Revista Interdisciplinar de Ciências Médicas - Anais - Teresina-PI CNPJ: / Registro: ISSN X

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1 AVALIAÇÃO IN VITRO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE EXTRATOS ETANÓLICOS DA FOLHA DE AZADIRACTHA INDICA SOUSA, P.C.M 1 ; BRITO, M. C.S 1 ; HOLANDA, E.C 1 ; SILVA, L.C 1 ; RIBEIRO, A.B 2. 1 Discente do Curso de Farmácia da Universidade Federal do Piauí; 2 Docente do Curso de Farmácia da Universidade Federal do Piauí. RESUMO Introdução: Azaractha indica é uma planta da família Meliaceae, popularmente conhecida como Nim da Índia, que tem preferência por climas tropicais. Dentre as diversas propriedades da planta é possível destacar a atividade antimicrobiana como promissora para o desenvolvimento de medicamentos. Este trabalho teve como foco avaliar o potencial antimicrobiano do extrato etanólico e metanólico das folhas de A. indica frente a bactérias Escherichia coli e Staphylococcus aureus por meio do método de contato direto. Metodologia: A atividade antibacteriana foi realizada pelo método de contato direto, no Laboratório de Alimentos - Farmácia da UFPI. Resultado e discussão: Na concentração de 2000 µg/ml ocorreu uma inibição da cepa de S. aureus nas duplicatas. Em contrapartida, com a E.coli houve a formação de colônias agregadas, pois essas possuem a membrana externa menos susceptíveis a substâncias. Além disso, A. indica é solúvel em água podendo ser obtida com eficiência por extração com metanol. Conclusão: Na concentração de 2000 µg/ml ocorreu inibição evidente da cepa de S. aureus em ambas as repetições. Contudo, não ocorreu resultado ao analisar os da E. coli. Essa diferença de atividade antimicrobiana pode estar relacionada a atividade biológica dos produtos testados e a constituição da parede celular Palavras-chave: Escherichia coli; Planta medicinal; Potencial antimicrobiano. ABSTRACT Introduction: Azaractha indica is a plant of the family Meliaceae, popularly known as Nim of India, which has preference for tropical climates. Among the various properties of the plant, it is possible to highlight an antimicrobial activity as promising for the development of drugs. This work focused on the antimicrobial potential of the ethanolic and methanolic extract of the leaves of A. indica against bacteria Escherichia coli and Staphylococcus aureus by means of the direct contact method. Methodology: The antibacterial activity was performed by direct contact method, in the Laboratory of Food - Pharmacy of the UFPI. Results and discussion: At the concentration of 2000 μg / ml, an inhibition of the S. aureus strain occurred in the duplicates. On the other hand, with E.coli there was the formation of aggregated colonies, since these have the outer membrane less susceptible to substances. In addition, A. indica is water soluble and can be obtained efficiently by extraction with

2 methanol. Conclusion: At the concentration of 2000 μg / ml, evident inhibition of the S. aureus strain occurred in both replicates. However, no result was obtained by analyzing those of E. coli. This difference in antimicrobial activity may be related to the biological activity of the products tested and the constitution of the cell wall. Keywords: Escherichia coli; Medicinal plant; Antimicrobial potential. INTRODUÇÃO A Azadirachta indica pertencente à família Meliaceae, popularmente conhecida como nim é uma planta típica da Índia, sendo amplamente cultivada na África, Austrália e América Latina, apresenta crescimento considerável chegando a medir de 10 a 25 metros, tem preferência por climas tropicais e tolera longos períodos de seca (ROSA et al., 2010). Em virtude disso, torna-se uma árvore bem adaptada ao clima tropical semiárido característico do Piauí, a planta quando adulta fornece sombra, que a torna muito importante para o processo de arborização e sua madeira é resistente a atividade do cupim.( BRASIL, 2013). Os extratos biologicamente ativos podem ser produzidos das diferentes partes da planta como: folhas, sementes, frutos e tronco. Dentre as substâncias que podem ser extraída destaca-se a azadiractina, principal substância tóxica de nim, é um tetranotriterpenoide (limonóide) (CARVALHO et al.,2008). Este trabalho teve como objetivo ampliar os estudos referentes ao potencial antimicrobiano dos extratos etanólico e metanólico das folhas de Azadirachta indica frente a bactérias Escherichia coli e Staphylococcus aureus utilizando o método de contato direto. METODOLOGIA As folhas de Azadirachta indica foram coletadas no bloco de Farmácia na Universidade Federal do Piauí- Campus Petrônio Portela, no município de Teresina- PI, aproximadamente às 07:30 AM, no período de estação seca. O experimento foi dirigido no laboratório de Alimentos no bloco do curso de Farmácia na própria universidade,durante os meses de agosto a novembro de Em seguida foram armazenadas e encaminhadas para o laboratório, onde foram retirados as folhas que tinham deterioração visível e posterior higienização. Após as folhas foram razuradas para que facilitasse a perda de água e armazenadas em béqueres que foram encaminhadas para estufa (BIOPAR ) e mantidas em uma temperatura de até 60 C, no qual foi constatado, que o peso da amostra se manteve constante. O material seco foi triturado em um homogeneizador doméstico (ARNO, modelo Pereorma Magiclean) e tamizado (Granutest -ABNT 20 ) em abertura 0,85mm. O pó obtido foi misturado com etanol

3 absoluto na proporção 1:20 (m/v), sendo o mesmo procedimento para o solvente metanol,e armazenados em frasco âmbar. Em seguida, o macerado obtido foi colocado em uma bomba de filtração à vácuo e concentrado em um evaporador rotativo sob pressão reduzida (rotaevaporador Fisaton 802, São Paulo-SP), com temperatura média de 40ºC para eliminação total do solvente alcoólico e obtenção do extrato etanólico e metanólico bruto das folhas de A. indica. Após o processo de rotaevaporação, as soluções foram mantida em baixa temperatura (entre 4ºC e 10ºC), sob o abrigo de luz, e envolto por papel alumínio. No preparo da amostra foi determinado um valor padrão de μg/ml. A partir desse valor foi utilizado uma proporção de 1:5 no qual se obteve um valor de 2000 μg/ml. A atividade antibacteriana foi realizada pelo método de contato direto. Os testes antibacterianos foram realizados com cepas bacterianas Staphylococcus aureus (ATCC, 25922); Escherichia coli (ATCC,25923). RESULTADO E DISCUSSÃO No presente estudo, o extrato da planta Azadiractha indica foram utilizados para verificação da atividade antimicrobiana frente às bactérias de S. aureos e E. coli (Tabela 01). Tabela 1.Porcentagem de inibição dos extratos de Azadiractha indica frente a microrganismos. Bactérias Metanol Etanol S. aureos 28,40 23,33 E. coli Fonte: Laboratório de Alimentos, Farmácia-UFPI. Alunos de Farmácia, A tabela 1 apresenta os resultados das atividades antimicrobianas dos extratos de A. indica, demonstrando o que já foi visto na literatura, que cepas de S. aureus são sensíveis a certas concentrações do extrato da folha de A. indica.na concentração de 2000 µg/ml ocorreu uma inibição da cepa de S. aureus nas duplicatas. Assim, observa-se a inibição de 28,40% para o extrato de metanol e para o etanol 23,88% com S. aureus. Em contrapartida, com a E.coli houve a formação de colônias agregadas, impedindo a verificação da formação de unidades de colônias. Em relação cepa E. coli, bactéria Gram negativa, não houve significativa inibição, pois essas possuem a membrana externa menos susceptíveis a algumas substâncias. Esse fato ocorre devido o caráter hidrofílico da membrana celular externa dessas bactérias, que atua como barreira à permeabilidade de várias substâncias (NIKAIDO et al, 1985).

4 A S. aureus por tratar-se de uma Gram positiva, se caracteriza por apresentar menor resistência a diversos tipos de toxinas e substâncias antimicrobianas de maneira geral. Apesar de apresentarem espessa camada formada por várias camadas de peptideoglicano, ácido lipotecoicos e teicoicos e proteínas, possuem uma estrutura mais simples, tornando-as menos resistentes (ARAÙJO, 2010). Um dos fatores que afeta a eficiência de um extrato é o solvente extrator. Desta forma, os valores da mortalidade poderão estar associados à forma de extração com o metanol, pois por apresentar uma alta polaridade, pode tornar o extrato mais ativo. Entretanto, isso pode variar a partir da estrutura vegetal (TRINDADE et al.,2000). A A. indica é solúvel em água podendo ser obtida com eficiência por extração com metanol (Brasil,2013). A. indica extraída em etanol e quando testados em metanol, apresentaram melhores resultados frente a este. A menor atividade antimicrobiana relacionada ao etanol pode estar relacionada à sua baixa polaridade, na qual uma maior quantidade de substâncias inativas, como açúcares e taninos, poderiam ter sido extraídas, e, portanto, causado uma diluição das substâncias ativas do extrato (NEVES et al.,2012). CONCLUSÃO Na concentração de 2000 µg/ml ocorreu inibição evidente da cepa de S. aureus em ambas as repetições 1 e 2. Contudo, não ocorreu resultado satisfatório ao analisar os resultados da E. coli. Essa diferença de atividade antimicrobiana pode estar relacionada não só a atividade biológica dos produtos testados, como também a diferença na constituição das bactérias Gram negativas em relação às Gram positivas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ARAÚJO,N. R. R. Avaliação in vitro da atividade antimicrobiana de extratos vegetais sobre microrganismos relacionados a lesão de mucosite oral. Universidade Federal do Pará. Belém, BITTENCOURT,A. M; O CULTIVO DO Nim indiano (Azadirachta indica)]: uma visão econômica. Universidade Federal do Paraná. Curitiba, 2006 BRASIL, R B. Aspecto botânicos, usos tradicionais e potencialidades de Azadirachta indica( Neem). Centro Cientifico Conhecer, v.9, n. 17, p , Set CARVALHO, G A; et al. Efiicencia do óleo de nim (Azadirachta indica A. juss) no controle de Brevicoryne brassicae ( LINNAEUS,1758) e Myzus persicae ( SULZER, 1776) (HEMIPTERA APHIDIDAE) em couve-manteiga Brassica oleracea Linnaeus var.acephala. Universidade Federal de Lavras, Departamento de Entomologia, v..75, n. 2, p Abr/Jun 2008.

5 MOSSINI, S,A G; KEMMELMEIER, C. A arvore Nim (Azadirachta indica A. juss): múltiplos usos. Acta Farm. Bonaerense, v. 24, n. 1, p , Dez ROSA,M,F; et al. Determinaçao da ação hipoglicemiante da Azadirachta indica, A. juss(neem) aclimatada no Brasil. Cientifica eletrônica de medicina veterinária, v. 8, n. 15.