III Congresso de Pesquisa e Extensão da FSG I Salão de Extensão & I Mostra Científica http://ojs.fsg.br/index.php/pesquisaextensao ISSN 2318-8014 QUANTIFICAÇÃO DAS ESPÉCIES DE CANDIDA SPP NA SALIVA ANTES E APÓS A SUBSTITUIÇÃO DE PRÓTESES Kinthia Von Dentz 1 *, Ana Paula Teles de Souza 2, Suzana Uggeri Coradini 3, Alexandra Gazoni 4, João Bondam 5, Marcio Pinto 6. 1 Graduanda do Curso de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha de Caxias do Sul/RS Brasil 2 Graduanda do Curso de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha de Caxias do Sul/RS Brasil 3 Mestre em Prótese Dentária (ULBRA) - Brasil. Docente do Curso de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha de Caxias do Sul/RS - Brasil 4 PhD pela Universitat Rovira i Virgili (URV), Catalunya - Espanha. Docente do Curso de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha de Caxias do Sul/RS - Brasil. 5 Docente do Curso de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha de Caxias do Sul/RS Brasil. 6 Docente do Curso de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha de Caxias do Sul/RS Brasil Informações de Submissão *kinthiavondentz@hotmail.com Rua Capitão Artemin Karam, 569 Caxias do Sul - RS - CEP: 95032-570 Palavras-chave: Contagem de colônia microbiana; Prótese total; Candida spp. Resumo A prótese dentária está frequentemente associada à instalação e manutenção de fungos e bactérias na cavidade oral. O presente trabalho visa avaliar a quantificação das espécies de Candida spp na saliva antes e após a substituição de próteses. Para isso foram selecionados 10 pacientes e os mesmos foram convidados a coletar 2 ml de saliva do modo espontâneo em frasco de boca larga. Logo após a coleta, a amostra de saliva foi enviada ao laboratório para sofrer a quantificação das unidades formadoras de colônia (UFC/ml). Para análises das diferenças significativas entre os grupos: Grupo A: antes da troca de prótese; Grupo B: após troca da prótese, foi realizado o teste Wilcoxon com amostra pareada. Foi utilizado P valor de 0,05 com intervalo de confiança de 95% para observação da diferença significativa entre os grupos. Utilizou-se o programa estatístico Graph Pad Prism 5.0 para Windows (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA.). Nos grupos analisados, foi verificado que não houve diferença significativa entre a quantificação das espécies de Candida spp, antes e após a troca das próteses (p =0.078). Em função dos dados obtidos pode-se concluir que mesmo que a prótese total possa ser o meio de colonização de Candida spp, a simples troca de dentaduras não influenciou na quantidade de bactérias na cavidade bucal para este número de pacientes..
1361 INTRODUÇÃO As próteses dentárias são de extrema importância na reabilitação de pacientes que sofreram perdas dentais. O uso das mesmas provoca a alterações nos tecidos de suporte e nos demais tecidos encontrados na cavidade bucal. Por sua vez, a mucosa bucal é considerada um destes tecidos, a qual torna-se mais fina e facilmente lesada pela fricção de próteses mal colocadas, higienização inadequada, sendo que ela reage desfavoravelmente à pressão exercida pelas próteses dentárias que podem diminuir a atuação dos anticorpos presentes na saliva, facilitando a apresentação destas alterações 1,2,3. As infecções causadas por fungos podem ser evitadas com boas práticas de higiene oral. Essas infecções podem se apresentar com sintomas e aparência macroscópica bastante variáveis 4. Estes tecidos apresentam-se com áreas de inflamação irregulares e difusa, além de alterações de forma e volume que podem estar associadas a diversos fatores, como a deficiência na higiene bucal, pela presença bordas sobrextendidas, oclusão não balanceada e de placa bacteriana 5. A notável existência de C. albicans no biofilme de uma estomatite causada por próteses, pode estar baseada na alta capacidade de adesão na hidrofobicidade desse fungo aliadas as condições favoráveis apresentadas pela superfície basal das dentaduras, o que propicia a colonização bacteriana 6. Materiais com menor capacidade de adesão microbiana minimizam a velocidade do processo de colonização do material e, favoravelmente, há diminuição da incidência de patologias locais e sistêmicas 2. A colonização de microrganismos na base das próteses é facilitada pela degradação da resina acrílica e por sua rugosidade superficial, que é inerente as técnicas de acabamento e polimento. Estas podem variar de acordo com a técnica utilizada, porém qualquer irregularidade no polimento já é suficiente para o acumulo de microrganismos 7. O uso noturno das próteses é um fator etiológico para estomatite protética, causada frequentemente por Candida albicans 8. Os principais fatores relacionados com a infecção na cavidade bucal são prótese dentária mal-higienizada, tabagismo, hipossalivação, utilização de aparelhos ortodônticos e outras doenças imunossupressoras. Sendo que a utilização de artefatos protéticos, como próteses totais e aparelhos ortodônticos, favorecem significativamente a colonização e a consequente patogenicidade de leveduras na cavidade bucal 9,10.
1362 A habilidade de formar biofilmes por um determinado microrganismo é diretamente proporcional à sua capacidade de causar infecção. Isso deve ser considerado um importante fator de virulência para candidíase, uma vez que a C. albicans possui essa habilidade bem definida 11,12. No sentido de aferir de alterações do ambiente oral em pacientes idosos portadores de Prótese fixa e de Prótese parcial removível, Tanaka e os seus colaboradores realizaram um estudo em Osaka (Japão), em que avaliaram a taxa de fluxo salivar estimulado, a capacidade tampão da saliva estimulada e a microflora oral (S. mutans, Lactobacillus e Candida albicans), após a colocação das próteses (após 3 meses no grupo das PF s e após 10 meses no grupo das PPR s) e num follow-up após 3 anos. Como resultados, obtiveram que entre os portadores de PF s, não houve alterações significativas dos 5 fatores avaliados com o tempo, enquanto que entre os portadores de PPR s, a contagem de Lactobacillus aumentou consideravelmente com o tempo, tendo sido mantidos estáveis os valores iniciais dos restantes fatores avaliados. Quando compararam os dados entre os dois grupos, encontraram maior potencial cariogênico no grupo das PPR s (nos dois momentos de avaliação), não encontrando diferenças significativas nos fatores taxa de fluxo salivar estimulado, capacidade tampão da saliva estimulada e contagem de Candida albicans. Estes dados permitiram aos autores concluir que quanto ao tempo de uso das próteses, a contagem de Lactobacillus tende a aumentar nos pacientes com PPR, bem como o risco de cárie relativo ao uso de PF s parece ser menor do que quando comparado com os pacientes portadores de PPR s 13. A boca possui uma microbiota própria e a maioria de seus componentes não é capaz de colonizar qualquer outro local do corpo humano 14. A colonização por Candida pode ter origem nos fatores já mencionados e deve-se salientar, ainda, que uma infecção fúngica pode ser ocasionada/facilitada por uma deficiência do sistema imune, fato este que pode ser observado em pessoas idosas 8. Esta relação pode ser explicada pela alta afinidade das espécies do gênero Candida em aderir e, consequentemente, colonizar o acrílico (material de que é feito à prótese) e sua presença na flora normal da boca 15. Diversos microrganismos fazem parte da microbiota bucal, entre eles estão as espécies do gênero Candida. Dentro deste gênero, a Candida albicans é considerada a de maior prevalência na cavidade bucal 7. Devido à mesma apresentar intensa formação de biofilme em materiais plásticos, este estudo tem como objetivo avaliar a quantificação das espécies de Candida albicans antes e após a substituição de próteses totais em pacientes da
1363 Clínica de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha (FSG), na cidade de Caxias do Sul, um município pertencente a região nordeste do estado do Rio Grande do Sul (RS). 1 METODOLOGIA 1.1 SELEÇÃO DA AMOSTRA Foram recrutados dez pacientes portadores de próteses totais superiores e/ou inferiores nas dependências da Clínica de Odontologia da FSG, na cidade de Caxias do Sul- RS, constituindo uma amostra de conveniência. Os mesmos foram incluídos no estudo após assinarem o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. (TCLE). O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética de Pesquisa da Faculdade da Serra Gaúcha - Círculo Operário Caxiense (CAAE: 43413915200005311). 1.2 CRITÉRIOS DE INCLUSÃO E EXCLUSAO Os sujeitos de pesquisa passaram por uma avaliação odontológica prévia, onde foi avaliado a necessidade do paciente de fazer a substituição da prótese antiga, levando em consideração a idade da prótese e a situação de desgaste em que se encontrava. Pacientes com dificuldades neurológicas, que passaram por quimioterapia e radioterapia, ou que tivessem alteração do fluxo salivar diagnosticada ou em tratamento para candidíase foram excluídos da pesquisa. 1.3 COLETA DE DADOS As coletas foram realizadas num mesmo paciente e em dois momentos com objetivo de quantificar as espécies de gênero Candida, sendo assim criados dois grupos Grupo A: antes da troca de prótese e Grupo B: após troca da prótese. Primeiramente os pacientes foram convidados a coletar 2-3 ml de saliva de modo espontâneo em frasco de boca larga na presença de sua prótese total antiga. Logo após a coleta, a amostra de saliva foi enviada ao Laboratório de Microbiologia e Patologia Bucal da FSG para processamento. No laboratório, a saliva foi diluída na concentração de 1:1000 em tubo de falcon de 15 ml. Logo após a diluição, o espécime clínico foi semeado em placas de
UFC/mL 10 3 1364 petri contendo Ágar Sabouraud adicionado a cloranfenicol (Kasvi, Padova, Itália). Todas as placas foram colocadas em estufa de aerobiose em uma temperatura de 37ºC por 24-48 horas. Após esse período, foram definidas a UFC/ml por meio de contagem de colônias de Candida spp. Após 6 meses da entrega da nova prótese total, os pacientes foram rechamados para uma segunda coleta de saliva. Foram convidados a coletar 2-3 ml de saliva de modo espontâneo em frasco de boca larga após 6 meses de uso da nova prótese total. A amostra de saliva foi enviada ao Laboratório de Microbiologia e Patologia Bucal da FSG para processamento, e de modo igual a etapa anterior foram definidas a UFC/ml por meio de contagem de colônias de Candida spp. Para análises das diferenças significativas entre os grupos: Grupo A: antes da troca de prótese; Grupo B: após troca da prótese, foi realizado teste de Wilcoxon de amostra pareada. Foi utilizado P valor de 0,05 com intervalo de confiança de 95% para observação da diferença significativa entre os grupos. Utilizou-se o programa estatístico Graph Pad Prism 5.0 para Windows (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA.). 2 RESULTADOS Nos grupos analisados, foi verificado que não houve diferença significativa entre a quantificação das espécies de Candida ssp, antes e após a troca das próteses (P = 0.078). (Figura 1). Figura 1 - UFC/ml de candida spp. isolada de saliva antes e após a troca de prótese (n=10) UFC/mL de Candida spp. isolada de saliva antes e após a troca de prótese (n=10) 40 30 20 10 0 Antes Troca da prótese Depois Fonte: Elaborado pela autora.
1365 Com relação aos valores médios referentes às UFC/mL em cada grupo, observou-se que no Grupo A, a média foi 7.65 x 10 6 UFC/ml de saliva (1.4 28.6 x 10 6 UFC/mL,±7.75). No grupo B, a quantificação das espécie de Candida spp. no espécime clínico, obteve-se um valor médio de 8.68 x 10 6 UFC/mL (1.54 32.0 x 10 6 UFC/mL, ±8.64). Foram analisados dez pacientes portadores de próteses, sendo eles nove pacientes com próteses totais superiores e um paciente com prótese total superior e total inferior. Neste grupo, quatro pacientes foram do sexo masculino e seis pacientes do sexo feminino. Em relação à idade da prótese, observou que quatro pacientes eram usuários da mesma prótese a 20 anos, dois pacientes com 10 anos de uso, e os outros quatro com menos 6 anos de uso com a mesma dentadura. Estes resultados demonstrados na Tabela 1. Tabela 1 - Perfil dos pacientes participantes do estudo (n=10) Paciente Sexo Tipo de prótese Idade da prótese Numero 1 Masculino Total superior 20 anos Numero 2 Feminino Total superior e inferior 20 anos Numero 3 Feminino Total superior 20 anos Numero 4 Feminino Total superior 3 anos Numero 5 Masculino Total superior 20 anos Numero 6 Feminino Total superior 5 anos Numero 7 Feminino Total superior 4 anos Numero 8 Masculino Total superior 10 anos Numero 9 Feminino Total superior 10 anos Numero 10 Masculino Total superior 4 anos Fonte: Elaborado pela autora.
1366 3 DISCUSSÃO As leveduras do gênero Candida são pertencentes a microbiota bucal do homem. Estudos apontam que o envelhecimento da resina acrílica acarreta em um processo de deterioração da prótese, que se caracteriza por aumento da porosidade, tornando a superfície mais rugosa, o que favorece a colonização por microrganismos 16. No presente trabalho não houve diferença estatisticamente significativa com relação a quantificação das UFC/mL do gênero Candida antes e após a troca das próteses, mostrando que como se tratavam de pacientes sadios, mesmo a resina acrílica estando mais porosa antes da troca das dentaduras, a quantidade de fungos permaneceu igual. Em outros estudos foi verificada alta prevalência da levedura nas próteses dentárias. Porém, o mesmo utilizou a coleta por meio de swab esfregando-o diretamente na prótese. Diferentemente do realizado no presente trabalho, o qual foi coletado saliva e cujo objetivo era verificar a influência da substituição das próteses na quantidade de leveduras na cavidade bucal de pacientes sadios 15,17. Foi investigada a associação da atividade de Candida spp. em 351 pacientes com mais de 60 anos, em três grupos: portadores de PT s, portadores de PPR s e dentição natural. Neste trabalho publicado em 2005, o grupo de portadores de PT s (n=38) demonstrou significativamente maior atividade de Candida spp. do que os outros 2 grupos do estudo. Ainda neste estudo, o grupo de portadores de PPR s (n=101) apresentou maior atividade de Candida spp. quando comparado ao grupo com dentição natural. Além disso, houve correlação entre o aumento da Candida spp. e atividade da mesma com a hipossalivação. Ser do gênero masculino e ter PR s maxilares está significativamente relacionado com uma alta atividade de Candida spp. Nos portadores de prótese maxilar, a atividade de Candida spp. na mucosa palatina é significativa e positivamente correlacionada com a mesma atividade nas superfícies de contato das próteses com a mucosa 18. Em nosso estudo, nenhum paciente apresentava hipossalivação ou fazia o uso de antidepressivos nem demonstravam características clínicas como xerostomia, justificando os nossos resultados encontrados já que todos os pacientes deste estudo coletaram um volume adequado de saliva e apresentavam-se sadios.
1367 No decorrer da pesquisa, houve a perda um paciente da casuística, já que um dos pacientes da primeira coleta não compareceu a segunda consulta. Nenhum dos pacientes que participaram da pesquisa apresentaram episódios de candidíase bucal ao longo do estudo, sendo assim nenhum recebeu o tratamento medicamentoso para esta condição clínica. A prótese dentária tem sido um fator predisponente para a colonização oral das espécies de Candida tendo sua presença uma relação entre os hábitos de higiene oral, limpeza da prótese dentária e o comportamento da levedura 15. Um estudo enfatiza a busca por novos materiais formulados para minimizar a redução da sua contaminação por fungos, diminuindo os episódios de candidíases bucais. Apesar destes dados, o presente trabalho não verificou uma diminuição na quantificação de Candida spp. na saliva da cavidade bucal dos pacientes analisados, os quais sofreram a substituição de suas próteses totais 2. Um ponto muito importante que deve ser ressaltado neste estudo é o tamanho amostral, já que houve coleta de saliva de somente 10 pacientes. Além disso, outra característica importante a ser considerada é o período da coleta feita após a substituição da prótese. Neste estudo, foi preconizado um tempo de 6 meses. Sobre este dado, pode-se considerar que há poucas informações científicas publicadas na literatura mundial, fato que implica em uma falta de dados sobre esta característica. CONCLUSÃO Os resultados obtidos nesse estudo permitiram verificar que não houve diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos (antes e após a troca da prótese) no tempo da pesquisa que foi de seis meses do uso da nova prótese em pacientes da Clínica de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha (FSG). REFERÊNCIAS 1. TURANO JC, TURANO LM, TURANO MVB. Fundamentos de Prótese Total 9ª Ed.,[1.reimp.] São Paulo 2012 p 2 8. 2. SILVA RFF, MARTINS CHG, VINHOLIS AHC, REIS RSA, MARANGONI S, SOUZA TT, BARBOSA AL, CASEMIRO LA. Adsorção de Candida albicans em resinas utilizadas em bases de próteses removíveis. BIOSCI.J.,V29,p767-773 2013. 3. FALCÃO AFP, SANTOS LB, SAMPAIO NM. Candídiase associada a próteses dentárias. Sitientibus. 2004; Jan- Jun; n. 30, p.135 146.
1368 4. AKPAN A, MORGAN R. Oral candidiasis. Postgrad Med J. 2002; v.78, p.455-9. 5. ZANETTI RV, ZANETTI AL, LAGANA DC, FELTRIN PP. Estudo de 60 pacientes portadores de prótese parcial removível: avaliação clínica das lesões nas áreas de suportes da mucosa bucal. Rev Pos Grad 1996;; 3(3):175-84. 6. RADFORD DR, CHALLACOMBE SJ, WALTER JD. Denture plaque and adherence of candida albicans to denture-base materials in vivo and in vitro. Crit.Rev.Oral Biol. Med.;1999,v.10,n.1,p.99-116 7. TELLES D. Prótese Total Convencional [1.ed., 1.reimpre.]- São Paulo: Santos, 2013 p.14. 8. SILVA RJ, SEIXAS Z. Materiais e métodos de higienização para próteses removíveis. Int J dent. 2008; 7(2): 125-132. 9. GASPARETTO A, NEGRI MFN, PAULA CR, SVIDZINSKI TIS. Produção de biofilme por leveduras isoladas de cavidade bucal de usuários de prótese dentária. Acta Scientiarum. Health Sciences. 2005; v. 27, n. 1, p.37-40. 10. RODRIGUES RCMG, LÉON BLT, OLIVEIRA VMB, CURY AADB. Effect of a denture cleanser on weight, surface roughness, and tensile bond strength of two resilient denture liners. Journal of Prosthetic Dentistry, St Louis, v. 89, n. 5, p. 489-94, 2003. 11. RODRIGUEZ MC, SOTOMAYOR C, COSTAMAGNA ME, CABANILLAS AM, RENTERIA BS, REPISO AMM, CORREA S. Immunocompetence of macrophages in rats exposed to Candida albicans infection and stress. Am. J. Physiol. Cell. 2003; v.284, p.111-118. 12. PARSEK MR, SINGH PK. Bacterial biofilms: An Emerging Link to Disease Pathogenesis. Annual Review of Microbiology, Palo Alto, p. 57, 677-701, 2003. 13. TANAKA J, TANAKA M, KAWAZOE T. Longitudinal research on the oral environment of elderly wearing fixed or removable prostheses. Journal of Prosthodontic Research; 53: 83 88, 2009. 14. TYLDESLEY WR. Oral medicine. 2ª e d. Oxford: Oxford University Press, 24-48, 1981. 15. TEXEIRA ML, MEZZARI A, PRE TEXEIRA ML, MEZZARI A; Prevalência de Candida albicans e não-albicans em próteses dentárias. Newslab edição 70-2005. 16. GUSMÃO JMR. Leveduras do gênero candida na saliva de usuários de prótese parcial removível a grampo [dissertação]. Taubaté (SP): Universidade de Taubaté; 2007. 17. FERREIRA TN, PEREIRA A, KEMMELMEIER E, YMAGUCHI U. Determinação da prevalência e identificação de leveduras do gênero cândida em pacientes usuários de prótese dentária. VI Mostra interna de trabalhos de iniciação cientifica 2012.
1369 18. IKEBE K, MORII K. KASHIWAGI J, NOKUBI T & ETTINGER RL. Impact of dry mouth on oral symptoms and function in removable denture wearers in Japan. 2005 Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod; 99:704-710.