Abbott. Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II B2N /R Abbott Laboratories/Printed in Germany

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1 Abbott mtm Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II Abbott Molecular Inc E. Touhy Ave. Des Plaines, IL ABBOTT Max-Planck-Ring Wiesbaden Germany Abbott Laboratories/Printed in Germany B2N /R1 Fevereiro 2007

2 NOTAS Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

3 Índice Introdução Declaração de propriedade Declarações de registo de marcas Descrição Princípios de funcionamento Tipos de amostra Precauções de manuseamento Zona de preparação dos reagentes Zona de preparação das amostras Zona de amplificação Contaminação e inibição Materiais e equipamentos necessários Descartáveis Materiais adicionais Abbott msample Preparation System - Reagentes (Nº Lista 4J70-24) Instruções de conservação Protocolo de extracção Preparação Lise mwash 1 Passo mwash 1 Passo mwash 2 Passo mwash 2 Passo melution Primeira etapa melution Segunda etapa Limpeza Resumo do protocolo Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II i

4 NOTAS ii Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

5 Introdução Abbott Molecular agradece a sua preferência pelo Abbott msample Preparation System no seu laboratório. Faremos o possível para responder a todas as necessidades do seu laboratório. Para usufruir do serviço de assistência técnica, contactar o seu Representante Abbott. Este manual inclui a seguinte informação: Declaração de propriedade, página 2 Descreve situações para utilização da informação, documentos e gráficos neste manual. Declarações de registo de marcas, página 2 Descrição, página 3 Princípios de funcionamento, página 3 Tipos de amostra, página 3 Precauções de manuseamento, página 4 Materiais e equipamentos necessários, página 8 Instruções de conservação, página 10 Protocolo de extracção, página 10 Limpeza, página 16 Resumo do protocolo, página 17 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 1

6 Declaração de propriedade Declarações de registo de marcas Todos os conteúdos deste manual estão protegidos pelos direitos de autor (2007) de Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois. Reservam-se todos os direitos. Todos os nomes de produtos e marcas registadas de Abbott Laboratories são da propriedade ou patente de Abbott Laboratories, respectivas subsidiárias ou afiliadas. É expressamente proibida a utilização de marcas registadas, designações comerciais e nomes de produtos Abbott, sem a prévia autorização por escrito de Abbott Laboratories, excepto para a identificação de produtos ou serviços de Abbott Laboratories. Todas as outras marcas registadas, designações comerciais, nomes de produtos e nomes comerciais são propriedade das respectivas companhias. Reservam-se todos os direitos. Com excepção do caso referido em epígrafe, não será concedida qualquer licença ou direito, expresso ou implícito, sob qualquer patente, marca registada ou outro direito de propriedade de Abbott Laboratories. Abbott é uma marca comercial registada de Abbott Laboratories. m, m2000sp e RealTime são marcas comerciais de Abbott Laboratories. 2 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

7 Descrição O objectivo da preparação da amostra é a extracção e concentração das moléculas do ARN alvo, tornando-as acessíveis para amplificação e, ainda, para eliminar do extracto potenciais inibidores da amplificação. O msample Preparation System é constituído por um conjunto de reagentes para a extracção de ácidos nucleicos. Estes reagentes são utilizados nos sistema automáticos m2000sp e podem, ainda, ser utilizados num formato manual, conforme a descrição que se segue. Princípios de funcionamento Durante a preparação das amostras, mmicroparticles e mlysis são adicionados ao número necessário de cuvetes de reacção. Cada uma das amostras é adicionada a uma das cuvetes de reacção e, depois, incubada. Durante a incubação a 50 C, ocorre a lise e os ácidos nucleicos são adsorvidos para as micropartículas na solução mlysis. Após a incubação, um íman é aplicado à cuvete de reacção para capturar as micropartículas e o sobrenadante da lise é eliminado. Numa série de passos as soluções de lavagem mwash 1 e mwash 2 são adicionadas às micropartículas isentas de impurezas e as soluções de lavagem são eliminadas. O melution Buffer é, então, adicionado às cuvetes de reacção que são, então, incubadas a 75 C para permitir que os ácidos nucleicos se separem das micropartículas. A solução de lavagem mwash 2 é adicionada, um íman é aplicado e a amostra eluída é transferida para um tubo ou uma placa de 96 poços para continuar o processamento. Tipos de amostra O protocolo descrito baseia-se em métodos automáticos desenvolvidos para alvos de ARN viral em plasma ou soro humanos. Para conhecer os tipos de amostra adequados, consultar as instruções de utilização do ensaio Abbott RealTime HCV Gentoype II. Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 3

8 Precauções de manuseamento Zona de preparação dos reagentes Durante a preparação das amostras, é essencial respeitar as boas práticas de laboratório para minimizar o risco de contaminação cruzada entre as amostras e, ainda, a introdução inadvertida de nucleases (RNases, DNases) nas amostras antes, durante e após o procedimento de extracção. Devem ser sempre utilizadas as técnicas assépticas adequadas para o trabalho com ácidos nucleicos. As reacções de amplificação como a PCR são sensíveis à introdução acidental de produto de reacções de amplificação anteriores. Para informações sobre a separação das actividades e zonas exclusivas, consultar as instruções de utilização do ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II. A zona de preparação dos reagentes destina-se exclusivamente à preparação dos componentes do reagente de PCR para criação da master mix de amplificação e, ainda, à transferência de alíquotas da master mix para a placa de 96 poços. As batas, as pipetas, as pontas de pipeta e os misturadores vortex utilizados na zona de preparação dos reagentes têm de permanecer nesta zona e não podem ser transferidos de uma zona para a outra. 4 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

9 Zona de preparação das amostras A zona de preparação das amostras destina-se exclusivamente ao processamento de amostras e controlos e, ainda, à sua adição à placa de 96 poços. Todos os reagentes utilizados na zona de preparação das amostras têm de permanecer sempre nesta zona. As batas, as pipetas, as pontas de pipeta e os misturadores vortex utilizados na zona de preparação das amostras têm de permanecer nesta zona e não podem ser transferidos de uma zona para a outra. Não transportar produto de amplificação para a zona de preparação das amostras. AVISO: potencial perigo biológico. Nenhum método de ensaio pode garantir de forma absoluta que os produtos de origem humana ou microrganismos inactivados não transmitam infecção. Assim, todos os materiais de origem humana devem ser considerados potencialmente infecciosos. Recomenda-se que estes reagentes e as amostras humanas sejam manuseados de acordo com as indicações da OSHA (Standard on Blood borne Pathogens). Devem ser utilizadas medidas de biosegurança de nível 2 ou outras práticas de biosegurança adequadas para materiais que contenham ou sejam suspeitos de conter agentes infecciosos. As precauções incluem, embora não se limitem, o seguinte: Utilizar luvas ao manusear amostras ou reagentes. Não pipetar com a boca. Não comer, beber, fumar, aplicar cosméticos ou manusear lentes de contacto em locais onde estes materiais sejam manuseados. Limpar e desinfectar os salpicos de amostras utilizando um desinfectante tuberculicida, como uma solução de hipocloreto de sódio a 1,0% ou outro desinfectante adequado. Descontaminar e eliminar todas as amostras, reagentes e outros materiais potencialmente contaminados de acordo com os regulamentos aplicáveis. Todos os materiais devem ser manipulados de modo a minimizar a potencial contaminação da zona de trabalho. Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 5

10 Regra geral, ao manusear substâncias químicas, tomar as seguintes precauções: Para instruções e precauções de utilização, consultar as fichas de segurança. Evitar o contacto com a pele e os olhos. Caso se preveja o contacto com o material, utilizar luvas impermeáveis, vestuário protector e protecção para os olhos. Manter o laboratório sempre arrumado. Não comer, beber ou armazenar comida e bebidas em zonas onde sejam utilizados químicos. Se após exposição surgir irritação ou sinais de toxicidade, consultar o médico. Zona de amplificação A zona de amplificação destina-se exclusivamente à amplificação PCR e à detecção de produto amplificado. As placas de 96 poços seladas são transferidas da zona de preparação das amostras e colocadas no termociclador. As batas e o equipamento utilizado na zona de amplificação têm de permanecer nesta zona e não podem ser transferidos de uma zona para a outra. 6 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

11 Contaminação e inibição As precauções que se seguem devem ser observadas para minimizar os riscos de contaminação da nuclease, contaminação cruzada entre amostras, contaminação com produto amplificado e inibição. Utilizar sempre o equipamento de protecção pessoal adequado. Utilizar luvas isentas de talco. Trocar de luvas após contacto com potenciais contaminantes (amostras, eluições e/ou produto amplificado). Todas as pipetagens manuais têm de ser realizadas com pontas de pipeta esterilizadas e com barreira contra aerossóis. As pontas de pipeta só podem ser utilizadas uma vez. Os reagentes do Abbott msample Preparation System não podem ser reutilizados. Eliminar os reagentes remanescentes no final de cada protocolo. O mlysis, mwash 1, mwash 2, melution Buffer e mmicroparticles podem ser eliminados em conformidade com as normas do laboratório. NOTA: o material amplificado por PCR não é degradado pelo autoclave e pode contribuir para a libertação de material amplificado aquando da abertura da placa selada ou do tubo. A zona do laboratório pode ficar contaminada com produto amplificado, se os resíduos não forem cuidadosamente manuseados e conservados antes e após o processamento. Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 7

12 Materiais e equipamentos necessários Descartáveis Materiais adicionais Pontas de pipeta esterilizadas, com barreira contra aerossóis, µl Pontas de pipeta esterilizadas, com barreira contra aerossóis, 200 µl Pontas de pipeta repetidora esterilizada de 5 ml para dispensação de volumes de 100 µl Cuvetes de reacção de polipropileno de 12 x 75 mm (Nº de Lista 04J71-20 ou equivalente) Tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml e tampas (Nº Lista 04J71-50 ou equivalente) Pipetas descartáveis esterilizadas de 5 ml Placa de 96 poços de polipropileno (opcional) Suportes magnéticos para tubos de 12 x 75 mm Suportes magnéticos para tubos de 1,5 ml Suportes não-magnéticos para tubos de 12 x 75 mm Suportes não-magnéticos para tubos de 1,5 ml Bloco de secagem para tubos de 12 x 75 mm (para temperatura de 50 C) Bloco de secagem para tubos de 1,5 ml (para temperatura de 75 C) Termómetro Temporizador Enchedor de pipetas ou dispositivo similar Pipeta de precisão ajustável, µl Pipeta de precisão ajustável, 200 µl Pipeta repetidora para dispensação de volumes de 100 µl Centrífuga com capacidade para g 8 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

13 Contentor de resíduos líquidos (os resíduos líquidos não podem entrar em contacto com a lixívia). Consultar Limpeza, página 16, para avisos e precauções. Contentor de resíduos sólidos Batas Luvas descartáveis e isentas de talco Material de protecção dos olhos Câmara de segurança biológica adequada para trabalho com materiais infecciosos, se necessário. Abbott msample Preparation System - Reagentes (Nº Lista 4J70-24) Abbott Lysis Buffer (mlysis) (MD130A) Abbott Wash Buffer 1 (mwash 1) (MD131A) Abbott Wash Buffer 2 (mwash 2) (MD132A) Abbott Elution Buffer (melution) (MD133A) Abbott Microparticles (mmicroparticles) (MD134A) Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 9

14 Instruções de conservação Protocolo de extracção Conservar o Abbott msample Preparation System e os seus componentes conforme as instruções na rotulagem. Um Abbott msample Preparation System inclui 4 x 24 preparações. Uma placa de reagentes tem capacidade para processar 24 amostras. Retirar os frascos da placa e inverter cuidadosamente os frascos do Abbott msample Preparation para obtenção de uma solução homogénea. Se aquando da abertura de qualquer um dos frascos de reagente forem observados cristais, deixar o reagente repousar à temperatura ambiente até ao desaparecimento dos cristais. Não utilizar os reagentes sem que os cristais se tenham dissolvido. Consultar Resumo do protocolo, página 17, como guia deste protocolo. Completar cada passo para cada amostra antes de prosseguir com o passo numérico seguinte. Preparação 1. Ligar os blocos de secagem de temperatura controlada. a. Programar o bloco de cuvetes de reacção de 12 x 75 mm para 50 C. b. Programar o bloco de tubos de 1,5 ml para 75 C. 2. Rotular todos os tubos que vão ser necessários. a. Uma cuvete de reacção de 12 x 75 mm por amostra para o passo mlysis 1. b. Um tubo de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml por amostra para os passos mwash 1, mwash 2 e melution Buffer. c. Um tubo de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml por amostra ou uma placa de 96 poços de polipropileno para a eluição. 3. Verificar a temperatura dos blocos de aquecimento. Não prosseguir até que os blocos de aquecimento atinjam a temperatura correcta. 4. Adicionar controlo interno de 2,0 ml ao frasco de mlysis. O frasco de mlysis contém 70 ml. São utilizados 2,4 ml para cada extracção. 10 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

15 ! 5. Após a adição do controlo interno ao frasco de mlysis, voltar a tapar o frasco e misturar por inversão cuidadosa 5-10 vezes. Aviso: para evitar danos físicos, seguir as instruções do fabricante do bloco de aquecimento. Para evitar queimaduras, desligar a corrente e deixar os blocos de aquecimento arrefecer até aos 35 C, ou temperatura inferior, antes de os manusear. Lise 1. Voltar a suspender as mmicroparticles agitando cuidadosamente o frasco para trás e para a frente até que as partículas estejam novamente em suspensão e já não haja partículas no fundo do frasco. 2. Colocar as cuvetes de reacção de 12 x 75 mm num suporte não-magnético à temperatura ambiente. Após a ressuspensão das partículas, adicionar 100 µl de mmicroparticles a cada uma das cuvetes de reacção de 12 x 75 mm, utilizando para tal uma pipeta repetidora de 5 ml com capacidade de dispensação de alíquotas de 100 µl. 3. Utilizando uma pipeta descartável esterilizada de 5 ml, adicionar 2,4 ml de mlysis a cada cuvete de reacção de 12 x 75 mm no suporte não-magnético. 4. Utilizando uma pipetador de precisão adequado e pontas de pipeta com barreira contra aerossóis, adicionar a quantidade pretendida de amostras (amostras e controlos) às cuvetes de reacção de 12 x 75 mm e homogeneizar a mistura amostra-lise aspirando e dispensando com a pipeta de transferência até que se obtenha uma suspensão uniforme. NOTA: para informação relativa à preparação de amostras, consultar as instruções de utilização do ensaio HCV Genotype II. Para o ensaio RealTime HCV Genotype II, centrifugar as amostras a g durante 5 minutos, caso estas se apresentem turvas ou com partículas em suspensão. NOTA: o volume de amostra pode variar entre 0,2 ml ou 0,5 ml, conforme as indicações das instruções de utilização do ensaio. Processar amostras e controlos de modo equivalente. 5. Após a adição de todas as amostras ao mlysis e sua homogeneização, colocar os tubos no bloco de aquecimento a 50 C. Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 11

16 6. Iniciar o temporizador e incubar todos os tubos durante 20 minutos a 50 C. 7. Após a conclusão da incubação a 50 C, colocar as cuvetes de reacção de 12 x 75 mm num suporte magnético durante 2 minutos para permitir a captação das partículas na parte lateral do tubo. 8. Com os tubos no suporte magnético de captura, utilizar uma nova pipeta limpa de 5 ml para cada amostra para cuidadosamente retirar o lisado de cada um dos tubos e eliminar o líquido para dentro do contentor dos resíduos líquidos. Remover a maior quantidade possível de líquido. NÃO tocar ou aspirar as partículas magnéticas capturadas. 9. Retirar as cuvetes de reacção de 12 x 75 mm do suporte magnético e transferi-los para o suporte não-magnético. mwash 1 Passo 1 1. Utilizando uma ponta de pipeta de 1000 µl nova para cada amostra, adicionar 700 µl de mwash 1 às amostras e ressuspender as partículas magnéticas na solução de lavagem através de cuidadosa aspiração e dispensação com a ponta de pipeta. Se necessário, soltar as partículas da lateral do tubo. NOTA: ao adicionar os tampões de lavagem, dispensar o líquido lentamente para evitar os salpicos. 2. Transferir a solução de lavagem e as partículas para um tubo de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml e correctamente rotulado. 3. Colocar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml no suporte de captura magnética durante um minuto para permitir a captura das partículas na lateral dos tubos. 4. Utilizando uma ponta de pipeta de 1000 µl nova para cada amostra, retirar o mwash 1 dos tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml e eliminar o líquido para o contentor de resíduos líquidos. Remover a maior quantidade possível de líquido. NÃO tocar ou aspirar as partículas magnéticas capturadas. 5. Retirar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml do suporte magnético e transferi-los para o suporte não-magnético. 12 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

17 mwash 1 Passo 2 mwash 2 Passo 1 1. Utilizando uma ponta de pipeta de 1000 µl nova para cada amostra, adicionar 700 µl de mwash 1 às amostras e ressuspender as partículas magnéticas na solução de lavagem através de cuidadosa aspiração e dispensação com a ponta de pipeta. Se necessário, soltar as partículas da lateral do tubo. 2. Colocar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml no suporte de captura magnética durante um minuto para permitir a captura das partículas na lateral dos tubos. 3. Utilizando uma ponta de pipeta de 1000 µl nova para cada amostra, retirar o mwash 1 dos tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml e eliminar o líquido para o contentor de resíduos líquidos. Remover a maior quantidade possível de líquido. NÃO tocar ou aspirar as partículas magnéticas capturadas. 4. Retirar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml do suporte magnético e transferi-los para o suporte não-magnético. 1. Utilizando uma ponta de pipeta de 1000 µl nova para cada amostra, adicionar 700 µl de mwash 2 às amostras e ressuspender as partículas magnéticas na solução de lavagem através de cuidadosa aspiração e dispensação com a ponta de pipeta. Se necessário, soltar as partículas da lateral do tubo. 2. Colocar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml no suporte de captura magnética durante um minuto para permitir a captura das partículas na lateral dos tubos. 3. Utilizando uma ponta de pipeta de 1000 µl nova para cada amostra, retirar o mwash 2 dos tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml e eliminar o líquido para o contentor de resíduos líquidos. Remover a maior quantidade possível de líquido. NÃO tocar ou aspirar as partículas magnéticas capturadas. 4. Retirar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml do suporte magnético e transferi-los para o suporte não-magnético. Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 13

18 mwash 2 Passo 2 melution Primeira etapa 1. Utilizando uma ponta de pipeta de 1000 µl nova para cada amostra, adicionar 700 µl de mwash 2 às amostras e ressuspender as partículas magnéticas na solução de lavagem através de cuidadosa aspiração e dispensação com a ponta de pipeta. Se necessário, soltar as partículas da lateral do tubo. 2. Colocar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml no suporte de captura magnética durante um minuto para permitir a captura das partículas na lateral dos tubos. 3. Utilizando uma ponta de pipeta de 1000 µl nova para cada amostra, retirar o mwash 2 dos tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml e eliminar o líquido para o contentor de resíduos líquidos. Remover a maior quantidade possível de líquido. NÃO tocar ou aspirar as partículas magnéticas capturadas. 4. Retirar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml do suporte magnético e transferi-los para o suporte não-magnético. 1. Utilizando uma ponta de pipeta de 200 µl nova para cada amostra, adicionar 34 µl de melution Buffer às amostras e ressuspender as partículas magnéticas na solução através de aspiração e dispensação com a ponta de pipeta. Se necessário, soltar as partículas da lateral do tubo. 2. Manter os tubos individuais no suporte não-magnético até que o melution Buffer tenha sido adicionado a todas as amostras. 3. Colocar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml no bloco de aquecimento a 75 C e incubar durante 20 minutos. 4. Retirar os tubos do bloco de aquecimento a 75 C e voltar a colocá-los no suporte não-magnético. 14 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

19 melution Segunda etapa 1. Utilizando uma ponta de pipeta de 200 µl nova para cada amostra, adicionar 85 µl de mwash 2 às amostras e ressuspender as partículas magnéticas na solução através de aspiração e dispensação com a ponta de pipeta. Se necessário, soltar as partículas da lateral do tubo. 2. Manter os tubos individuais num suporte não-magnético até que o mwash 2 tenha sido adicionado a todas as amostras. 3. Colocar os tubos de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml no suporte de captura magnética durante um minuto para permitir a captura das partículas na lateral dos tubos. 4. Utilizando uma ponta de pipeta de 200 µl nova para cada amostra, remover a amostra eluída do tubo de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml. NÃO tocar ou aspirar as micropartículas capturadas. 5. As amostras eluídas podem ser conservadas num novo tubo de microcentrífuga (com tampa de enroscar) de 1,5 ml ou numa placa de 96 poços de polipropileno. 6. Consultar a secção Protocolo do ensaio das instruções de utilização do ensaio HCV Genotype II e prosseguir com as instruções em Zona de amplificação para iniciar a amplificação e a detecção. Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 15

20 Limpeza 1. Eliminar todos os tubos de adição de amostras e frascos de controlos em conformidade com as normas do laboratório. 2. Os reagentes do Abbott msample Preparation System não podem ser reutilizados. Os reagentes remanescentes e os resíduos líquidos têm de ser eliminados em conformidade com as normas do laboratório. AVISO: não misturar agentes oxidantes como o! hipocloreto de sódio com o mlysis, mwash 1, e mmicroparticles nos reagentes do msample Preparation System. Não misturar agentes oxidantes como hipocloreto de sódio com os resíduos líquidos. Estas misturas podem formar gases tóxicos. Se estas misturas forem mantidas em contentores fechados pode originar-se acumulação de pressão. Cada laboratório é responsável pela identificação do tipo de resíduos produzidos para garantir que estes são eliminados de acordo com a legislação aplicável. 3. Retirar e eliminar todos os materiais descartáveis e resíduos sólidos em conformidade com as normas do laboratório. 4. Limpar os suportes de amostras, os blocos de aquecimento e os suportes magnéticos enxaguando-os com uma solução hipocloreto de sódio a 0,5% durante aproximadamente 10 minutos, depois lavar cuidadosamente com água e deixar secar completamente ao ar. 5. Descontaminar e limpar a zona de trabalho em conformidade com as normas do laboratório. 16 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II

21 Resumo do protocolo Resumo do protocolo mmicroparticles, 100 µl Adicionar controlo interno e misturar mlysis, 2,4 ml mwash 1, 0,7 ml 50 C, 20 min Separação magnética Cuvete de reacção Cuvete de reacção Misturar * Amostra, 0,2 ml ou 0,5 ml (volume processado) Separação magnética TA * Com o ensaio Realtime HCV Genotype II, centrifugar as amostras a g durante 5 minutos, caso estas se apresentem turvas ou com partículas em suspensão. Repetir para um total de duas lavagens mwash 1. mwash 2, 0,7 ml Cuvete de reacção Separação magnética TA Repetir para um total de duas lavagens mwash 2. melution, (34 µl) Cuvete de reacção mwash 2, (85 µl) Cuvete de reacção Eluição (119 µl) 75 C, 20 min Separação magnética Legenda TA = temperatura ambiente Separação magnética = separação magnética das micropartículas da maior parte do sobrenadante Misturar = realização de repetidas aspirações e dispensações Figura 1.0: Resumo do protocolo Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II 17

22 NOTAS 18 Preparação manual de amostras para o ensaio Abbott RealTime HCV Genotype II