Universidade Federal de Pelotas Faculdade de Veterinária Núcleo de Pesquisa Ensino e Extensão em Pecuária Efeito da desnutrição materna durante a gestação no desenvolvimento ovariano inicial e subsequente desenvolvimento folicular em fetos de ovelhas Reproduction. IF 3,073 Apresentadores: Lauryn dos Santos Machado Marcos Rossi Orientação: Luiz Francisco Machado Pfeifer Pelotas, 10 de fevereiro de 2011
Borwick et al., 1997 Introdução
Introdução Desconhecimento de períodos em que a restrição alimentar afeta o sincron sincronizado após o tratamento, por 14 dias, com desenvolvimento pessários intravaginais ovariano progestágeno de (Chronolone, 30 mg; Intervet, fetos Cambridge). sincronizado ovinos izado após o tratamento, após o tratamento, por 14 dias, O Ovelh com pessários intravaginais sincronizado progestágeno O as expostas (Chronolone, 30 mg; Intervet, sincronizado após Cambridge). o sincronizado por 14 dias, o tratamento, após tratamento, sincronizado após o por 14 após o o tratamento, por sincronizado sincroniza tratamento, por 14 dias, velhas expostas tratamento, 14 dias, Intervet, após o do após por Intervet, o 14 dias, velhas expostas por 14 Cambridge). tratamento, dias, tratament Intervet, Cambridge). ovelhas Intervet, por 14 Cambridge). dias, o, por 14 Cambridge). Intervet, dias, expostas Cambridge). Inbridge).
Introdução Desconhecimento de períodos em que a restrição alimentar afeta o sincron sincronizado após o tratamento, por 14 dias, com desenvolvimento pessários intravaginais ovariano progestágeno de (Chronolone, 30 mg; Intervet, fetos Cambridge). sincronizado ovinos izado após o tratamento, após o tratamento, por 14 dias, O Ovelh com pessários intravaginais sincronizado progestágeno O as expostas (Chronolone, 30 mg; Intervet, sincronizado após Cambridge). o sincronizado por 14 dias, o tratamento, após tratamento, sincronizado após o por 14 após o o tratamento, por sincronizado sincroniza tratamento, por 14 dias, velhas expostas tratamento, 14 dias, Intervet, após o do após por Intervet, o 14 dias, velhas expostas por 14 Cambridge). tratamento, dias, tratament Intervet, Cambridge). ovelhas Intervet, por 14 Cambridge). dias, o, por 14 Cambridge). Intervet, dias, expostas Cambridge). Inbridge).
Objetivo Determinar os efeitos sobre o desenvolvimento ovariano em fetos asas de ovelhas expostas a desnutrição materna aplicados em diferentes estádios específicos de gravidez Períodos de gestação 00-30 dias 31-50 dias 31-65 dias 65-110 dias Diferenciação do ovário fetal Crescimento do ovário Crescimento da célula germinativa e meiose Foliculogênese
Foliculogênese? O que são folículos? Qual a função dos folículos? Quantos folículos uma ovelha possui? Ovócito Isolado Folículo Primordial Folículo Primário Folículo Secundário Folículo Pré-Antral Folículo Antral
Materiais e Métodos Todas as ovelhas foram acasaladas com um cio sincronizado após o tratamento, por 14 dias, com pessários intravaginais progestágeno (Chronolone, 30 mg; Intervet, Cambridge). Alimentação energia metabolizável (EM)
Materiais e Métodos Todas as ovelhas foram acasaladas com um cio sincronizado após o tratamento, por 14 dias, com pessários intravaginais progestágeno (Chronolone, 30 mg; Intervet, Cambridge). Alimentação energia metabolizável (EM)
Materiais e Métodos Todas as ovelhas foram acasaladas com um cio sincronizado após o tratamento, por 14 dias, com pessários intravaginais progestágeno (Chronolone, 30 mg; Intervet, Cambridge). Alimentação energia metabolizável (EM) Alta A 8 MJ 100% exigências Baixa B 4 MJ 50% exigências
Materiais e Métodos Intervalos de 21 dias Dia 80
Recolhimento e processamento de tecidos Ovelhas foram abatidas no dia 50, 65 ou 110 de prenhez; Fetos do sexo feminino foram recuperados e pesados; Ovários fetais foram removidos, pesados e preparados para análises histológicas.
Experimento 1 Ovelhas (n = 15-19 por grupo) com peso vivo médio de 59,0 ± 0,62 kg e ECC médio de 2,46 ± 0,02 ao acasalamento AA 0 50 dias BA 0 31 50 dias AB 0 31 50 dias BB 0 50 dias Abate aos 50 dias de gestação Ovários fetais foram corados por imunohistoquímica para PCNA segundo Murray (2000)
Experimento 2 Ovelhas (n = 12-13 por grupo) com peso vivo médio de 58,7 ± 0,82 kg e ECC médio de 2,44 ± 0,03 ao acasalamento AA 0 65 dias BA 0 31 65 dias AB 0 31 65 dias BB 0 65 dias 4 seções com 5 mm deabate espessura aos 65 dias de Ovários gestaçãofetais foram corados de cada ovário foram coradas por imunohistoquímica para utilizando a reação de Feulgen para contagem de células meióticas PCNA segundo Murray (2000)
Experimento 3 Ovelhas (n = 11-19 por grupo) com peso vivo médio de 59,3 ± 0,74 kg e ECC médio de 2,46 ± 0,02 ao acasalamento AAA 0 110 dias BAA 0 31 110 dias ABA 0 31 65 110 dias AAB 0 65 110 dias BBB 0 110 dias Abate aos 110 dias de gestação
Experimento 3 De cada ovário fetal, seções de 5 milímetros foram cortadas e coradas com hematoxilina e eosina. Os folículos (apenas os folículos que atravessaram ao corte o plano do núcleo do oócito) foram contados e classificados de acordo com o sistema de Lundy et al. (1999). Oócito isolado Folículo tipo 1: folículo primordial Folículo tipo 1A: folículo transitório Folículo tipo 2: folículo primário Folículo Tipo 3: folículo pré-antral pequeno Folículo Tipo 4: folículo grande com 4 ou 5 camadas de células da granulosa
Análise Estatística Análise estatística pelo método ANOVA two-way Massa fetal, massa ovariana fetal e o número de células foram analisados separadamente para cada experimento
Resultados e Discussão AA BA AB BB AA BA AB BB (a) Massa fetal em 50 dias de gestação, (b) Massa ovariana fetal com 50 dias de gestação. Indicativo Diferenças de que significativas a desnutrição em relação afeta aoo desenvolvimento AA (valores controle) no experimento: *P < 0.05; **P < 0.01. ovariano fetal somente após 30 dias de gestação.
Resultados e Discussão AA BA AB BB AA BA AB BB Efeito compensatório sobre massa ovariana fetal dos 50 aos 65 dias de gestação (c) Massa fetal com 65 dias de gestação, (d) Massa ovariana fetal com 65 dias de gestação.
Resultados e Discussão AAA BAA ABA AAB BBB AAA BAA ABA AAB BBB A desnutrição imposta na fase fetal até 110 dias de gestação não afeta a massa fetal e nem a massa ovariana fetal (e) Massa fetal com 110 dias de gestação, (f) gestação massa ovariana fetal em 110 dias de
Resultados e Discussão (Gondos, et. al, 1978), sugeriu que oogônias que entram mais tarde em meiose têm pior chance de sobrevivência Tabela 1. Número de células germinativas e porcentagem de células germinativas totais aos 65 dias pelo método de coloração Feulgen. AA BA AB BB AAA BAA ABA AAB BBB Diferenças significativas em relação ao AAA (valores controle) no experimento: *P < 0.05, ***P < 0.001 Porém, não houve diferença no número total de folículos aos 110 dias
Resultados e Discussão (Gondos, et. al, 1978), sugeriu que oogônias que entram mais tarde em meiose têm pior chance de sobrevivência Tabela 1. Número de células germinativas e porcentagem de células germinativas totais aos 65 dias pelo método de coloração Feulgen. AA BA AB BB AAA BAA ABA AAB BBB Diferenças significativas em relação ao AAA (valores controle) no experimento: *P < 0.05, ***P < 0.001 Porém, não houve diferença no número total de folículos aos 110 dias
Resultados e Discussão (a) (b) oogônia (c) célula somática (d) Imunohistoquímica Proliferação predominantemente para antígeno de proliferação de células celular germinativas nuclear (PCNA) até em o ovários dia 50 de fetos ovinos no dia 50 de gestação (a) e 65 dias de gestação (c), (b) e (d) são seções de gestação e mudança para proliferação predominantemente de representativas de IgG negativo de seções para (a) e (c), respectivamente células somáticas até dia 65 dias de gestação
Resultados e Discussão diferenças na resposta à restrição alimentar AAA BAA ABA AAB BBB AAA BAA ABA AAB BBB (a) Número de ovócitos isolados. (b) Folículos tipo 1. Diferenças significativas em relação ao AAA (valores controle) no experimento: *P < 0.05, ***P < 0.001.
Resultados e Discussão AAA BAA ABA AAB BBB AAA BAA ABA AAB BBB (c) Folículos tipo 1A. (d) Folículos tipo 2. Diferenças significativas em relação AAA (valores controle) no experimento: *P < 0.05, ***P < 0.001.
Resultados e Discussão AAA BAA ABA AAB BBB AAA BAA ABA AAB BBB (e) Folículos tipo 3. (f) Folículos tipo 4. Diferenças significativas em relação ao AAA (valores controle) no experimento: *P < 0.05, ***P < 0.001. A desnutrição imposta durante cada período gestacional reduz o desenvolvimento folicular, indicando que a transição de folículos tipo 1 para tipo 4 tenha sido inibida
Resultados e Discussão AAA BAA ABA AAB BBB (g) Total de ovócitos contados a partir de todas as classes de folículos e oócitos isolados. Diferenças significativas em relação ao AAA (valores controle) no experimento: *P < 0.05, ***P < 0.001.
Resultados e Discussão AAA BAA ABA AAB BBB Ausência de folículos tipo 5 (g) Total de ovócitos contados a partir de todas as classes de folículos e oócitos isolados. Diferenças significativas em relação ao AAA (valores controle) no experimento: *P < 0.05, ***P < 0.001.
Resultados e Discussão cnatty, (2000); não detectou receptore para McNatty, FSH e LH (2000), em estudos em estudos de ovários de de ovários fetos ovinos de fetos entre 90 dias e 35 ovinos dias de entre gestação 90 e 135 dias de gestação não detectou receptores para FSH e LH improvável que as mudanças na função pituitária fetal desempenham papel importante na mediação dos efeitos da desnutrição sobre o FSH e LH em estudos de ovários de fetos ovinos entre FSH e 90 LH dias em e estudos 135 dias de de ovários gestação de fetos ovinos entre 90 dias e 135 dias de gestação desenvolvimento ovariano fetal
Conclusão A restrição alimentar materna provocou um atraso no desenvolvimento ovariano fetal em ovinos. Este efeito não se limitou às células e aos tecidos presentes somente durante o período de desnutrição, o que indica que um desafio nutricional imposto na fase inicial do desenvolvimento fetal pode ter efeitos nas fases posteriores.
Outros resultados Tabela 2. Média de peso vivo (kg), escores de condição corporal (ECC) aos 20 meses e taxas de ovulação de fêmeas nascidas de ovelhas alimentadas para suprir 100% (A) ou 50% (B) das exigências de manutenção de peso vivo durante a prenhez Grupo de tratamento Fêmeas A B Peso vivo ECC nº de ovulações Dentro de uma coluna sobrescritos diferentes indicam diferença significativa entre os grupos de tratamento (P <0,05). LH e FSH Rae, et. al, 2002
Outros resultados Tabela 2. Média de peso vivo (kg), escores de condição corporal (ECC) aos 20 meses e taxas de ovulação de fêmeas nascidas de ovelhas alimentadas para suprir 100% (A) ou 50% (B) das exigências de manutenção de peso vivo durante a prenhez Grupo de tratamento Fêmeas A B Peso vivo ECC nº de ovulações Dentro de uma coluna sobrescritos diferentes indicam diferença significativa entre os grupos de tratamento (P <0,05). LH e FSH Rae, et. al, 2002
Geraseev, et. al 2006 Outros resultados
Muito Obrigado!