Projeto Salmonela. Nome do Coordenador do Projeto: Dr. Fabrício Antonio Ferreira Martins

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1 Projeto Salmonela Título do Projeto: Rastreamento e detecção de Salmonella enteritidis através do gene inva, pela técnica de PCR em tempo real, na Avicultura de corte e postura de ovos nas granjas comerciais do Estado do Espírito. Nome do Coordenador do Projeto: Dr. Fabrício Antonio Ferreira Martins N o do Processo: /2008 Instituição (por extenso): Instituto Tommasi de Pesquisa e Desenvolvimento O projeto vem sendo apoiado pela FAPES desde: 12 / 2008 Período em que se refere a Prestação de Contas: 12/2008 a 03/2009 Resumo das Atividades Executadas no Período de vigência do auxílio. I - Principais objetivos do projeto original: 1 - Rastrear e detectar Salmonella enteritidis através do gene inva, pela técnica de PCR em tempo real, na Avicultura de corte e postura de ovos nas granjas comerciais do Estado do Espírito, 2 - Ampliar a área de vigilância e fiscalização por diagnóstico molecular de Salmonella enteritidis nas granjas comerciais da COOPEAVI (Cooperativa Centro Serrana Santa Maria de Jetibá), 3 - Manter aqui no Estado uma unidade de sanidade avícola adequados para Salmonella enteritidis, através de um diagnóstico molecular, com objetivo de exportação, aproveitando nossa estrutura logística disponível (portos e ferrovias)

2 II - Etapas executadas e metas atingidas no período visando ao alcance dos objetivos: 1 - Cronograma de coleta das amostras na COOPEAVI 1 Quinzena 2 Quinzena Dezembro/2008 Janeiro/2009 Fevereiro/2009 Março/2009 Abril/2009 Maio/ /12/2008 OK 15/01/2009 OK 05/02/2009 OK 05/03/2009 OK 08/04/ /04/ /12/2008 OK 22/01/2009 OK 19/02/2009 OK 18/03/ /04/ /04/2009 Tabela 01: Cronograma de coleta na COOPEAVI 2 Relação dos Avicultores participantes do Projeto entre 12/2008 a 03/2009 * Coleta de Ovos 1 Coleta 10/12/2008: Nome do Produtor: Manfredo Kruger Nome Fantasia: Mais Ovos Endereço: Sitio Kruger, cor rio bonito, s/n zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Data de fabricação: 10/12/08 Quantidade: Semanal: 130 caixas (aproximadamente), Mensal: 520 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos extra 2 Coleta 22/12/2008: Nome do Produtor: Diomar Wolfgram Endereço: Sitio Canto do Sabia corrego São Sebastião do Meio s/n zona rural - Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Data de Fabricação: 22/12/08 Quantidade: Semanal: 150 caixas (aproximadamente), Mensal: 550 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos extra 3 Coleta 15/01/2009: Nome do Produtor: Isidoro Reink Endereço: Sitio São Sebastião, São Sebastião, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: Data de Fabricação: 09/01/09 Quantidade: Semanal: 85 caixas (aproximadamente), Mensal: 340 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos extra

3 4 Coleta 22/01/2009: Nome do Produtor: Eitel Fosch Endereço: sitio Fosch, São Sebastião, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Data de Fabricação: 15/01/09 Quantidade: Semanal: 60 caixas (aproximadamente), mensal: 240 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos grande 5 Coleta 05/02/2009: Nome do Produtor: Claudia Marcia Ruas Silva Endereço: Sitio Esperança, Corrego São Sebastiao do Meio, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Data de Fabricação: 05/02/09 Quantidade: Semanal: 125 caixas (aproximadamente), Mensal: 500 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos grande 6 Coleta 19/02/2009: Nome do Produtor: Edgar Agner Endereço: Sitio São João Corrego São João do Garrafão, zona rural, Garrafão, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Data de Fabricação: 18/02/09 Quantidade: Semanal: 70 caixas (aproximadamente), Mensal: 280 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos grande 7 Coleta 05/03/2009 Nome do Produtor: Horacio Antonio Muller Endereço: sitio Muller Rod. Afonso Schwab km 1, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Data de fabricação: 04/03/09 Quantidade: Semanal: 100 caixas (aproximadamente), mensal: 400 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: grande

4 * Coleta de Swabs de Cloaca 1 Coleta 22/01/2009: Nome do Produtor: Elimar Schwambach Endereço: Sitio Dois Irmãos Schwambach, Corrego do Ouro, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: hy-line w-36 Data de nascimento: 17/04/2008 Produção: aves 2 Coleta 05/02/2009: Nome do Produtor: Horacio Antonio Muller Endereço: Sitio Muller, Rodovia Afonso Schwab, km 01, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Coleta 19/02/2009: Nome do Produtor: Manfredo Kruger Nome Fantasia: Mais ovos Endereço: Sitio Kruger, s/n, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Data nascimento: 12/06/07 4 Coleta 05/03/2009: Nome do Produtor: Hilario Roepke Endereço: Sitio Alegre, corrego São Luiz, s/n, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: IP: Data da coleta: 05/03/09 Data de nascimento: 05/03/08

5 Foto 01: Chegada dos Ovos na COOPEAVI Foto 02: Descarregamento dos Ovos na COOPEAVI

6 Foto 03: Armazenamento dos Ovos para serem encaminhados para o consumidor 3 - A seleção das granjas e coleta de ovos e Swabs de cloaca são selecionados pelo Médico Veterinário Gabriel Silva Braga CRMV: 0780/VP (Gerente de Veterinária da COOPEAVI), onde seguiu-se o cronograma tabela 01. Foto 04: Coleta dos ovos pelo Médico Veterinário

7 Foto 05: Os ovos são acondicionados em sacolas plásticas estéreis para serem encaminhadas para o Instituto Tommasi de Pesquisa e Desenvolvimento (ITPD) Foto 06: Caixa onde os Ovos e Swabs de cloaca são acondicionados para serem encaminhados ao Laboratório.

8 III - Apresentação e discussão sucinta dos principais resultados obtidos, deixando claro, os avanços teóricos, experimentais ou práticos obtido pela pesquisa. Seleção das granjas, coleta e encaminhamento das amostras biológicas: Como já citado anteriormente, a seleção dos avicultores, coleta e encaminhamento das amostras biológicas é realizado pelo Médico Veterinário Gabriel Silva Braga CRMV: 0780/VP (Gerente de Veterinária da COOPEAVI), onde é coletado 100 amostras mensal (76 ovos e 24 swabs de cloaca) Realização dos testes laboratoriais: Para realização das análises moleculares foi obtido junto ao Instituto Adolfo Lutz (IAL) um controle positivo de Salmonella enteritidis, lote 03/07, seguindo como controle padrão positivo para todas as análises realizadas. Todas as amostras biológicas é realizado tanto análise molecular como cultura microbiológica em meio SS (meio Salmonela Shiguella) para fazermos uma comparação de detecção. Foto 07: Amostras no fluxo laminar prontas para serem extraídas

9 Foto 08: Extração da gema e clara dos ovos para detecção de Salmonella enteritidis Foto 09: Amostras enriquecidas em meio BHI e Água Peptonada e após semeadas em meio SS

10 Detecção e amplificação do material genético: Para amplificação e detecção do material genético de Salmonella enteritidis, utilizamos o Kit de detecção TaqMan Salmonella enterica para amplificar o gene inva, (Applied Biosystems nº ). As reações de PCR são realizadas em um PCR em tempo real (7300 real time PCR System - Applied Biosystems). Resultados das análises moleculares: Até o presente momento todas as análises moleculares das amostras pesquisadas como ovo (tanto a gema como a clara), casca dos ovos e swabs de cloaca deram indetectável para Salmonella enteritidis, que foi confirmado posteriormente com as culturas microbiológicas (segue em anexo laudos dos exames realizados até o presente momento de alguns avicultores). Foto 10: 1) Controle positivo de Salmonela enteritidis (Adolfo Lutz) 2) Amostras de swab de cloaca do Avicultor Elimar Schwambach e controle negativo indetectável para Salmonela

11 Foto 11: 1) Controle positivo de Salmonela enteritidis (Adolfo Lutz) 2) Amostras de swab de cloaca do Avicultor Manfredo Kruger, ovos do avicultor Edgar Agner e controle negativo indetectável para Salmonela

12 Resultados das análises microbiológicas: Todas as culturas também deram indetectável para Salmonella enteritidis, principalmente cultura da gema e clara dos ovos. Já em relação a cultura de cascas dos ovos e swabs de cloaca houve o crescimento de algumas bactérias que são comuns a flora de cloaca das aves, que são Escherichia coli, Pseudomonas oryzihahitans, Leclecia adecarboxylata e Proteus mirabilis, como mostra as figuras abaixo. Foto 12: Placas em meio SS de swab de cloaca com crescimento bacteriano de Escherichia coli e Proteus mirabilis Foto 13: Placas em meio SS de swab de cloaca com crescimento bacteriano de Escherichia coli e Pseudomonas oryzihahitans

13 Foto 14: Placas em meio SS de swab de cloaca e casca de ovos com crescimento bacteriano de Escherichia coli e Leclecia adecarboxylata IV - Relacione os principais fatores negativos e positivos que interferiram na execução do projeto. - Fatores negativos: Falta de apoio da AVES (Associação dos Avicultores do Espírito Santo), em relação a coleta das amostras biológicas de Frangos de corte. - Fatores positivos: Total apoio e reconhecimento da Cooperativa Agropecuária Centro Serrana (COOPEAVI) sobre a importância do projeto pelos seguintes motivos: 1) Possibilidade de diagnóstico em tempo real. 2) Conhecimento preciso da qualidade sanitária dos produtos comercializados e do plantel de aves dos avicultores associados. 3) Implantação de métodos de controle que permitam a exportação de ovos.

14 V - Contatos Nacionais e Internacionais efetivamente ocorridos em função do projeto, como: convênios, pesquisadores visitantes, etc. NOME ESPECIALIDADE INSTITUIÇÃO PAÍS TIPO DE COLABORAÇÃO Júlio Huber Jornalista Jornal do Brasil Matéria sobre o Agronegócio - Projeto ES VI - Informe os trabalhos publicados e/ ou aceitos para publicação no período, relacionados com o projeto em pauta: livros, capítulos de livros, artigos em periódicos nacionais e internacionais, resumos em congressos, reuniões científicas e semelhantes. Anexe a primeira página dos trabalhos publicados (observar a necessidade de citação da FAPES como agência de suporte financeiro da publicação). O Projeto em si e seus resultados serão apresentados neste ano em um congresso a nível Nacional na área de avicultura. Vitória ES 03/08/2011 Dr. Fabrício Antônio Ferreira Martins, MSc Coordenador de Virologia e Bacteriologia Molecular do InstitutoTommasi R. Dr. Jair de Andrade, loja 02, n Itapuã - Vila Velha - ES CEP Tel.FAX: Cel: CV: