite não gonocócica (UNG) e epidimite nos homens, e doença inflamatória pélvica (DIP) nas mulheres. Embora geralmente assintomática, a infecção não diagnosticada em mulheres pode levar à salpingite aguda, com alto risco de gravidez ectópica ou infertilidade tubária. Também foram reportadas conjuntivite neonatal e pneumonia, provavelmente adquiridas durante a passagem através do canal de nascimento infectado. O método tradicional para diagnóstico laboratorial para Chlamydia trachomatis é o isolamento em cultura de células. Entretanto, a cultura requer condições rigorosas de coleta e transporte, bem como perícia técnica e equipamentos caros. Os métodos de detecção direta de antígenos, tais como o imunoensaio enzimático (EIA) e o ensaio de imunofluorescência direta (IFD) ainda sofrem influência da carência de amostras adequadas, que afetam o desempenho do teste, principalmente a sensibilidade. Os testes de amplificação e hibridização baseados em ácidos Princípio do Teste O teste ImmunoComb Chlamydia Bivalente IgG (Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae) é um imunoensaio enzimático indireto de fase sólida. A fase sólida é um pente com 12 projeções (dentes). Cada dente é sensibilizado em três posições. Ponto superior: Anticorpos de cabra para imunoglobulina humana (Controle Interno) Ponto intermediário: Antígenos inativados de Chlamydia pneumoniae Ponto inferior: Antígenos inativados de Chlamydia trachomatis. A Placa Reveladora possui seis fileiras (A-F) de 12 dentes, cada fileira contendo uma solução reagente pronta para uso nas diferentes etapas do ensaio. O teste é realizado em etapas, movimentando-se o Pente de fileira a fileira, com incubação em cada etapa. No início do teste, amostras de soro ou plasma são pré-diluídas a 1:32 e adicionadas ao diluente nas cavidades da fileira A da Placa Reveladora. O Pente é então inserido nas cavidades da fileira A. Os anticorpos anti-clamidianos, se presentes nas amostras, serão ligados especificamente aos respectivos antígenos clamidianos nos pontos inferior e intermediário dos dentes do Pente (Figura 1). Anticorpos anti- Chlamydia Conjugado anti- IgG Humana AP AP subs trato cromogênico AP Formaçäo do complexo antigeno de Chlamydia anticorpo; 60 min. Ligaçäo do Conjugado anti- IgG humana; 30 min. Reaçäo de cor enzimática; 10 min. Figura 1. Princípio do Teste Simultaneamente, as imunoglobulinas presentes nas amostras serão capturadas pela anti-imunoglobulina humana no ponto superior (Controle Interno). Os componentes não ligados são lavados na fileira B. Na fileira C, a IgG humana capturada nos dentes reagirá com a anti-igg humana marcada com Fosfatase Alcalina (FA). Nas duas próximas fileiras, os componentes não ligados são removidos por lavagem. Na fileira F, a Fosfatase /B1/OR 1

2 Alcalina ligada reagirá com componentes cromogênicos. Os resultados são visíveis como pontos cinza-azulados na superfície dos dentes do Pente. O kit inclui um Controle Positivo (IgG anti-chlamydia trachomatis e IgG anti-chlamydia pneumoniae) e um Controle Negativo, para serem inseridos em cada ensaio. Após o término do teste, o dente usado com o Controle Positivo deve mostrar 3 pontos cinzaazulados. O dente usado com o Controle Negativo deve mostrar o ponto superior e nenhum outro ponto ou um ponto intermediário ou inferior fraco. O ponto superior deve também aparecer com todos os outros dentes, para confirmar que a amostra foi adicionada, que o kit funciona adequadamente e que o teste foi realizado corretamente. Conteúdo dos Kits Pentes O kit contem 3 Pentes de plástico. Cada Pente possui 12 dentes, um dente para cada teste (Figura 2). Cada dente é sensibilizado com três áreas reativas: Ponto superior anticorpos de cabra para imunoglobulina humana (Controle Interno) Ponto intermediário antígenos inativados de Chlamydia pneumoniae Ponto inferior antígenos inativados de Chlamydia trachomatis Figura 2. Pente ImmunoComb Os Pentes são fornecidos em embalagens de alumínio contendo um saco de dessecante. Placas Reveladoras O kit contem 3 Placas Reveladoras cobertas com folha de alumínio. Cada Placa Reveladora (Figura 3) contem todos os reagentes necessários para o teste. A Placa Reveladora consiste de 6 fileiras (A-F) de 12 cavidades cada: Fileira A Diluente da amostra Fileira B Solução de lavagem Fileira C Anticorpos anti-igg humana de cabra marcados com Fosfatase Alcalina Fileira D Solução de lavagem Fileira E Solução de lavagem Fileira F Solução de substrato cromogênico contendo 5-bromo-4- cloro-3-indolil fostato (BCIP) e azul de nitro tetrazólio (NBT) Figura 3. Placa Reveladora Controle Interno Antigenos de C. pneumoniae Antigenos de C. trachomatis Controle Positivo 1 frasco (tampa vermelha) de 0,3 ml de plasma humano inativado por calor, diluído para um título ImmunoComb de 1:32 para IgG anti-chlamydia trachomatis e IgG anti-chlamydia pneumoniae. Controle Negativo 1 frasco (tampa verde) de 0,3 ml de plasma humano diluído, inativado por calor, negativo para anticorpos para Chlamydia. Diluente de Amostra 1 frasco de 15 ml de diluente. Perfurador para perfuração da folha de alumínio que cobre as cavidades da Placa Reveladora. CombScale para leitura dos resultados. Segurança e Precauções Os materiais humanos utilizados no preparo do kit foram testados e não reativos para antígeno de superfície da hepatite B, e anticorpos para HIV e para vírus da hepatite C. Uma vez que nenhum método de teste pode assegurar completamente a ausência de contaminação viral, todas as soluções de referência e amostras humanas devem ser manuseadas como potencialmente infectantes. Usar luvas cirúrgicas e roupas de laboratório. Seguir os procedimentos laboratoriais recomendados para trabalhar com soro ou plasma humano. Não pipetar com a boca. Descartar todas as amostras, Pentes utilizados, Placas Reveladoras, e outros materiais utilizados com o kit como resíduos bioinfectantes. Não misturar reagentes de lotes diferentes. Não usar o kit após a data de validade. Armazenamento e Estabilidade do Kit O kit é enviado em temperatura de 2-8 o C. Durante o transporte o kit pode ser mantido em temperatura 30 o C por curtos períodos de tempo, não excedendo um total de 48 horas. Os controles internos indicam se o kit não foi danificado durante o transporte. Armazenar o kit em sua embalagem original de 2-8 o C. Não congelar o kit. Após a primeira abertura do kit os componentes devem ser armazenados de 2-8 o C. O desempenho do kit após a primeira abertura é estável até a data de validade, quando armazenado de 2-8 o C. Após a primeira utilização, o Pente e a Placa Reveladora não podem ser utilizados por mais que três vezes. Manuseio de Amostras Podem ser testados soro ou plasma. As amostras podem ser armazenadas por 7 dias entre 2º-8ºC antes da análise. Para armazenar por mais de 7 dias, congelar as amostras a -20ºC ou mais frio. Todas as amostras congeladas devem ser centrifugadas a rpm por 5 min. Em temperatura ambiente. Remova cuidadosamente a amostra de teste a partir do sobrenadante. Se uma camada lipídica se formar na superfície do líquido, garanta que a amostra seja tomada do líquido claro abaixo da camada. Evitar congelamento e descongelamento repetidos. Anticoagulantes tais como Heparina, EDTA e Citrato de sódio não tem efeito sobre os resultados dos testes. Procedimento do Teste Equipamento Necessário Pipetas de precisão com ponteiras descartáveis para dispensação de 10 µl, 20 µl e 310 µl Tesoura Cronômetro ou relógio de laboratório Microtubos ou cavidades de microtitulação Preparo do Teste O teste é realizado em temperatura ambiente (22º-26ºC). Preparando a Placa Reveladora 1. Incubar a Placa Reveladora em um incubador a 37ºC por 20 minutos; ou deixar em temperatura ambiente (22º-26ºC) por 3 horas. 2. Cobrir a mesa de trabalho com tecido absorvente a ser descartado como resíduo bioinfectante ao final do teste. 3. Misturar os reagentes agitando a Placa Reveladora. Nota: Não remover a cobertura de alumínio da Placa Reveladora. Furar a cobertura de alumínio utilizando o perfurador, ou a ponteira da pipeta, apenas quando instruído para fazê-lo, conforme as Instruções de Uso. Preparando o Pente Cuidado: Para garantir o funcionamento adequado do teste, não tocar os dentes do Pente. 1. Rasgar a embalagem de alumínio do Pente na extremidade marcada. 2. Podem ser usados o Pente inteiro e a Placa Reveladora ou apenas uma parte. Para utilizar parte de um Pente: a. Determinar quantos dentes são necessários para testar as amostras e controles. É necessário um dente para cada teste. Cada dente exibe o número de código 16 do kit, para permitir a identificação dos dentes destacados /B1/OR 2

3 b. Dobrar e quebrar o Pente verticalmente ou cortar com tesoura (ver Figura 4) para destacar o número requerido de dentes (Nº de testes + 2 controles). c. Retornar a porção não utilizada do Pente para a embalagem de alumínio (com saco de dessecante). Fechar a embalagem hermeticamente, por exemplo, com um clipe de papel, para manter seco. Armazenar o Pente na caixa original do kit entre 2º-8ºC para uso posterior. ImmunoComb Figura 4. Quebrando o Pente Instruções do Teste Pré-diluição de Amostras 1. Para cada amostra, dispensar 310 µl de Diluente de Amostra em um microtubo ou cavidade de microtitulação. 2. Para cada microtubo ou cavidade, adicionar 10 µl da amostra. Misturar por agitação (vortex). Nota: Não pré-diluir os controles. Reação Antígeno-Anticorpo (Fileira A da Placa Reveladora) 3. Perfurar a cobertura de alumínio de uma cavidade da fileira A da Placa Reveladora com a ponteira da pipeta ou perfurador e dispensar 20 µl de uma amostra pré-diluída no fundo da cavidade. Misturar, enchendo e esvaziando a solução repetidamente. Descartar a ponteira da pipeta. 4. Repetir o passo 3 para as outras amostras pré-diluídas e os dois controles não diluídos, utilizando novas cavidades na fileira A e trocando as ponteiras da pipeta para cada amostra ou controle. 5. a. Inserir o Pente (lado impresso voltado para você) nas cavidades da fileira A contendo as amostras e controles. Misturar: Retirar e inserir o Pente nas cavidades diversas vezes. b. Deixar o Pente na fileira A por 60 minutos. Acionar o cronômetro. Próximo ao final dos 60 minutos, perfurar a cobertura de alumínio da fileira B, utilizando o perfurador. Não abrir mais cavidades que o necessário. c. Ao final dos 60 minutos, retirar o Pente da fileira A. Absorver o líquindo aderente das ponteiras dos dentes sobre papel absorvente. Não tocar a superfície frontal dos dentes. Primeira Lavagem (Fileira B) 6. Insira o Pente nas cavidades da fileira B. Agitar: Retirar e inserir vigorosamente o Pente nas cavidades por pelo menos 10 segundos, para realizar lavagem adequada. Repetir a agitação diversas vezes durante o curso de 2 minutos; enquanto isso, perfurar a cobertura de alumínio da fileira C. Após 2 minutos, retirar o Pente e absorver o líquido aderente como no passo 5c. Ligação do Conjugado (Fileira C) 7. Inserir o Pente nas cavidades da fileira C. Misturar como no passo 5a. Acionar o cronômetro para 30 minutos. Perfurar a cobertura de alumínio da fileira D. Após 30 minutos, retirar o Pente e absorver o líquido aderente. Segunda Lavagem (Fileira D) 8. Inserir o Pente nas cavidades da fileira D. Agitar repetidamente durante 2 minutos, como no passo 6. Enquanto isso, perfurar a cobertura de alumínio da fileira E. Após 2 minutos, retirar o Pente e absorver o líquido aderente. Terceira Lavagem (Fileira E) 9. Inserir o Pente nas cavidades da fileira E. Agitar repetidamente durante 2 minutos. Enquanto isso, perfurar a cobertura de alumínio da fileira F. Após 2 minutos, retirar o Pente e absorver o líquido aderente. Reação de Cor (Fileira F) 10. Inserir o Pente nas cavidades da fileira F. Misturar. Acionar o cronômetro para 10 minutos. Após 10 minutos, retirar o Pente. Finalização da Reação (Fileira E) 11. Inserir o Pente novamente na fileira E. Após 1 minuto, retirar o Pente, absorver o líquido aderente como no passo 5c e deixá-lo secar ao ar. Armazenamento da Parte Não Utilizada do Kit Placa Reveladora Se não forem utilizadas todas as cavidades da Placa Reveladora, a mesma pode ser armazenada para uso futuro: Selar as cavidades não utilizadas com fita adesiva larga, de modo que nada possa derramar das cavidades, mesmo se a Placa Reveladora for tombada. Outros Materiais do Kit Retornar a(s) Placa(s) Reveladora(s), Pente(s), perfurador, controles, Diluente de Amostra, e instruções de uso para a caixa original do kit. Armazenar entre 2º-8ºC. Resultados do Teste Validação Para confirmar o funcionamento adequado do teste e para demonstrar que os resultados são válidos, cada uma das quatro seguintes condições deve ser preenchida. (ver Figura 5): 1. O Controle Positivo deve produzir três pontos no dente do Pente. 2. O sinal do ponto inferior do Controle Positivo deve ser aproximadamente igual à segunda cor do quadro, partindo da esquerda, quando avaliado utilizando um CombScale. 3. O Controle Negativo deve produzir um ponto superior (Controle Interno). Os pontos inferior e intermediário não aparecerão ou aparecerão fracamente, sem afetar a interpretação dos resultados. 4. Cada amostra testada deve produzir um ponto superior (Controle Interno). Isto também confirmará se a amostra foi adicionada. Se alguma das quatro condições não for preenchida, os resultados são inválidos, e as amostras e controles devem ser testados novamente. Controle Positivo Controle Negativo Resultados Inválidos Figure 5. Validação do Teste Leitura e Interpretação dos Resultados Leitura Visual O nível de IgG anti-clamidiana espécie-específica em cada amostra pode ser determinado pela comparação da intensidade de cor dos pontos inferior e/ou intermediário em cada dente, com a escala de cor no CombScale fornecido com o kit. Isto é realizado da seguinte forma (Figura 6): 1. Calibrar o CombScale para a determinação dos títulos de IgG anti-chlamydia trachomatis. Colocar o ponto inferior do dente do Controle Positivo abaixo da intensidade de cor mais semelhante da escala de cor. Ajustar a régua de modo que 1/32;C+ apareça na janela acima da intensidade cor selecionada. 2. Ler os resultados sem mudar a posição calibrada da régua. Comparar a intensidade de cor de cada ponto inferior com a intensidade mais semelhante da escala de cor. Registrar o valor exibido na janela acima daquela intensidade, como o título aproximado de anticorpos IgG para Chlamydia trachomatis para a amostra correspondente. 3. Para determinação dos títulos de IgG anti-chlamydia pneumoniae, repetir a calibração do CombScale para o ponto intermediário, como detalhado no passo 1 para o ponto inferior. 4. Ler os resultados para cada ponto intermediário, como detalhado no passo 2 para o ponto inferior, e registrar os valores como o título aproximado de anticorpos IgG anti- Chlamydia pneumoniae /B1/OR 3

4 Calibrar o CombScale Orgenics CombScale CHLAMYDIA BIVALENT IgG C+ Figura 6. CombScale Tabela 1. Especificidade do anticorpo e nível do título Interpretação Título Anti-C. trachomatis Anti-C. pneumoniae Negativo <1:8 < 1:16 Positivo 1:8 1:16 Infecção ativa Qualquer título 1:32 ou um aumento de 4 vezes no título de amostras coletadas em um intervalo de 2-3 semanas* Qualquer título 1:512 ou um aumento de 4 vezes no título de amostras coletadas em um intervalo de 2-3 semanas* *Após 2-3 semanas, coletar nova amostra de soro e testar ambas, primeira e segunda amostras, simultaneamente. Nota: A análise simultânea diferencial para anticorpos IgA espécieespecíficos, que são mais proeminentes em infecções ativas, é altamente recomendada. Os títulos ImmunoComb para Chlamydia pneumoniae são comparáveis aos títulos obtidos pelo procedimento da MIF. Documentação dos Resultados Como a cor desenvolvida no Pente é estável, pode-se armazenar os Pentes para documentação. Limitações Assim como com outros testes destinados para uso em diagnóstico in vitro, os resultados deste teste devem ser avaliados em relação a todos os sintomas, história clínica e outros achados laboratoriais para o paciente. A reação cruzada com amostras positivas para FR pode ser observada em alguns casos. Características de Desempenho O desempenho do kit ImmunoComb Chlamydia Bivalente IgG (Chlamydia trachomatis & Chlamydia pneumoniae) foi comparado com o procedimento da MIF, pela análise de um total de 613 amostras em três diferentes laboratórios. A. Identificação de infecção por Chlamydia trachomatis em diferentes populações incluindo: mulheres com presença comprovada de Chlamydia trachomatis em esfregaços cervicais mulheres com infertilidade devido a trompas falopianas ocluídas mulheres inférteis com trompas falopianas abertas bilateralmente pacientes obstétricas em 6 dias pós-parto doadores de sangue Total de 358 amostras. A sensibilidade obtida foi 97.4 %. A especificidade obtida foi 96.6 %. B. Identificação de infecção por Chlamydia pneumoniae Em meio a 144 amostras de Chlamydia. Pneumoniae positivas pela MIF, 140 foram também identificadas pelo kit ImmunoComb Chlamydia Bivalente IgG. Sensibilidade: 97.2%. salpingite, foram analizadas utilizando ambos os testes. Os resultados obtidos foram os seguintes: Para Chlamydia trachomatis Sensibilidade agregada: 92.9% Especificidade agregada: 96.6% Para Chlamydia pneumoniae Sensibilidade agregada: 88.8% Sensibilidade agregada: 75.8% Os resultados destas avaliações mostram que o kit ImmunoComb Chlamydia Bivalente IgG (Chlamydia trachomatis & Chlamydia pneumoniae) possui uma excelente sensibilidade e especificidade, comparado ao ensaio de referência MIF. Nota: As diferenças na sensibilidade e na especificade entre os três diferentes laboratórios podem ser parcialmente explicadas pelo uso de diferentes preparos antigênicos na MIF. Repetibilidade Dez pentes foram escolhidos aleatoriamente de várias partes de um lote de produção. Um soro infectado duplamente foi ensaiado 12 vezes com estes 10 pentes. Em todos os pentes o mesmo título de IgG foi observado para Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae, respectivamente. O Coeficiente de Variação (C.V.) obtido foi 5.64% para Chlamydia trachomatis e 5.07% para Chlamydia pneumoniae. Reprodutibilidade Três amostras foram ensaiadas com pentes tomados de três diferentes lotes de produção. As amostras foram ensaiadas em duplicata. Em todos os pentes o mesmo título de IgG foi observado para Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae, respectivamente. O Coeficiente de Variação (C.V.) obtido foi de 12.7% para Chlamydia trachomatis e 18.67% para Chlamydia pneumoniae. Reação Cruzada A reação cruzada com amostras positivas para HIV, CMV, Toxoplasma, Mycoplasma pneumoniae e ANA, foi considerada insignificante. Interferência Nenhuma interferência foi observada com amostras hemolíticas (hemoglobina até 10 mg/ml), lipêmicas (Colesterol até 281, mg/dl; Triglicerídeos até 381,0 mg/dl) e bilirrubina alta (até 20 mg/dl). Bibliografia Barnes RC Laboratory diagnosis of human chlamydial infections. Clin Microbiol Rev 2: Bernstein RC, Yalcinkaya TM Utilizing Chlamydia trachomatis IgG serology with HSG to diagnose tuboperitonealfactor infertility. W V Med J 99 (3): Bjercke S, Purvis K Characteristics of women under fertility investigation with IgA/IgG seropositivity for Chlamydia trachomatis. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 51: Chutivongse S, Kozuh-Novak C, Annus J, Ward M, Cates Jr W, Rowe PJ, Farley TMM. WHO task force on the prevention and management of infertility Tubal infertility: Serological relationship to past chlamydial and gonococcal infection. Sex Transm Dis 22: Clad A, Freidank H, Plünnecke J, Jung B, Petersen EE Chlamydia trachomatis species specific serology: ImmunoComb Chlamydia Bivalent versus Microimmunofluorescence (MIF). Infection 22: Debattista J, Timms P, Allan J Immunopathogenesis of Chlamydia trachomatis infections in women. Fertil Steril 79 (6): Grayston JT Infections caused by Chlamydia pneumonia strain TWAR. Clin Infect Dis 15: Csángo PA, Sarov B, Schiotz, H, Sarov I Comparison between cell culture and serology for detecting Chlamydia trachomatis in women seeking abortion. J Clin Pathol 41: Katz Z, Levy R, Lurie S Positive serology for Chlamydia: Is it always for Chlamydia trachomatis?. Gynecol Obstet Invest 39: Marrie TJ, Grayston JT, Wang S-P, Kuo C-C Pneumonia associated with the TWAR strain of Chlamydia. Ann Int Med 106: Moss T, Darougar S, Woodland R, Nathan M, Dines RJ, Cathrine V Antibodies to Chlamydia species in patients C. Detecção de Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae em mulheres com DST. Amostras obtidas de 101 mulheres, ambas com infecção por Chlamydia trachomatis comprovada, ou parceiro com infecção recente, ou com complicações, tais como infertilidade tubária ou attending a genitourinary clinic and the impact of antibodies to /B1/OR 4

5 C. pneumoniae and C. psittaci on the sensitivity and the specificity of C. trachomatis serology tests. Sex Transm Dis 20: Odland JØ, Ånestad G, Rasmussen S, Lungren, Dalaker K Ectopic pregnancy and chlamydial serology. Int J. Gynaecol Obstet 43: Orfila J, Chaigneaux C, Sueur JM Infection respiratoires à Chlamydia pneumoniae: Étude comparative de 7 techniques de diagnostic sérologique. Feuill. Biol 37: Persson K The role of serology, antibiotic susceptibility testing and serovar determination in genital chlamydial infections. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 16 (6): Persson K Epidemiological and clinical aspects on infections due to Chlamydia pneumonia (strain TWAR).Scand J Infect Dis, Suppl 69: Sarov I, Kleinman D, Holoman D, Potashnik G, Insler V, Cevenini R, Sarov B Specific IgG and IgA antibodies to Chlamydia trachomatis in infertile women. Int J Fertil 31: Theunissen JJH, Minderhout-Basssie W, Wagenvoort JHT, Stolz E, Michel MF, Huikeshoven FJM Chlamydia trachomatis-specific antibodies in patients with pelvic inflammatory disease: comparison with isolation in tissue culture or detection with polymerase chain reaction. Genitourin Med 70: Thom DH, Wang S-P, Grayston JT, Siscovick DS, Steward, DK, Kronmal RA, Weiss NS Chlamydia pneumonia strain TWAR antibody and angiographically demonstrated coronary artery disease. Arteriosclerosis and Thrombosis 11: Registro e Distribuição: Quantum Diagnósticos LTDA Avenida José Cândido da Silveira, 2100, Cidade Nova Belo Horizonte MG - CEP: CNPJ: / Atendimento ao consumidor: [email protected] SAC: (31) FAX: (11) Uso exclusivo para diagnóstico "in vitro" Registro ANVISA nº Resp. Técnico: Humberto Decerega Mendez CRQ-MG: CONSERVAR ENTRE 2-8ºC Versão: Janeiro 2010 Versão: /B1/OR (04/2010) /B1/OR 5

6 Resumo do Procedimento Principal do Teste Pré-incubar a Placa Reveladora: 3 horas em temperatura ambiente ou 20 min. a 37 C Retirar as amostras prédiluídas e controles não embalagem. Remover o Pente da diluídos. Adicionar as amostras pré-diluídas e controles não diluídos na fileira A. Misturar Inserir o Pente na fileira A e Abrir a fileira B. Absorver o líquido Inserir o Pente na fileira B misturar. Incubar. aderente dos dentes. e misturar. Incubar. Após a mistura/agitação & incubação nas fileira C, D, e E 9 10 Reação de cor na fileira F Resultados Resumo do Procedimento do Teste As instruções abreviadas abaixo são para usuários experientes do kit ImmunoComb Chlamydia Bivalente IgG. (Para instruções detalhadas, por favor, consulte o texto completo) 1. Trazer todos os reagentes e amostras à temperatura ambiente e realizar o teste em temperatura ambiente. 2. Pré-diluir 10 µl de cada amostra misturando com 310 µl de Diluente de Amostra. 3. Dispensar 20 µl de cada amostra pré-diluída e os dois controles não diluídos nas cavidades da fileira A da Placa Reveladora e misturar. 4. Inserir o Pente na fileira A e continuar como descrito na Tabela 1. Tabela 1. Resumo do Procedimento do Teste Etapa Fileira Proceder como a seguir Reação antígeno-anticorpo A Misturar; incubar 60 minutos; absorver Lavar B Agitar; indubar 2 minutos; absorver Ligação do conjugado C Misturar; incubar 30 minutos; absorver Lavar D Agitar; incubar 2 minutos; absorver Lavar E Agitar; incubar 2 minutos; absorver Reação de cor F Misturar; incubar 10 minutos. Bloquear a reação E Incubar 1 minuto; secar ao ar. 2 Dobrando e quebrando o Pente /B1/OR 6