DIVERSIDADE GENÉTICA EM GENÓTIPOS DE AÇAIZEIRO TIPO VIOLÁCEO E TIPO BRANCO POR MARCADORES SSR

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1 DIVERSIDADE GENÉTICA EM GENÓTIPOS DE AÇAIZEIRO TIPO VIOLÁCEO E TIPO BRANCO POR MARCADORES SSR MARIA DO SOCORRO PADILHA DE OLIVEIRA ; ELICIANY DE NAZARÉ MIRANDA SANCHES INTRODUÇÃO O açaizeiro (Eutere oleracea Mart.) aresenta inúmeras variações fenotíicas nas áreas de ocorrência natural, dentre elas a coloração dos frutos maduros, denominados de açaí roxo ou violáceo e açaí verde ou branco (OLIVEIRA et al., 000). O rimeiro roduz bebida de coloração violácea consolidada no mercado local, nacional e internacional, e com rograma de melhoramento focado na seleção de matrizes que deu origem a cultivar BRS Pará (OLIVEIRA; FARIAS NETO, 004). O segundo ossui frutos verdes e ola de coloração creme-esverdeada, cujo reço do litro é duas vezes mais caro que o do violáceo, mesmo assim seu mercado é local e regional e abastecido elo extrativismo. Portanto, investimentos que ossam ocasionar avanços nos rogramas de melhoramento genético dessa almeira ara o tio violáceo, como também estimular rogramas ara o tio branco, devem ser rioritários. Marcadores moleculares têm sido utilizados ara atender vários objetivos, dentre eles a quantificação da diversidade, da divergência e da variabilidade genética, sendo a interretação feita or meio de medidas de similaridade ou dissimilaridade e quase semre visualizada or métodos de agruamento (FERREIRA; GRATTAPAGLIA, 995). Vários marcadores moleculares têm sido usados ara acessar o genótio e a variabilidade do DNA nas lantas, or identificar o olimorfismo e associar a genes de efeito maior (MILACH, 998), como os roduzidos or locos microssatélites ou SSRs (Simle Sequence Reeats). Esses marcadores moleculares são esecíficos, codominantes e têm sido usados na identificação varietal de frutíferas (SCHUCK et al., 00), na caracterização do olimorfismo, entre outros. Para o açaizeiro há um relato sobre SSR na caracterização do olimorfismo e na quantificação da variabilidade genética em 6 acessos (OLIVEIRA et al., 00). O objetivo desse trabalho foi quantificar a diversidade genética em genótios de açaizeiro tio violáceo e branco or marcadores SSR. MATERIAL E MÉTODOS Foram retirados folíolos jovens de 9 genótios de açaizeiro tio branco selecionados ao acaso em uma área isolada do banco de germolasma da Embraa Amazônia Oriental, em Belém, ¹ Eng, Agr., Pesquisadora da Embraa Amazônia Oriental, PA, sadilha@catu.embraa.br ² Aluna de graduação em Agronomia da Universidade Rural da Amazônia. elydoors@hotmail.com 4663

2 PA e de 9 genótios de tio violáceo selecionados dentro da cultivar BRS Pará com alta rodução de frutos ara a extração de DNA genômico. As 58 amostras foram quantificadas em gel de agarose a % corado com brometo de etídio utilizando-se três adrões de DNA do fago λ (50, 00 e 00 ng.μl - ) e diluídas em TE ara a concentração de 0 ng.μl -. As amostras foram genotiadas ara sete locos SSR transferíveis de E. edulis ara E. oleracea (GAIOTO et al., 00) e usados com sucesso or Oliveira et al. (00). O volume das reações foi de 7µL, constituído or: (35 ng de DNA genômico total; 50 μm de cada dntp; 0,8 µm de cada ar de loco (Foward e Reverse); 0 mg.ml - de BSA; unidade de Taq olimerase; e tamão contendo MgCl. As amlificações foram realizadas em termociclador My Genie 96 Gradient Th, rogramado conforme Oliveira et al. (00). Os rodutos da amlificação foram searados em gel de oliacrilamida a 6%, em eletroforese vertical or duas horas e revelados em nitrato de rata. Deois, foram escaneados, as imagens armazenadas ara contagem dos alelos e, osteriormente lidas como bandas ara a obtenção da matriz binária. O nível de olimorfismo em cada tio foi obtido no software TFPGA v.,3. O conteúdo de informação de olimorfismo (PIC) com base na equação: PIC = - i e t i= i t i= j+ t j= i j, onde j são as freqüências do i-ésimo e do j-ésimo alelos em um loco com t alelos em cada tio. As estimativas de similaridades genéticas foram obtidas elo coeficiente de Jaccard e agruadas or genótios de cada tio no rocedimento SAHN do software NTSYS-c. elo método UPGMA. RESULTADOS E DISCUSSÃO Todos os sete locos SSR foram olimórficos e de fácil identificação nos géis (Figura ). Tais locos amlificaram de 56 e 64 alelos, com variação de 4 a 3 e de 3 a 9 alelos or loco e média de 8,0 e 9,3 alelos nos tios violáceo e branco, resectivamente (Tabela ). As heterozigosidades foram altas ara os dois tios (0,83 a,0=violáceo e 0,76 a,0=branco), com médias iguais (0,9). O conteúdo de informação de olimorfismo (PIC) também foi alto ara a maioria dos locos, variando de 0,50 a 0,84 e com média de 0,7 nos dois tios. De acordo com Weir (996), altos valores de heterozigosidades e de PIC reresentam alta diversidade genética, odendo-se considerar que os genótios dos dois tios de açaizeiro sejam detentores de alta variabilidade nos locos testados e que esses locos sejam eficientes na discriminação desses dois tios. Resultados similares foram obtidos or Conte et al. (006), Gaiotto et al. (003) e Oliveira et al. (00) ao alicarem os mesmos locos em oulações de E. edulis e em acessos de E. oleracea. As similaridades genéticas variaram de 0, a 0,78 e de 0,5 a 0,7 entre os ares de genótios do tio branco e violáceo, resectivamente, o que reresenta amla variabilidade genética 4664

3 nos gruos de genótios dos dois tios, sendo ossuidores de genomas distintos. Oliveira et al. (00) encontraram amla distância genética ao analisarem 6 acessos do tio violáceo. Figura - Perfil de um gel de oliacrilamida com o loco EE8 contendo os alelos amlificados nos 9 genótios de açaizeiro tio branco. Tabela - Caracterização do nível de olimorfismo nos genótios de açaizeiro do tio violáceo e tio branco da Embraa Amazônia Oriental com base nos sete ares de locos microssatélites. Tio Violáceo (n=9) Tio Branco (n=9) Locos Ta ( o C) N o. alelos Ho PIC N o. alelos Ho PIC EE 5 4,00 0,50 3 0,97 0,50 EE ,86 0,69 6 0,86 0,64 EE ,90 0,84 0 0,76 0,84 EE ,83 0,80 9,00 0,83 EE ,90 0,66 0,97 0,73 EE ,97 0,7 7 0,93 0,70 EE ,00 0,80 9 0,97 0,77 Total Média - 8,0 0,9 0,7 9,3 0,9 0,7 Ta: temeratura de anelamento; Ho: heterozigosidade observada; : conteúdo de informação de olimorfismo. Os dendrogramas formaram aroximadamente seis gruos com vários subgruos nos dois tios (Figura ). Para tio violáceo (A), cujos genótios já sofreram quatro ciclos de seleção fenotíica, foi observada alta similaridade genética aenas entre dois ares ( x 3 e 9 x 3). Enquanto ara o tio branco (B) foi obtida em aenas um ar (6 e 7). Os valores cofenéticos foram altos (r= 0.79) nos dois tios evidenciando alta confiabilidade na formação dos gruos. O mesmo número de gruos foram obtidos or Oliveira et al. (00) ao avaliarem 6 acessos. CONCLUSÃO Marcadores SSR são eficientes na quantificação da diversidade genética nos genótios dos dois tios de açaizeiro, odendo inclusive discriminá-los. Aesar do equeno número de locos foi ossível detectar alto índice de olimorfismo. 4665

4 Figura - Dendrogramas de similaridades genéticas entre os 9 genótios de açaizeiro do tio violáceo (A) e tio branco (B), definidos elo método UPGMA, com base no coeficiente de Jaccard. REFERÊNCIAS CONTE, R.; REIS, M.S.; VENCOVSKY, R. Effects of management on the genetic structure of Eutere edulis Mart. oulations based on microsatellites. Scientia Forestalis, Piracicaba, v.7,.8-88, 006. FERREIRA, M.; GRATTAPAGLIA, D. Introdução ao uso de marcadores RAPD em análise genética.. ed. Brasília: EMBRAPA-CENARGEN GAIOTTO, F. A.; GRATTAPAGLIA, D.; VENCOVSKY, R. Genetic structure, mating system, and long-distance gene flow in heart of alm (Eutere edulis Mart.) Journal Heredit, Carey, v.94, , 003. MILACH, S. C. K. Princiais tios de marcadores moleculares e suas características. In: MILACH, S. C. K. Marcadores moleculares em lantas. Porto Alegre: UFRGS OLIVEIRA, M. do S. P. de; CARVALHO, J. E. U. de; NASCIMENTO,W. M. O. do. Açaí (Eutere oleracea Mart.). Série frutas nativas. Jaboticabal: FUNEP OLIVEIRA, M. do S. P. de; FARIAS NETO, J. T. de. Cultivar BRS-Pará: açaizeiro ara rodução de frutos em terra firme. Belém: Embraa Amazônia Oriental. 3. (Embraa Amazônia Oriental. Comunicado técnico, 4)

5 OLIVEIRA, M. do S. P. de; SANTOS, J. B. dos; AMORIM, E. P.; FERREIRA, D.F. Variabilidade genética entre acessos de açaizeiro utilizando marcadores microssatélites. Ciência & Agrotecnologia, Lavras, v. 34, n. 5, SCHUCK, M.R; MOREIRA, F.M; VOLTOLINI, J.A; GUERRA, M.P; GRANDO, M.S; SILVA, A.L da. Identificação molecular da uva Goethe de Urussanga SC or marcadores microssatélites. Revista Brasileira de Fruticultura, Jaboticabal, v.3, n.3, , 00. WEIR, B. S. Genetic data analysis: methods for discretion oulation genetic data. Sunderland: Sinauer Associates,