CONTROLE BIOLOGICO E QUÍMICO DE NEMATÓIDES EM CANA DE ACÚCAR. Rita de Cássia Lima Mazzuchelli 1 ; Fabio Fernando de Araújo 2.

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1 Encontro de Ensino, Pesquisa e Extensão, Presidente Prudente, 22 a 25 de outubro, CONTROLE BIOLOGICO E QUÍMICO DE NEMATÓIDES EM CANA DE ACÚCAR Rita de Cássia Lima Mazzuchelli 1 ; Fabio Fernando de Araújo 2. 1 Engenheira Agrônoma, Mestranda do Curso de Pós Graduação em Agronomia da UNOESTE. 2 Eng. Agrônomo Professor Doutor UNOESTE. E mail: ritamazzuchelli@yahoo.com.br. RESUMO O objetivo do presente trabalho é de avaliar a aplicação de Bacillus subtilis como controle biológico de nematoides em cana de açúcar (variedades SP e RB867515) comparando com o controle químico convencional (Carbofuran). O experimento está sendo conduzido na Usina Alto Alegre Unidade Floresta Presidente Prudente, em uma área com histórico de infestação de nematoides, no município de Caiabu. Encontrou se em média 280 nematoides a cada 100g de solo, sendo 180 do gênero Meloidogyne, 100 do gênero Pratylenchus. Os tratamentos foram controle, Bacillus subtilis AP 3 aplicados no sulco de plantio, Bacillus subtilis AP 3 aplicados trinta dias após o plantio e tratamento químico com carbofuran no sulco de plantio. O delineamento empregado foi de blocos ao acaso com cinco repetições. O controle biológico de nematoides através da aplicação de Bacillus subtilis no momento do plantio da cana de açúcar proporcionou controle de nematoides de maneira semelhante ao controle químico com Carbofuran. Palavras chave: Controle biológico; controle químico; fitonematóides. INTRODUÇÃO A cana de açúcar (Saccharum spp.) é uma das culturas mais importantes no cenário nacional, devido ser a matéria prima utilizada pela indústria sucroalcooleira para a produção de seus dois principais produtos o açúcar e o álcool (BENETT et al., 2011). Já foram encontradas mais de 275 espécies de nematoides parasitos de plantas, filiadas a, pelo menos, 48 gêneros em raízes e no solo da rizosfera da cana de açúcar (DINARDO MIRANDA et al., 1996). Além do dano causado pela utilização de nutrientes das plantas os nematoides do gênero Meloidogyne acarretam grandes danos ao sistema radicular, estes parasitos injetam toxinas resultando em deformações galhas, tornando o o mal desenvolvido e pouco eficiente, consequentemente podem ocorrer reduções na produtividade da área agrícola (MOURA et al., 1999; DINARDO MIRANDA, 2005). Os nematoides do gênero Pratylenchus penetram e saem livremente das raízes, já que não há nenhuma fase ou estágio que possa ser denominado infestante. Eles penetram as raízes, nutrem se das células causando lesões pequenas, mas que aumentam gradualmente. Os mesmos acarretam aberturas nas raízes, onde penetram fungos e bactérias patogênicas. Estes nematoides

2 Encontro de Ensino, Pesquisa e Extensão, Presidente Prudente, 22 a 25 de outubro, abandonam o sistema radicular quando encontram condições desfavoráveis, migrando para o solo. (LORDELLO, 1986). A aplicação de nematicidas diminui o número de nematoides, contribuindo assim para um melhor desenvolvimento das plantas, aumentando a sua produtividade na ordem de 15% para variedades suscetíveis (DINARDO MIRANDA et al., 1995), porém a utilização de nematicidas químicos nem sempre têm sido satisfatórias, evidenciando assim necessidades de pesquisas na área (BARROS, et al., 2000). Dinardo Miranda et al. (1995) concluíram que a utilização do nematicida do grupo químico do carbofurano resultou em evidente redução das populações de nematoides nas raízes, resultando em incrementos significativos na produção. Dentre as bactérias envolvidas na supressividade de patógenos nos solos Bacillus subtilis é a mais estudada (BETTIOL et al., 2009). Em experimento em casa de vegetação Cardozo e Araújo (2009) observou que a utilização de Bacillus subtilis promoveu o crescimento das plantas e a redução de nematoides do gênero Meloidogyne em cana de açúcar. O objetivo do presente trabalho foi o de avaliar a aplicação de Bacillus subtilis como controle biológico de nematoides em cana de açúcar (variedades SP e RB867515) comparando com o controle químico convencional (Carbofuran). METODOLOGIA O experimento foi desenvolvido na Usina Alto Alegre Unidade Floresta Presidente Prudente, em uma área com histórico de infestação de nematoides, no município de Caiabu a uma latitude 22º00'44" sul e a uma longitude 51º14'08" oeste, a uma altitude de 520 metros. Foram retiradas amostras de solo e encaminhadas ao laboratório de Microbiologia da Unoeste para identificação de espécies de fitonematoides e contagem populacional. Encontrou se em média 280 nematoides a cada 100g de solo, sendo 180 do gênero Meloidogyne, 100 do gênero Pratylenchus. Foi utilizada no experimento a estirpe AP 3 de Bacillus subtilis, descrita como produtora de antibióticos e promotora de crescimento de plantas (ARAUJO et al., 2005) a qual foi multiplicada no laboratório de Microbiologia da Universidade do Oeste Paulista UNOESTE, por sete dias, a 28 C em meio sólido de ágar nutriente. Após este período as células foram raspadas e transferidas para 100 ml de água esterilizada a qual foi agitada com objetivo da completa dissolução da bactéria, formando uma suspensão homogênea com concentração aproximada de 1,0 x 10 9 células por ml.

3 Encontro de Ensino, Pesquisa e Extensão, Presidente Prudente, 22 a 25 de outubro, Foram utilizadas no experimento duas variedades de cana de açúcar susceptíveis a ação de nematoides, SP e RB (MARIN, 2012). A aplicação do controle biológico foi efetivado com quatro tratamentos: controle, Bacillus subtilis AP 3 aplicados no sulco de plantio, Bacillus subtilis AP 3 aplicados trinta dias após o plantio. Como referência de controle de nematoides foi também efetivado o tratamento químico com carbofuran no sulco de plantio. A suspensão de células bacterianas (100 ml) obtida anteriormente foi dissolvida em 12,5 litros de água, aplicando se 0,250 litros para 10 metros lineares de sulco de plantio. O tratamento químico com carbofuran foi realizado dissolvendo 0,6 litros do produto comercial, em 18 litros de água, aplicando 0,360 litros para 10 metros lineares de sulco de plantio. O delineamento empregado foi de blocos ao acaso com cinco repetições. Cada parcela possuía 6 metros de largura, por 10 metros de comprimento com cinco sulcos espaçados a 1,5 m. Considerando três sulcos centrais de cada parcela, para as avaliações, para tentar minimizar o efeito da bordadura. A área total para cada variedade possui 62 metros de comprimento por 31,5 metros de largura. Para o plantio da cana de açúcar, foram distribuídos nos sulcos dois colmos, cruzando a ponta de um colmo com o pé do outro, proporcionando uma distribuição de 17 a 20 gemas por metro linear de sulco. As mudas de cana depositadas no fundo do sulco foram cortadas em toletes com 2 a 3 gemas, aplicados os tratamentos e após o recobrimento de solo com máquina. Aos 90 dias após o plantio foi realizada coleta de amostras em três pontos de cada parcela, constituindo em uma amostra composta de solo e raízes para análise da população de nematoides. A extração dos nematoides das raízes foi realizada em alíquotas de 20 g de cada amostra pela técnica de COOLEN & D HERDE (1972), efetuada imediatamente após as coletas. Os nematoides do solo foram extraídos de alíquotas de 100 cm 3 pela técnica de JENKINS (1964). Após será realizada a contagem com auxílio da câmara de Peters, no microscópio óptico, para análise de nematoides dos gêneros Meloidogyne e Pratylenchus. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo programa SISVAR, sendo utilizado o teste Skott Knott a 5% para comparação das médias. RESULTADOS A população de nematoides do gênero Meloidogyne aos 90 dias nos tratamentos com Carbofuran e a rizobactéria aplicada no momento do plantio diferiram significativamente em relação ao tratamento com a rizobactéria aplicada após 30 dias do plantio e do controle para a variedade SP , o controle proporcionado pelo tratamento com carbofuran e a rizobactéria

4 Encontro de Ensino, Pesquisa e Extensão, Presidente Prudente, 22 a 25 de outubro, aplicada no plantio proporcionaram uma redução de 50% no número de nematoides nas raízes. Para a variedade RB todos os tratamentos realizados diferiram significativamente do controle, apresentando uma redução no número de nematoides em torno de 47% referentes ao controle (Tabela 1). Os nematoides do gênero Pratylenchus apresentaram os menores valores populacionais na avaliação realizada aos 90 dias nos tratamentos com carbofuran, rizobactéria aplicada no sulco no momento do plantio, seguidos pela aplicação da rizobactéria aos 30 dias na pós emergência, já o controle apresentou os maiores valores populacionais em ambas as variedades utilizadas no experimento (Tabela 1). Na variedade SP os tratamentos com carbofuran e rizobactéria aplicada no momento do plantio diminuíram a infestação de Pratylenchus na ordem de 55% em relação ao controle. Para a variedade RB os tratamentos com carbofuran e rizobactéria aplicada no sulco de plantio proporcionaram redução de 57% para o tratamento controle. Tabela 1: Número de nematoides do gênero Meloidogyne e Pratylenchus encontrados no solo aos 90 dias após o plantio do experimento referente às variedades SP e RB Meloidogyne spp. Pratylenchus spp. SP RB SP RB Tratamentos Formas ativas em 100 cm 3 de solo Carbofuran 112,0 b 1 128,0 b 240,0 c 240,0 c Rizobactéria no sulco de plantio 144,0 b 144,0 b 272,0 c 224,0 c Rizobactéria em pós emergência 224,0 a 160,0 b 400,0 b 336,0 b Controle 288,0 a 272,0 a 576,0 a 544,0 a 1. Médias seguidas de mesma letra não diferem estatisticamente pelo teste Scott Knott (5%). Os tratamentos com carbofuran, e rizobactéria aplicada no sulco no momento do plantio, e na pós emergência apresentaram os menores valores populacionais de nematoides do gênero Meloidogyne nas raízes em relação ao controle na variedade SP , diminuindo a infestação nas raízes em torno de 37%. Para a variedade RB os menores valores populacionais foram encontrados para o tratamento com carbofuran e a rizobactéria aplicada no momento do plantio, que reduziram em 40% o número de nematoides nas raízes comparadas ao controle (Tabela 2). Para os nematoides do gênero Pratylenchus sua população nas raízes das plantas não apresentaram diferenças nos tratamentos, inclusive ambas as variedades utilizadas no experimento (Tabela 2).

5 Encontro de Ensino, Pesquisa e Extensão, Presidente Prudente, 22 a 25 de outubro, TABELA 2: Número de nematoides do gênero Meloidogyne e Pratylenchus encontrados nas raízes aos 90 dias após o plantio do experimento referente às variedades SP e RB Meloidogyne spp. Pratylenchus spp. SP RB SP RB Tratamentos Formas ativas em 50 g de raízes Carbofuran 276,0 b 1 204,0 b 240,0 a 1 204,0 a Rizobactéria no sulco de plantio 312,0 b 300,0 b 240,0 a 264,0 a Rizobactéria em pós emergência 360,0 b 346,0 a 276,0 a 252,0 a Controle 504,0 a 420,0 a 312,0 a 288,0 a 1. Médias seguidas de mesma letra não diferem estatisticamente pelo teste Scott Knott (5%). DISCUSSÃO Os resultados obtidos no estudo evidenciam um controle de nematoides através da aplicação de Bacillus subtilis, o que demonstra que a produção de substâncias tóxicas ou repelentes realizadas por rizobactérias podem desestimular a penetração ou alimentação de nematoides (FREITAS, 2001). Conforme o constatado por Silveira (2001) as rizobactérias podem atuar na infectividade, virulência e agressividade do patógeno, e também nos processos de infecção, desenvolvimento de sintomas e reprodução. Este fato foi evidenciado por Araújo et al. (2002) que constatou que a utilização de Bacillus subtilis afeta a orientação dos nematoides, reduzindo a migração para a raiz, já que o B. subtilis interfere na produção de exsudados das raízes, que servem como orientação para nematoides, alterando assim a reprodução e orientação do parasita em direção as raízes, diminuindo a sua população. A aplicação do nematicida Carbofuran também reduziu a população de nematoides no experimento, efeito semelhante foi observado por Dinardo Miranda e Fracasso (2010) que constataram que a aplicação do nematicida Carbofuran reduziu a população de nematoides dos gêneros Meloidogyne e Pratylenchus em avaliação realizada aos 90 dias após o plantio de cana deaçúcar. CONCLUSÃO O controle biológico de nematoides através da aplicação de Bacillus subtilis no momento do plantio da cana de açúcar proporcionou controle de nematoides de maneira semelhante ao controle químico com Carbofuran.

6 Encontro de Ensino, Pesquisa e Extensão, Presidente Prudente, 22 a 25 de outubro, REFERÊNCIAS ARAÚJO, F.F.; BETTIOL, W. Supressividade dos nematoides Meloidogyne javanica e Heterodera glycines em soja por adição de lodo de esgoto ao solo. Ciência Rural, v.35, p , ARAÚJO, F.F; SILVA, J.F.V.; ARAÚJO, A.S.F. Influência de Bacillus subtilis na eclosão, orientação e infecção de Heterodera glycines em soja. Ciência Rural, v.32, n.2, p , BARROS, A.C.B.; MOURA, R.M.; PEDROSA, E.M.R. Aplicação de Terbufos no controle de Meloidogyne incognita Raça 1 e Pratylenchus zeae em cinco variedades de cana de açúcar no nordeste. Parte 1 Efeitos na cana planta. Nematologia Brasileira, v. 24(1) p BENETT, C.G.S.; BUZETTI, S.; SILVA, K.S.; TEIXEIRA FILHO, M.C.M.; GARCIA, C.M.P.; MAESTRELO, P.R. Produtividade e desenvolvimento da cana planta e soca em função de doses e fontes de manganês. R. Bras. Ci. Solo, 35: , BETTIOL, W.; GHINI, R.; MARIANO, R.R.L.; MICHEREFF, S.J.; MATTOS, L.P.V.; ALVARADO, I.C.M.; PINTO, Z.V. Supressividade a fitopatógenos habitantes do solo. In: BETTIOL, W; MORANDI, M.A.B. Biocontrole de doenças de plantas: Uso e perspectivas. Jaguariúna: EMBRAPA. p CARDOZO, R. B.; ARAUJO, F. F. Multiplicação de Bacillus subtilis em vinhaça e viabilidade no controle da meloidoginose, em cana de açúcar. Revista Brasileira de Engenharia Agrícola e Ambiental, Campina Grande, v. 15, n. 6, p , COOLEN, W.A. & C.J. D HERDE. A method for the quantitative extraction of nematodes from plant tissue. State Nematology and Entomology Research Station, Ghent Belgium, 77 p FREITAS, L.G. Rizobactérias versus nematóides Online Disponível em: Acesso em: jun DINARDO MIRANDA, L. L.; MORELLI, J. L.; LANDELL, M. G. A.; SILVA, M. A. Comportamento de genótipos de cana de açúcar em relação a Pratylenchus zeae. Nematologia Brasileira, v. 20, n. 2, p DINARDO MIRANDA, L. L.; NOVARETTI, W.R.T.; MORELLI, J.L.; NELLI, E.J. Comportamento de variedades de cana de açúcar em relação a Meloidogyne javanica em condições de campo. Nematologia Brasileira, 19: DINARDO MIRANDA, L. L. Nematoides e pragas de solo em cana de açúcar. Encarte de informações agronômicas Nº 110. Potafos. P

7 Encontro de Ensino, Pesquisa e Extensão, Presidente Prudente, 22 a 25 de outubro, DINARDO MIRANDA, L. L.; FRACASSO, J.V. Efeito da torta de mamona sobre populações de nematoides fitoparasitos e a produtividade da cana de açúcar. Nematologia Brasileira, Vol. 34(1) 2010 JENKINS, W.R. A rapid centrifugal flotation technique for separating nematodes from soil. Plant Disease Report, 48: LORDELLO, L. G. E. Nematoides das Plantas Cultivadas. São Paulo Nobel 8º edição 1º reimpressão, 314 p., MARIN, F.R. Variedades de cana. Disponível em: deacucar/arvore/contag01_42_ html Acessado em: 26/03/2012. MOURA, R.M.; PEDROSA, E.M.R.; MARANHÃO, S.R.V.L.; MOURA, A.M.; MACEDO, M.E.; SILVA, E.G. Nematoides associados à cana de açúcar no estado de Pernambuco. Nematologia Brasileira, v. 23 (2), p