MANUAL DE COLHEITAS DE AMOSTRAS DEPARTAMENTO DA QUALIDADE
Nem todos os tipos de amostra são adequados para a realização da totalidade de testes CGC Genetics. Consulte o catálogo de análises online em e verifique os requisitos específicos para o teste que pretende realizar. NÃO ESQUECER 1. Preencher as requisições do CGC Genetics, com os dados pessoais e história clínica e familiar, referindo o tipo e motivo do exame. 2. Selar bem o tubo/contentor com parafilme ou adesivo, de modo a evitar a perda e/ou contaminação da amostra. Rotular com o nome do doente. Envio bem acondicionado à temperatura ambiente. 3. No caso de a colheita ser efectuada na véspera ou durante o fim-de-semana, aconselhamos que mantenha, até ao seu envio, o frasco da amostra à temperatura ambiente, longe de fontes de frio ou de calor. 4. Convocar um estafeta, seguindo as seguintes instruções (qualquer zona do País): Requisitar estafeta da TNT através do e-mail dcc@cgcgenetics.com ou do telefone 223 389 900 Para recolhas no próprio dia o contacto terá de ser feito das 8:30 às 12:00 H. Para recolhas no dia seguinte o contacto pode ser feito das 8:30 às 19:00 H. O envio de amostras não acarreta qualquer encargo adicional para o Colega, sendo pago pelo CGC Genetics. 2 6
DIAGNÓSTICO MOLECULAR Método Tipo de amostra Volume / Concentração Tipo de Tubo ou Suporte Análise DNA Sequenciação An. fragmentos (constitucional) asnps An. deleções/duplicações PCR quantitativo (constitucional) Paternidade/identidade Análise somática An. fragmentos PCR quantitativo Análise RNA RT-PCR Exceções Sexo fetal Rastreio de cancro de colorectal Análise de DNA Sequenciação An. fragmentos (constitucional) asnps An. deleções/duplicações An. metilação PCR quantitativo (constitucional) Paternidade/identidade Exceções Diagnóstico Pré-Natal Extração a partir de tecido c Análise de RNA Sequenciação por Sanger Sangue Periférico a DNA >3mL >10mL >3mL ou >10mL (somático) EDTA Viabilidade (dias) 5 ou 2 (somático) EDTA 2 PAXgene b 5 PAXgene b 5 >15mL EDTA 1 >100µL (50ng/µL) >20µL (25ng/µL) Eppendorf Safe-lock cdna >30µL (50ng/µL) Eppendorf Safe-lock Sequenciação por Sanger >1mL EDTA 2 Quantificação de transcritos Medula Óssea >3mL RT-PCR >1mL PAXgene b 5 Diagnóstico Pré-Natal Sequenciação por Sanger An. fragmentos An. deleções/duplicações An. metilação QF-PCR Líquido Amniótico d > 5mL Tubo estéril 4 Vilosidades coriónicas d >30mg Tubo estéril fornecido pelo CGC Cultura de fibroblastos d 2 frascos confluentes Frascos T25 2 a Em caso de colheita a recém-nascidos, bastam 1.5 a 2 ml de sangue periférico. b Amostras de sangue periférico ou medula óssea para análise de RNA de origem nacional poderão ser transportadas em EDTA desde que estas cheguem em 24h c Análises hemato-oncológicas não são possíveis a partir de amostra de DNA extraído de tecido parafinado (devido à insuficiência de DNA). d Acompanhar com sangue materno para exclusão de contaminação. 4 3 6
CITOGENÉTICA Método Tipo de amostra Volume / Concentração Tipo de Tubo ou Suporte acgh FISH Cariótipo Viabilidade (dias) Sangue Periférico a >3mL EDTA (análise de DNA) 5 >100µL (50ng/µL) DNA >20µL (25ng/µL) Diagnóstico Pré-Natal Eppendorf Safe-lock Líquido Amniótico d > 5mL Tubo estéril 4 Vilosidades coriónicas d >30mg Tubo estéril fornecido pelo CGC 4 Cultura celular de fibroblastos 2 frascos confluentes Frascos T25 2 Sangue Periférico a >3mL Heparina lítio 5 Medula Óssea >1mL Heparina lítio 5 Líquido Amniótico d 1 ml por semana de gestação Tubo estéril 4 Vilosidades coriónicas d >30mg Tubo estéril fornecido pelo CGC 4 Cultura celular de fibroblastos 2 frascos confluentes Frascos T25 2 Suspensão de células fixadas estimuladas 1 tubo por cultura Tubo estéril Suspensão de células fixadas 4 não estimuladas (oncologia) Lâminas não coradas 2 lâminas por sonda Contentor de lâminas 4 Lâminas de cultura celular fixada (não coradas) 3 lâminas por cultura Contentor de lâminas 4 Em soro fisiológico e ampicilina Tecido fresco >1cm 2 ou amoxicilina (1g/L) 4 Bloco processado em formol Tecido bloco >1cm 2 tamponado Cariótipo Imagem digital de metástases 10 metástases por cultura (mínimo 2) JPEG&/TIFF a Em caso de colheita a recém-nascidos, bastam 1.5 a 2 ml de sangue periférico. d Acompanhar com sangue materno para exclusão de contaminação. 4 6
ANATOMIA PATOLÓGICA Método Tipo de amostra Condições de envio Citologia Histologia Patologia Fetal Patologia Fetal e An. Citogenética e Biópsia esfoliativa de líquidos Biópsia aspirativa Em meio líquido Peças anatómicas Juntar álcool a 50% na mesma quantidade do volume de amostra Duas ou mais lâminas secas ao ar Duas ou mais lâminas colocadas em álcool a 95% Thin-Prep ou idêntico de acoro com instruções do KIT Formol a 10%, preferencialmente tamponado Restos Ovulares Placenta Feto f Formol a 10% Restos Ovulares Fragmento com amnios e vilosidades Placenta Face fetal da placenta co amnios e córion (preferência próximo de cordão umbilical) Feto f Fragmento de pele da região do músculo deltoide e/ou gémeo Fragmento em soro fisiológico com ampicilina ou amoxicilina (1g/L) Fragmento com 10mm diâmetro e 5 mm espessura em soro fisiológico com ampicilina ou amoxicilina (1g/L) Fragmento com 10 mm diâmetro e 5 mm espessura em soro fisiológico com ampicilina ou amoxicilina (1g/L) Tipo de Tubo ou Suporte Contentor adequado Contentor de lâminas Em frasco Segundo instruções do KIT Contentor rígido de plástico Contentor rígido de plástico Frasco estéril Frasco estéril Frasco estéril Viabilidade (dias) e Amostra restante deverá ser enviada num contentor rígido de plástico com formol a 10%; f Amostra fetal deve vir acompanhada de: (1) Radiografia do feto nas situações de patologia óssea e RCIU; (2) Fotocópia da certidão de óbito (feto > 24 semanas); (3) Declaração dos pais de autorização da autópsia (feto > 24 semanas) ou de doação do corpo para investigação clínica. RECOMENDAÇÕES: - Evitar a contaminação da amostra; - Preencha a requisição do CGC Genetics correspondente à análise pretendida; - Sele bem os recipientes de recolha; - Identifique convenientemente as amostras; - Acondicione correctamente; - Transporte à temperatura ambiente (20-25ºC ou 68-77ºF); - Quando não for possível recolher o volume recomendado por favor contacte o CGC Genetics. Para mais informações acerca de qualquer teste genético, por favor contacte-nos: +351 223 389 900. 5 6
RASTREIO PRÉ-NATAL COLHEITA EM PAPEL DE FILTRO 1. Massaje suavemente todo o dedo (anelar ou médio). Aquecendo o dedo provoca vasodilatação. 2. Seleccione a ponta do dedo como local para a picada. Limpe a área com álcool e seque com gaze esterilizada. 3. Lancete com um bisturi estéril (fornecido pelo CGC Genetics) 4. Coloque o dedo para baixo para aumentar o fluxo sanguíneo. Deixe a segunda gota formar-se. Não precisa apertar demasiado o dedo. 5. Com o dedo voltado para baixo, encoste cada círculo a uma gota de sangue. O sangue deve cobrir pelo menos 75% dos dois lados de cada um dos cinco círculos. Aplique uma gota em cada círculo, e apenas UMA gota. 6. Deixe as gotas de sangue secarem temperatura ambiente (pelo menos 60 minutos) na posição horizontal. Resguarde da luz do sol directa ou do calor. Não sobreponha papéis de filtro durante a secagem. 7. Depois de secar, coloque o papel de filtro no invólucro e, a seguir, no envelope junto com a requisição (fornecido pelo CGC Genetics) 8. Guarde a amostra em local fresco e seco até ser transportado. COLHEITA SANGUE VENOSO Sem centrifugação 1. Colher cerca de 5 ml de sangue venoso para um tubo seco com gel 2. Envio imediato para o CGC Genetics Com centrifugação 1. Colher cerca de 5 ml de sangue venoso para um tubo seco com gel 2. Centrifugar 10-15 a 3000-3500 rpm 3. Separar o soro e congelar 4. Enviar a alíquota de soro congelado para o CGC Genetics 6 6