UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL INSTITUTO DE CIÊNCIAS BÁSICAS DA SAÚDE DISCIPLINA DE VIROLOGIA BÁSICA

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1 UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL INSTITUTO DE CIÊNCIAS BÁSICAS DA SAÚDE DISCIPLINA DE VIROLOGIA BÁSICA Fabrine Finkler Mestranda em Virologia UFRGS/IPVDF 1

2 Biologia Ovo: zigoto Óvulo: haplóide Pronúcleo 2

3 a) Ovário (gema) h-23h a b e f c g d 2h-3h 15 1h-1,5h b) Infundíbulo: fertilização, calazas c) Magno: Albúmen (clara) d) Istmo: Membranas da casca e) Útero: Ca ++, cutícula f) Vagina: Passagem ovo g) Cloaca: Postura Total: 24h-26hs 3

4 ou vitelo ou blastoderma Verdadeiro óvulo ou célula feminina 4

5 Aves, répteis e peixes (mitose) 5

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8 Diagram of section through the shell and membranes of a hen s egg, showing crystalline structure and organic material that remains after calcium carbonate has been dissolved. (Adapted from How eggs breathe, H. Rahn, A. Ar, and C. Paganelli. Copyright q 1979 by Scientific American, Inc. All rights reserved.) 8

9 Dia 1 Dia 4 Dia 10 Dia 16 Dia 20 e pernas se formam Sem penas Ca ++ p/ desenv. esquelético Garras e bico começam a se formar Pernas e asa bem desenv. Órgãos internos quase totalmente desenv. Formação final do pulmão Absorção gema cav. abdom. Posição Eclosão 9

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11 Isolamento Propagação Caracterização Vacinas 11

12 Cavidade Amniótica Inoculação embrionária Saco da gema Cavidade alantóica Membrana corioalantóica (CAM) 12

13 Tipo de amostra Tecido Fezes Suabes Preparo da amostra MEM ou PBS+ ATB e ATF Clarificar e filtrar 13

14 Concentração de ATB e ATF Depende do tipo de amostra a ser processada Concentrações limites: Penicilina ( UI/ml) Sulfato de Estreptomicina (2,0 mg/ml) Sulfato de Gentamicina (1,0 mg/ml) Sulfato de Canamicina (0,65 mg/ml) Anfotericina B (0,02 mg/ml) ph 7,0 7,4 Manter por 1-2 h em temperatura ambiente 14

15 1º Cuidados e fatores interferentes na técnica Ovos trincados Ovos sujos Ovos bombas Pesada contaminação bacteriana Ovos velhos ( lisozima, membranas permeáveis) 15

16 1º Cuidados e fatores interferentes na técnica Tipo de ovo Incubação: tempo, temperatura e umidade Limpeza e higiene da incubadora e ovos (álcool70%) Via de inoculação Volume do inóculo Status imunológico 16

17 1º Cuidados e fatores interferentes na técnica Ovos (SPF) I - Adenovírus aviário II - Anemia infecciosa das galinhas III - Avibacterium paragallinarum IV - Micoplasma V - Paramixovírus aviário VI - Reovírus aviário VII - Salmonela X Bouba aviária XI - Bronquite infecciosa XII Doença de Marek XIII - Doença de Newcastle XIV - Doença de Gumboro XV - Encefalomielite aviária XVI - Influenza aviária XVII - Laringotraqueíte infecciosa das galinhas XVIII - Leucose aviária XIX Reticuloendoteliose IN nº 56, de 04 de dezembro de 2007 Art. 23: Aves produtoras livres de agentes patogênicos e Ac específicos 17

18 2º Incubar os ovos Peru: 30 dias Avestruz: dias 21 dias dias 28-32dias Condições ideais: Temperatura: 37 39ºC Umidade: 60% - 70% 18 dias 23-27dias 49-52dias 18

19 3º Marcar o ponto de inoculação no ovo Ovoscopia 4-6 dias 6-7 dias 8-10 dias 19

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23 4º Desinfecção do ovo e perfurador da casca Álcool 70% 3,5% de iodine 1,5% de iodeto de sódio 23

24 5º Furo na casca 24

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26 6º Inoculação Via de inoculação Volume do inóculo Idade embrionária Período de incubação PI Membrana corioalantóide 1 ml dias 5 7 dias Saco alantóico 0,1 0,3 ml 8 11 dias 3 7 dias Saco da gema 0,1 0,5 ml 6 8 dias 3 10 dias Saco amniótico 0,1 0,2 ml dias 2 4 dias 26

27 7º Vedar o furo da casca 27

28 8º Avaliação diária PI Até 24h PI Morte embrionária inespecífica: descartar Título viral Temperatura de incubação Erro de inoculação Contaminação bacteriana 28

29 8º Avaliação diária PI Sem morte Eutanásia Acima de 15 dias maceração, decapitação ou CO2 seguido de imediato congelamento por imersão em N2 líquido ou congelador próprio Mínimo 1h Refrigerador: mín. 4h, overnight CFMV - RESOLUÇÃO Nº 1000, DE 11 DE MAIO DE

30 Morte embrionária Lesões na membrana corioalantóide Edemas Formação de plaquetas Lesões no embrião Nanismo Hemorragia cutânea Aumento abdominal Alterações viscerais: o Aumento do fígado, baço o Necrose focal o Fígado esverdeado o Depósito de uratos 30

31 Via de inoculação: CAM Lesões: 5-7 dias PI morte embrionária, lesões cerebrais, hemorragias. Fluidos: testar atividade hemaglutinante (HI confirma) 31

32 Via de inoculação: saco da gema Lesões: 3-5 dias PI, congestão embrionária, petéquias hemorrágicas próximo as asas e no cérebro. 32

33 Via de inoculação: saco da gema Lesões: membros anormais e distrofia muscular 33

34 Via de inoculação: CAM Lesões: 5-7 dias PI, lesões de pocks na CAM Histopatológico (confirma) 34

35 Via de inoculação: saco corioalantóide Lesões: 2 a 7 dias PI morte embrionária, nanismo, enrolamento embrionário e hemorragias cutâneas HA e HI (confirma) 35

36 Via de inoculação: CAM Lesões: 3 dias PI presença de placas opacas e áreas de necrose Histopatologia confirma 36

37 Via de inoculação: saco da gema Lesões: 4-5 dias PI, presença de sarcoma hemorrágico 37

38 Via de inoculação: saco alantóico Lesões: 3-5 dias PI morte embrionária, HA confirmatório 38

39 Via de inoculação: CAM Lesões: 3-5 dias PI, congestão, necrose focal e hemorragias em órgãos internos: fígado, baço e coração. 39

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