Rogério Pereira Xavier. Orientadora: Drª. Glícia Maria Torres Calazans. Co-orientadora: Drª. Francisca Janaína Soares Rocha

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1 Universidade Federal de Pernambuco Centro de Ciências Biológicas Curso de Biomedicina Co-orientadora: Drª. Francisca Janaína Soares Rocha Ocorrência de contaminação por bactérias e por protozoários patogênicos intestinais em águas de consumo nas comunidades rurais do município de Tuparetama-PE Rogério Pereira Xavier Orientadora: Drª. Glícia Maria Torres Calazans

2 Introdução Água é um recurso natural essencial à vida de todos os seres humano e à manutenção de todos os ecossistemas; A água abrange quase quatro quintos da superfície terrestre; mas apenas 0,3% do volume total da água do planeta pode ser aproveitado para o consumo (REIS, 2005; FUNASA, 2006); De 1950 a 2001, a população mundial duplicou, passando de 2,3 bilhões para 5,3 bilhões de habitantes, com o consumo de água aumentando de km 3 para km 3 anuais (MMA,2002); A água, usada para consumo humano, deve apresentar características sanitárias e toxicológicas adequadas, por isso deve ser isenta de organismos patogênicos e de substâncias tóxicas (ZANCUL, 2006);

3 Introdução Organismos patogênicos são: bactérias, vírus, helmintos e protozoários (ZANCUL, 2006); Segundo dados da OMS e Unicef cerca de crianças com idade inferior a 5 anos morrem por dia, devido à falta de acesso à água potável e à ausência de saneamento básico; O problema na qualidade de água se agrava no semi-árido nordestino, em especial em comunidades rurais, na maioria destas não existe saneamento básico adequado.

4 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Pesquisa em comunidades rurais e cisternas Blackburn et al. (2005) Analisaram a potabilidade de cisterna de telhado e calçadão na região de atuação da Diaconia no semi-árido nordestino; Sem tratamento: das 10 cisternas de telhado, 8 apresentaram coliformes totais e 4 Escherichia coli. Nas cisternas de calçadão, 7 apresentaram contaminação por coliformes totais e 4 por E.coli; Com tratamento: cisternas de telhado, 3 apresentaram coliformes totais e 1 E.coli. As cisternas de calçadão apresentaram ausência de coliformes totais e E.coli nas 10 cisternas analisadas após tratamento com cloro.

5 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Schüring & Schwientek (2005) Avaliaram águas de 44 cisternas de telhado e 27 de calçadão em comunidades rurais no sertão de Pernambuco; Cisternas de telhado: todas estavam fora do padrão de potabilidade exigido para coliformes totais; Cisternas calçadão: apenas uma estava ausente de contaminação por coliformes totais; De todas as cisternas analisadas: detectado cistos de Entamoeba histolytica/dispar, oocistos de Cryptosporidium sp e cistos de Giardia lamblia numa escala de 8, 6 e 2 cisternas analisadas, respectivamente.

6 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Kato et al. (2006) Analisaram água de consumo de 20 cisternas na localidade de Poço Redondo-SE; Foi encontrado coliformes termotolerantes em 19 das 20 cisternas analisadas. Pádua et al. (2006) Analisaram água de 16 cisternas na zona rural do município Araçuí-MG, em função do tempo de construção da cisterna; Das 8 cisternas novas, com apenas um ciclo de chuva, 55% apresentaram Escherichia coli; Das 8 cisternas antigas, com mais de 2 ciclos de chuva, 79% apresentaram Escherichia coli.

7 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Bactérias utilizadas na avaliação microbiológica de água potável Grupo coliforme Indicador de poluição da água; A maioria pertence aos gêneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella Enterobacter; Bacilos Gram-negativos da família Enterobacteriaceae fermentam a lactose com produção de gás a 35,0 ± 0,5 C em horas e que podem apresentar atividade da enzima β-galactosidase; O Grupo coliforme pode ser dividido em dois subgrupos: coliformes totais e coliformes termotolerantes

8 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Bactérias utilizadas na avaliação microbiológica de água potável Escherichia coli É uma bactéria do grupo coliforme que fermenta lactose e manito com produção de ácido e gás a 44,5 C em 24 horas, produz indol partir do triptofano, oxidade negativa, apresenta atividades da enzimas β galactosidase e β glucoronidase; E. coli é um membro da microbiota normal do homem; Considerada o mais especifico indicador de contaminação feca recente e de eventual presença de organismos patogênicos.

9 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Protozoários patogênicos intestinais Giardia lamblia Entamoeba histolytica/dispar Cryptosporidium sp Isospora belli

10 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Princípio dos métodos Substrato cromogênico e fluorogênico Coliformes totais B D- Galactosidase ONPG Substância cromogênica ONPG - Orto nitrofenil B-D galactopiranosídeo Escherichia coli B - Glucoronidase MUG 4 Methylumbelliferone (fluorescência a UV 366nm) MUG- 4-Methylumbelliferyl-β-D glucuronide

11 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Método de Hoffman, Pons & Janer Sedimentação espontânea de partículas para o fundo do cálice de sedimentação, devido à força da gravidade; Coloração com lugol Cisto de Giardia lamblia, é oval, amarelo ou, raramente, azulado, apresentando membrana cistica evidente; Cisto de Entamoeba histolytica/dispar apresenta o núcleo bem visível e variam de um a quatro, tomando a cor castanhoescuro.

12 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Método de Kinyoun Coloração dos oocistos de Cryptosporidium sp e Isospora belli; Na microscopia o espectro vai de róseo até púrpura intenso; Dentro do oocistos de Cryptosporidium sp são visíveis quatro esporozoítos; Dentro dos oocistos de Isospora belli é visível um esporoblasto, ou 2 esporocistos.

13 Revisão bibliográfica e fundamentos teóricos Portaria N 518, de 25 de março de 2004/MS Estabelece os procedimentos e responsabilidades relativas ao controle e vigilância da qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade. A portaria no seu capitulo IV, Art 11, determina que: Água para consumo humano: ausência de Escherichia coli ou coliformes termotolerantes em 100mL; Recomenda-se a inclusão de pesquisa de organismos patogênicos, com o objetivo de atingir, como meta, um padrão de ausência, dentre outros, de enterovírus, cistos de Giardia spp e oocistos de Cryptosporidium sp.

14 Área de Estudo Tuparetama -PE Origem Localização População Clima

15 Área de Estudo Cisternas Programa 1MCR Construção de cisternas de placas Dicas importante para construção Problemas de contaminação de água de cisternas

16 Área de Estudo

17 Área de Estudo Pote de barro Origem Função Problemas

18 Objetivos Geral Verificar de acordo com a Portaria vigente, a qualidade da água para consumo humano armazenada em cisternas e potes de barro em comunidades rurais do município de Tuparetama-PE. Específicos Pesquisar a presença de coliformes totais, E. coli e protozoários patogênicos intestinais nas águas de consumo de comunidades rurais de Tuparetama; Indicar comparativo entre os resultados da água de cisternas e potes para evidenciar onde ocorre maior contaminação; Realizar pesquisa sobre os cuidados que os moradores das comunidades rurais apresentam com suas águas de consumo; Estabelecer uma campanha de conscientização nas comunidades rurais, enfatizando a importância do tratamento e do manejo adequado da água bem como os riscos do consumo de água considerada não potável.

19 Material e Métodos Coletas e amostragem 7 comunidades pesquisadas Coleta de água em 66 residências Cisterna de telhado Pote de barro Procedimentos de coleta Análise microbiológica: Frascos de vidro Schott Duran Análise de parasitológica: Frascos de plásticos

20 Material e Métodos Pesquisa de coliformes totais e Escherichia coli Substrato definido cromogênico Readycult Coliforms 100, da Merck Recipiente de vidro de Schott Duran com 100mL de água; Adicionado uma cápsula do teste Readycult Coliforms 100 da Merck; Recipiente fechado e levemente agitado a fim de dissolver completamente o substrato na amostra; Incubado em caixas térmicas com monitoração da temperatura entre 20 a 25 ºC durante 48 horas.

21 Material e Métodos Amostra negativa para coliformes totais Amostra positiva para coliformes totais

22 Material e Métodos Pesquisa de cistos de Giardia lamblia e Entamoeba histolytica/dispar Método de Hoffman Colocar 500mL de água no cálice de sedimentação; Deixar em repouso a temperatura ambiente durante 24h; Com uma pipeta de pasteur, retira do sedimento 50mm³ de água para fazer um esfregaço delgado e homogêneo sobre a lâmina; Acrescenta lugol e cobriu o material com lamínula; Observar ao microscópio utilizando os aumentos de 10X e 40X para identificação.

23 Material e Métodos Etapas de coloração do sedimento com lugol

24 Método de Kinyoun Preparar um esfregaço homogêneo, delgado e identificado em uma lâmina nova desengordurada, limpa e seca; Deixar secar à temperatura ambiente; Cobrir com Fucsina 3 a 5 minutos; Lavar rapidamente; Diferenciar com álcool ácido até não sair mais corante; Contra corar com azul de metileno de 30s a 1min; Lavar com água; Colocar a lâmina com o esfregaço para cima, sobre o papel limpo, para secar à temperatura ambiente ou estufa a 35º C; Observar ao microscópio com objetiva de imersão (100 x). Material e Métodos Pesquisa de oocistos de Cryptosporidium sp e Isospora belli

25 Material e Métodos Medidas de ph Fita indicador ph-indikatorstäbchen Universalindikator da Merck; Copo descartável com água da cisterna ou pote; Coloca-se uma fita indicador de ph ate cobrir a parte de medição, esperar por 1 a 10 minutos até não ocorrer mais mudanças de cores; Retirar e realizar a medição conforme as cores impressa na caixa de fitas.

26 Resultados e Discussão Pesquisa de coliformes em cisternas e potes de barro Origem da amostra Contaminação bacteriológica Coliformes totais e E.coli Somente coliformes totais Ausência de contaminação Cisterna de telhado Pote de barro

27 taminação residência Contaminação em cisternas Coliformes totais e E. coli Somente coliformes totais Ausência de contaminação Coliformes totais e E. coli Contaminação em potes Somente coliformes totais Ausência contamina SEM ALTERAÇÃO NOS RESULTADOS DA CISTERNA PARA O POTE casas casas CONTAMINAÇÃO MAIOR NO POTE asas asas casas CONTAMINAÇÃO MAIOR NA CISTERNA asas asas AUSÊNCIA DE CONTAMINAÇÃO NA CISTERNA E POTE asas

28 Resultados e Discussão Pesquisa de protozoários patogênicos intestinais em cisternas e potes de barro Contaminação com protozoários patogênicos intestinais por residência 7,6% 4,5% 68,2% 19,7% Cisterna não/ pote não Cisterna sim/ pote não Cisterna não/ pote sim Cisterna sim/ pote sim

29 Resultados e Discussão Pesquisa de protozoários patogênicos intestinais em cisternas e potes de barro Prevalência dos protozoários patogênicos intestinais em todas as amostras de águas pesquisadas Protozoários pesquisados Amostras positivas (%) Cisto de Giardia lamblia Cisto de Entamoeba histolytica/dispar Oocisto de Cryptosporidium sp Oocisto de Isospora belli ,8 4,5 15,9 1,5

30 Cisterna Pote Resultados e Discussão Pesquisa de protozoários patogênicos intestinais em cisternas e potes de barro Registro de protozoários Comparação de água de cisterna e pote Protozoários pesquisados Isospora belli Cryptosporidium sp E. histolytica/dispar Giardia lamblia Número total

31 Resultados e Discussão Determinação do ph Valores médios Valores de ph da água de cisterna 6,69 Valores de ph da água de pote 6,43

32 Resultados e Discussão Análise do questionário Questão 01. Número de pessoas por residências? otal de pessoas atendidas: 265 édia de 4 pessoas por residência Questão 02. A residência do Sr./Sra. possui banheiro com fossa? im: 65% Não: 35% Questão 03. Qual o destino da água utilizada na residência? Jogada a céu aberto 100% das residências Questão 04. Qual o destino do lixo produzido na residência? Queimado 100% das residências

33 Resultados e Discussão Questão 05. O Sr./Sra adiciona cloro ou água sanitária na cisterna? ão 76% loro 12% gua sanitária 12% Questão 06. Qual o tratamento da água de consumo no pote de barro? ão trata 47% lora 48% iltra 5% Questão 07. Como o Sr./Sra avalia a qualidade da sua água de consumo? Ótima 9% Boa 77% Regular 8% Ruim 5% Questão 08. O Sr./Sra acha que pode contrair doenças através da sua água de consumo? Sim 56% Não 44%

34 Perspectivas futuras Resultados e Discussão Palestras educativas nas comunidades; Confecção e distribuição de panfletos; Capacitação dos agentes comunitários de saúde e agentes ambientais de saúde; Parcerias com Rádios da cidade; Voluntários. Parceria com Escolas Escola Municipal Anchieta Torres Escola e comunidade nas águas da integração Escola Municipal José Agustinho

35 Resultados e Discussão Principais problemas encontrados Grandes distâncias percorridas; Excessiva carga de trabalho; Transporte de material; Informações imprecisas por parte dos moradores; Dificuldades em encontrar algumas casas com os moradores.

36 Conclusões O trabalho demonstra claramente que é possível se obter água captada através de chuva e armazená-la sem contaminação com E.coli e de alguns parasitos patogênicos, utilizando medidas de tratamento simples e efetivas; No entanto, a falta de cuidados com a higiene das mãos e utensílios usados no contato direto com essas águas estocadas colaboraram para a ausência de potabilidade nas águas analisadas; Falta de saneamento básico adequado como possível fonte de contaminação; Necessidade de trabalhos de educação e conscientização visando a melhoria da qualidade da água consumida pela população rural de Tuparetama.

37 Obrigado!!!!!!!