VetinLab ORIENTAÇÕES PARA COLETA ACONDICIONAMENTO DAS AMOSTRAS DE SANGUE
PADRONIZAÇÃO DE TUBOS E COLETORES Como os resultados obtidos pelo laboratório são, em boa parte, consequência da qualidade das amostras enviadas, é primordial a padronização dos procedimentos de coleta, acondicionamento e conservação das amostras, como forma de garantir a realização dos exames e melhorar a qualidade dos resultados. Apresentamos neste artigo os tubos para coleta de sangue Apresentamos neste artigo os tubos para coleta de sangue disponibilizados pelo laboratório VetinLab, com orientações para sua utilização.
Coagulação do sangue Para se entender a necessidade de uma coleta de sangue rápida e acondicionamento correto, é necessário estudar a coagulação do sangue, verificando o que acontece desde a entrada da agulha no vaso sanguíneo ou da penetração da lanceta através da pele, até a formação do coágulo. A coagulação in vitro envolve a transformação de uma proteína existente no plasma, o fibrinogênio, em fibrina. Essa fibrina vai formar fibras, que se emaranham, aprisionam as hemácias, os leucócitos e as plaquetas, formando o coágulo. Por isso amostras com coágulos são inadequadas para análise hematológica.
A coagulação se dá em sequência, pela ativação em série, dos fatores existentes no plasma, que em seguida vão ativando outros fatores. Os fatores envolvidos na coagulação receberam números em algarismos romanos, à medida que foram sendo descobertos, de modo que a sequência dos fenômenos não segue uma numeração crescente ou decrescente. Schallm s VeterinaryHematology sixth edition
A coagulação in vitro se inicia com um fator, existente no plasma, que é ativado em contato com vidro ou com o plástico da seringa, que é o fator XII. Esse fator é também ativado nos tecidos, pelas células traumatizadas pela agulha ou pelas lesões causadas pelas manobras repetidas para tentar achar um vaso. Por esta razão, quanto mais demorada e maior o trauma durante a coleta, maior a chance de haver coagulação da amostra dentro da seringa. O fator XII, inativo, torna-se fator XII ativo, que por sua vez ativa o fator seguinte (fator XI), começando a reação em cascata. São ativados, sucessivamente, os fatores IX, VIII, X e V. Então, devido ao cálcio proveniente das plaquetas, é formado a protrombina, que depois se transforma em trombina. Essa passa a fribrinogênio, que dá origem então à fibrina frouxa, no início e à fibrina firme, que finalmente engloba os elementos sólidos do sangue formando o coágulo.
Esquema simplificado da cascata de coagulação Cada anticoagulante atua de uma determinada forma no desenvolvimento da sequência da coagulação. A escolha do anticoagulante a ser utilizado baseia-se em seu mecanismo ação.
SISTEMA INTERNACIONAL: CORES Para padronizar a coleta de sangue e facilitar a escolha no momento da coleta foi criado um sistema de cores para identificar os anticoagulantes. Este sistema foi adotado internacionalmente e deve ser seguido pelos fabricantes de tubos:
TUBOS COM ANTICOAGULANTES EDTA - ÁCIDO ETILENODIAMINOTETRACÉTICO O EDTA é o anticoagulante mais utilizado para a rotina hematológica, pois respeitada a proporção sangue/edta recomendada para cada tubo e com a adequada refrigeração da amostra, não acarreta em alterações na morfologia celular. Este anticoagulante reage através de seus dois radicais ácidos com o cálcio plasmático, formando um quelato, tornando-se insolúvel, o que impede a progressão da coagulação. Não obstante, se o EDTA for adicionado ao sangue após a união do cálcio a seus sítios de ligação a coagulação não será interrompida. Por esta razão pode haver formação de coágulos em amostras acondicionadas em tubos com EDTA. A cor da tampa é roxa, variando até tons rosados.
EDTA:Indicação de uso Amostras para hematologia e pesquisas por PCR Vantagens: - ótima conservação das plaquetas (impede a agregação plaquetária); - baixa toxicidade, podendo ser usado em transfusão; - obtém-se bons esfregaços, - melhor anticoagulante para a hematologia; - tempo de realização do exame (contagem celulares podem ser realizadas até 24 horas após a coleta do sangue mantido em temperatura ambiente, e até 48 horas se mantido sob refrigeração) - o sangue colhido em EDTA apresenta boa estabilidade sem hemólise por até oito dias - para líquidos de punção, usar na mesma proporção do sangue Desvantagem: - Não serve para estudos da coagulação.
TUBOS FORNECIDOS Tubos com EDTA para 2 ml de sangue: Estes são os tubos padrão, e podem acondicionar 1 ou 2 ml de sangue Tampa roxa ou rosada Tubos com EDTA para 0,5 ml de sangue: Estes são tubos opcionais, devem ser reservados a animais de pequeno porte ou condições de difícil coleta. Tampa roxa.
Fluoreto Os tubos com fluoreto apresentam tampa cinza ou preta(alguns tubos contêm Fluoreto e EDTA). O fluoreto de sódio (preservador) é um potente inibidor enzimático ( veneno enzimático ), impedindo a atuação das enzimas que quebram a glicose (glicólise) da amostra, impedindo o consumo da glicose pelas células presentes até o momento da separação do plasma. Amostras de sangue coletadas sem Fluoreto podem apresentar uma diminuição de até 20 % da glicose presente, a cada hora.
Fluoreto:Indicação de uso Amostras para determinação da glicemia Vantagens: Impede a glicólise Pode ser adicionado a outros anticoagulantes, conferindo- lhes este efeito. Desvantagem: Provoca alterações na morfologia das células, não sendo indicado para hematologia. Não deve ser usado nas dosagens de uréia pelo método enzimático (urease)
TUBOS FORNECIDOS Tubos com Fluoreto para 2,0 ou 4,0 ml de sangue, com tampa cinza ou preta
Heparina É um mucopolissacarídio e considerado o anticoagulante natural devido à sua presença no sangue, em quantidade inferior a necessária para evitar a coagulação do sangue recém-colhido. Age inibindo a ativação do fator IX e a ação da trombina (agente antitrombina). Impede também a aglutinação das plaquetas.
Heparina:Indicação de uso Amostras para determinação de amônia plasmática e em provas bioquímicas em geral. É utilizado para coleta de sangue de aves e répteis, pois o EDTA pode provocar hemólise intensa em algumas espécies, contudo, é necessária a confecção do esfregaço antes de colocar o sangue em contato com a heparina. Vantagens: - muito útil quando se quer evitar hemólise; - melhor anticoagulante para os testes de fragilidade osmótica; Desvantagem: - Não é indicado para a hematologia em geral, pois afeta de forma intensa e prejudicial a qualidade de coloração dos leucócitos. - Tem um custo bastante elevado.
TUBOS FORNECIDOS Tubos com Heparina para 0,5 ml (aves e réptéis) ou 4,0 ml de sangue, com tampa verde
Citrato No mecanismo de coagulação, os citratos agem sobre o cálcio por captação, formando um sal insolúvel (quelação).
Citrato:Indicação de uso Amostras para testes de coagulação Vantagens: É indicado para testes de coagulação por preservar os fatores V e VIII. Desvantagem: Provoca alterações na morfologia das células, não sendo indicado para hematologia. Inibe a fosfatase alcalina e amilase, não devendo ser utilizado para dosagens bioquímicas.
TUBOS FORNECIDOS Tubos com Citrato para 2,0 ou 4,0 ml de sangue, com tampa azul
Tubos sem anticoagulante Alguns tubos são preparados com um aditivo que acelera o processo de coagulação visando obter uma melhor retração do coágulo, e em menor tempo.
Tubos sem anticoagulante: Indicação de uso Indicados quando se necessita obter o soro a partir da amostra de sangue Estes tubos são utilizados para coleta de amostras para testes bioquímicos em geral, dosagens hormonais, testes imunológicos (sorologias) e provas de compatibilidade sanguínea.
TUBOS FORNECIDOS Tubos sem anticoagulante para 4,0 ml de sangue, com tampa vermelha. Apresentam grande variação de acordo com o fabricante.
Fontes consultadas: Manual de Práticas de Hematologia Profª Osmarina P. da Paixão e Silva e Profº José Olinto M.Vasconcelos - http://dc441.4shared.com/doc/lmsjwhaj/preview.html Schallm s VeterinaryHematology sixth edition Anticoagulantes - http://www.biomedicina3l.com/2010/03/anticoagulantes.html Manual geral - diagnosticosdaamerica.com.br Recomendações da SBPC - ML para coleta de sangue venoso - www.sbpc.org.br/upload/conteudo/320090814145042.pdf Manual Coleta VetinLab