25(OH) VITAMIN D TOTAL

25(OH) VITAMIN D TOTAL B24838 PARA UTILIZAR NOS SISTEMAS DE IMUNOENSAIO ACCESS 2 COM NOME DE TESTE: VitdA Finalidade prevista Resumo e explicação do produto O ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação quantitativa dos níveis totais de 25 hidroxivitamina D [25(OH) vitamina D] no soro humano e no plasma utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access 2. Os resultados devem ser utilizados como auxílio na avaliação de suficiência de vitamina D. A vitamina D é uma hormona esteróide lipossolúvel produzida na pele através da acção da luz do sol ou obtida a partir de fontes dietéticas. 1 A principal função da vitamina D consiste em manter a homeostasia do cálcio e do fósforo. 2 Uma deficiência crónica grave de vitamina D em bebés e crianças provoca a deformação dos ossos, habitualmente designada raquitismo; nos adultos, poderá provocar fraqueza muscular proximal, dores ósseas e osteomalacia. 3,4 Uma deficiência de vitamina D menos grave poderá provocar hiperparatiroidismo secundário, aumento do turnover ósseo e perda óssea progressiva, aumentando o risco de osteoporose. 4,5 A presença de receptor de vitamina D noutros tecidos e órgãos sugere que a vitamina D também poderá ser importante em processos biológicos não esqueléticos. 2,6 Estudos recentes associaram a deficiência de vitamina D ao aumento de risco de cancro, doença auto imune, doença infecciosa, doença cardiovascular e muitas doenças crónicas. 7,8 A vitamina D existe em duas formas primárias, vitamina D 3 (colecalciferol), produzida a partir da conversão de 7 dehidrocolesterol na epiderme e na derme dos humanos devido à exposição à luz do sol, e vitamina D 2 (ergocalciferol), adquirida na dieta, principalmente nos óleos dos peixes gordos (por ex., salmão, cavala e arenque), cogumelos, gemas do ovo e alimentos com suplemento de vitamina D. 8 Os suplementos dietéticos prescritos ou de venda livre representam igualmente uma fonte importante de vitamina D para muitas pessoas. 2,8 Factores como a latitude, hora do dia, envelhecimento, aumento da pigmentação da pele, origem étnica, aplicação de protector solar e estação do ano podem afectar significativamente a produção de vitamina D 3 na pele e, consequentemente, os níveis de vitamina D no sangue. 2,8 A vitamina D proveniente da pele ou da dieta é biologicamente inactiva. Entra na circulação ligada à proteína de ligação à vitamina D (DBP) e é transportada para o fígado, passando por uma hidroxilação para produzir 25(OH) vitamina D. 1 A 25(OH) vitamina D também circula como um complexo com DBP. É metabolizada nos rins pela enzima 25 hidroxivitamina D 1α hidroxilase para a sua forma biologicamente activa, 1,25 dihidroxivitamina D. 9 A 1,25 dihidroxivitamina D circula a níveis 1000 vezes inferiores à 25(OH) vitamina D e a sua produção renal é rigorosamente regulada por níveis plasmáticos de hormona paratiróide e níveis de fósforo e cálcio sérico. 8,9 A 25(OH) vitamina D sérica é o principal metabolito em circulação de vitamina D no corpo e reflecte as entradas de vitamina D a partir da dieta ou por síntese cutânea. Por este motivo, a concentração sérica de 25(OH) vitamina D é considerada a medida clínica padrão do estado de vitamina D. 8 Uma vez que a 25(OH) vitamina D sérica será uma mistura das formas D 2 e D 3, ambas as formas de vitamina D 2 e vitamina D 3 de vitamina D devem ser medidas para avaliar com precisão os níveis totais de 25(OH) vitamina D. Página 1

Princípios do procedimento Informações sobre o produto O ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total é um ensaio imunoenzimático competitivo de duas fases. Na incubação inicial, a amostra é adicionada a um recipiente de reacção com um agente de libertação de DP e partículas paramagnéticas revestidas com anticorpo monoclonal anti 25(OH) vitamina D de ovelha. A 25(OH) vitamina D é libertada de DBP e liga se ao anticorpo monoclonal anti 25(OH) vitamina D imobilizado na fase sólida. Subsequentemente, é adicionado um conjugado de fosfatase alcalina análoga 25(OH) vitamina D que compete para ligação ao anticorpo monoclonal anti 25(OH) vitamina D imobilizado. Após uma segunda incubação, os materiais ligados à fase sólida são retidos num campo magnético e os materiais não ligados são removidos por lavagem. De seguida, o substrato quimioluminescente, Lumi Phos* 530, é adicionado ao recipiente e a luz gerada pela reacção é medida com um luminómetro. A produção de luz é inversamente proporcional à concentração de 25(OH) vitamina D na amostra. A quantidade de analito presente na amostra é determinada a partir de uma curva de calibração multiponto armazenada no sistema. Embalagem de Reagentes Access 25(OH) Vitamin D Total (para utilizar em Sistemas de Imunoensaio Access 2) N.º Cat. B24838: 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar entre 2 e 10 C. Manter refrigerado entre 2 e 10 C por, no mínimo, duas horas antes de usar no equipamento. Para evitar a degradação induzida pela luz da molécula de vitamina D, o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total é fornecido numa embalagem de reagentes castanha e opaca. Para garantir que as partículas paramagnéticas na embalagem de reagentes estão totalmente suspensas, misturar a embalagem com uma misturadora vortex imediatamente antes de carregar a embalagem de reagentes no equipamento pela primeira vez. O requisito para misturar a embalagem de reagentes com uma misturadora vortex é exclusivo do ensaio de vitamina D. Não misturar outras embalagens de reagentes Access com uma misturadora vortex. Para misturar: Ligar a misturadora vortex no modo On (Ligado) contínuo (ou seja, não no modo Auto nem no modo Touch (Táctil)) e colocar na velocidade máxima (ou seja, entre 2500 e 3200 rpm). Segurar a embalagem na vertical, pela extremidade do clipe, e colocar a base da partícula (R1a) na almofada vortex num ângulo ligeiramente descendente (consultar Figura 1). Misturar a embalagem de reagentes continuamente (sem agitar) durante 20 a 30 segundos. Access 25(OH) Vitamin D Total B29597A 2014 Beckman Coulter, Inc. Página 2

Não é necessário remisturar as embalagens depois de carregar. Não misturar uma embalagem perfurada. Figura 1 Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado entre 2 e 10 C. Estável entre 2 e 10 C por 28 dias depois da abertura. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Rejeitar a embalagem de reagentes caso tenha sofrido danos (por ex. ruptura da camada elastomérica). R1a: Partículas paramagnéticas Dynabeads ** revestidas com anticorpo monoclonal anti 25(OH) vitamina D de ovelha suspensas em solução salina tamponada TRIS, IgG de cabra, albumina sérica bovina (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,1% de Proclin*** 300 R1b: Ácido fórmico, poli(vinil álcool) e 0,1% de ProClin 300 R1c: Ácido fórmico, poli(vinil álcool) e 0,1% de ProClin 300 R1d: Conjugado de fosfatase alcalina análoga vitamina D, ACES, < 0,1% de azida sódica e 0,1% de ProClin 300. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos recipientes segundo os regulamentos e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 10 Xi. Irritante: ProClin 300 0,1%. Página 3

R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28 37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Colheita e preparação da amostra 1. Soro e plasma (heparina de lítio) são as amostras aconselhadas. 2. Não diluir as amostras do doente, pois poderá conduzir a resultados incorrectos de vitamina D. 3. Seguir as recomendações abaixo para manipular, analisar e armazenar amostras de sangue: 11,12,13 Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação, na posição vertical. A coagulação pode ser mais lenta a temperaturas mais baixas ou se o doente estiver a seguir uma terapia com anticoagulantes. Manter as provetas sempre fechadas. Separar fisicamente, o mais rapidamente possível, o soro ou o plasma do contacto com células. Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (entre 15 e 30 C) durante não mais de 72 horas. Se o ensaio não ficar concluído no prazo de 72 horas, refrigerar as amostras entre 2 e 10 C. Se o ensaio não ficar concluído no prazo de 7 dias, congelar a uma temperatura de 20 C ou inferior. As amostras congeladas podem ser armazenadas até um (1) ano a 20 C antes de realizar testes. 4. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras: Certificar se de que a fibrina e a matéria celular residuais tenham sido removidas antes da análise. Para a centrifugação, seguir as instruções do fabricante das provetas de colheita de sangue. 5. Cada laboratório deve determinar a aceitabilidade das próprias provetas de colheita de sangue e dos produtos de separação do soro. Estes produtos podem variar entre fabricantes diferentes e, às vezes, de um lote para o outro. 6. As amostras podem ser descongeladas no máximo 3 vezes. 13 7. Evitar a análise de amostras extremamente lipémicas ou hemolisadas. Materiais fornecidos R1 Embalagens de Reagentes Access 25(OH) Vitamin D Total Materiais necessários mas não fornecidos 1. Access 25(OH) Vitamin D Total Calibrators (para utilizar em Sistemas de Imunoensaio Access 2) Fornecido em zero e aproximadamente 7, 18, 35, 74 e 167 ng/ml. (18, 45, 88, 185 e 418 nmol/l). N.º Cat. B24839 2. Materiais do Controlo de Qualidade (QC): material de controlo disponível no mercado. 3. Access Substrate N.º Cat. 81906 4. Access Wash Buffer II, N.º Cat. A16792 5. Misturadora vortex no modo On (Ligado) contínuo (ou seja, não no modo Auto nem no modo Touch (Táctil)) e velocidade máxima entre 2500 e 3200 rpm. Access 25(OH) Vitamin D Total B29597A 2014 Beckman Coulter, Inc. Página 4

Comentários sobre o procedimento Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade Resultados 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Consultar a secção Informações sobre o produto para obter instruções específicas quanto à vitamina D para manuseamento da embalagem de reagentes. 3. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 4. Usar trinta (30) μl de amostra para cada determinação para além do recipiente da amostra e dos volumes mortos do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 5. A unidade de medida padrão do sistema para indicar os resultados das amostras é ng/ml. Para mudar essas unidades de medida para o Sistema Internacional de Unidades (unidades do SI), nmol/l, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda. Para converter as concentrações manualmente para o Sistema Internacional, multiplicar ng/ml pelo factor de multiplicação 2.5. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Executar o Access 25(OH) Vitamin D Total Calibrator S0 em quadruplicado, o calibrador S1 em triplicado e o calibrador S2 S5 em duplicado. Para todos os testes, é necessário ter uma curva de calibração activa. Para o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total, a calibração é necessária a cada 28 dias. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser processadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez de um formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas. 14 Utilizar materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. O uso mais frequente de controlos ou o uso de controlos adicionais fica a critério do utilizador de acordo com os métodos adequados ou os requisitos de acreditação dos laboratórios e as leis aplicáveis. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. Os resultados dos testes dos doentes são determinados automaticamente pelo software do sistema. A quantidade de analito na amostra é determinada a partir da produção de luz medida através dos dados de calibração armazenados no sistema. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções completas sobre como visualizar os resultados das amostras. Página 5

Limitações do procedimento 1. Este produto destina se a ser utilizado apenas nos Sistemas de Imunoensaio Access 2. Não é compatível com os Sistemas de Imunoensaio UniCel DxI. 2. O intervalo de medição reportável do ensaio é definido como o intervalo desde o Limite de Detecção (LoD) até ao valor do Calibrador S5, 2,0 para aproximadamente 167 ng/ml (5,0 para ~418 nmol/l). Os valores fora deste intervalo devem ser reportados como < 2,0 ng/ml ou > valor do Calibrador S5 (~167 ng/ml), respectivamente. Não diluir as amostras do doente, pois poderá conduzir a resultados incorrectos de vitamina D. 3. Nos ensaios que utilizam anticorpos, existe a possibilidade de interferência dos anticorpos heterófilos contidos na amostra do doente. Os doentes que estão regularmente em contacto com animais ou que tenham sido submetidos a imunoterapia ou a técnicas de diagnóstico que utilizam imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas podem produzir anticorpos, por ex. HAMA, que interferem com os imunoensaios. Para além disso, outros anticorpos heterófilos (por ex., anticorpos humanos anti ovelha) podem estar presentes nas amostras dos doentes. 15,16 Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errados. Os resultados de doentes suspeitos de ter estes anticorpos devem ser avaliados com cuidado. 4. A amostra do doente poderia conter outras substâncias potencialmente interferentes susceptíveis de causar resultados errados nos imunoensaios. Alguns exemplos documentados na literatura incluem o factor reumatóide, a fosfatase alcalina endógena, a fibrina e proteínas capazes de se ligarem com a fosfatase alcalina. 17 Avaliar com cuidado os resultados de doentes suspeitos de terem estes tipos de interferências. 5. Os resultados do Access 25(OH) Vitamin D Total devem ser interpretados baseando se no quadro clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. 6. A função dos factores pré analíticos em testes laboratoriais foi descrita em várias publicações. 11,18 O cumprimento das recomendações de manuseamento e colheita de amostras do fabricante das provetas de colheita de sangue é fundamental para reduzir os erros pré analíticos. Valores esperados 1. Actualmente, há um debate em curso sobre os valores óptimos de 25(OH) vitamina D no soro. Em 2011, o Clinical Guidelines Subcommittee of the Endocrine Society Task Force estabeleceu as directrizes apresentadas abaixo quanto aos níveis recomendados de 25(OH) vitamina D no soro. 8 Estado de vitamina D Intervalo de concentração de 25 (OH) vitamina D (ng/ml) Intervalo de concentração de 25 (OH) vitamina D (nmol/l) Deficiente < 20 < 50 Insuficiente 20 a < 30 50 a < 75 Suficiente 30 100 75 250 Limite de segurança superior > 100 > 250 2. Outras citações clínicas de referência poderão apresentar valores diferentes. Os níveis de vitamina D poderão variar de acordo com factores como geografia, estação do ano, saúde do doente, dieta, idade,origem étnica, utilização de suplementos de vitamina D ou ambiente. 8 Para garantir uma representação adequada de populações específicas, cada laboratório deve determinar os seus próprios intervalos de referência. 3. Num estudo realizado, as concentrações de 25(OH) vitamina D foram medidas em amostras de soro recolhidas de 367 adultos aparentemente saudáveis utilizando o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total no Sistema de Imunoensaio Access 2. A população em estudo incluiu pessoas de três regiões geográficas diferentes dos EUA e representou a população global dos EUA em termos de sexo, raça e etnia. As mulheres grávidas ou as pessoas com um historial de doença óssea metabólica (por ex., hipocalcemia), cancro, doença renal ou níveis anormais de soro, cálcio, magnésio, fósforo, PTH ou TSH foram excluídas do estudo. As pessoas tinham idades compreendidas ente os 21 e os > 89 anos e 20% dos indivíduos mencionaram a toma de suplementos de vitamina D. O intervalo observado de Access 25(OH) Vitamin D Total B29597A 2014 Beckman Coulter, Inc. Página 6

concentrações de 25(OH) vitamina D, estabelecido de acordo com a directriz CLSI EP28 A3c, está resumido na Tabela 1 apresentada abaixo. 19 Tabela 1. Valores esperados para o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total em Sistemas de Imunoensaio Access 2 Valores observados N Média Intervalo da amostra ng/ml 367 24,9 9,4 67,7 nmol/l 367 62,3 23,5 169,2 2,5 percentil 11,9 (10,2 13,3) 29,7 (25,6 33,3) 97,5 percentil 43,6 (42,4 50,5) 109,1 (106,1 126,4) Características específicas de desempenho Comparação de métodos (comparação do procedimento de medição) Os dados representativos para a comparação de métodos são fornecidos apenas a título ilustrativo. Podem ocorrer variações nos desempenhos obtidos em diferentes laboratórios. Uma comparação entre 145 amostras de soro avaliadas com o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total no Sistema de Imunoensaio Access 2 e uma cromatografia líquida, juntamente com o método de espectrometria de massa sequencial (LC MS/MS), deu origem aos seguintes resultados (regressão de Passing Bablok e correlação de Pearson): N Inclinação Coeficiente de correlação (r) Unidade = ng/ml Intervalo de observações Intercepção Unidade = nmol/l Intervalo de observações Intercepção 145 0,88 (0,81 0,95) 0,92 5,35 152,40 1,43 ( 3,22 0,73) 13,38 381,01 3,58 ( 8,05 1,83) Intervalo de concentração observado do ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total. Linearidade Num estudo baseado na directriz CLSI EP6 A 20, o ensaio Access 25(OH) Vitamin D demonstrou uma linearidade clinicamente aceitável ao longo do intervalo de medição analítica de 2,0 para ~167 ng/ml (5,0 para ~418 nmol/l). Imprecisão Os dados representativos para a imprecisão são fornecidos apenas a título ilustrativo. Podem ocorrer variações nos desempenhos obtidos em diferentes laboratórios. Este ensaio apresenta uma imprecisão total 10,0% com concentrações superiores a 15,0 ng/ml (37,5 nmol/l) e um Desvio Padrão (DP) total 1,5 ng/ml (3,8 nmol/l) com concentrações 15,0 ng/ml. Um estudo realizado utilizando amostras de doentes com base em soro, gerando um total de 40 ensaios, 2 repetições por ensaio, no decorrer de 20 dias, forneceu os seguintes dados, calculados com base nas directrizes do CLSI EP5 A2. 21 Intervalo Média (n=80) Intra execução Unidades = ng/ml Inter execução Total (intra laboratório) DP %CV DP %CV DP %CV Amostra 1 6,4 0,3 N/A 0,5 N/A 0,6 N/A Amostra 2 13,3 0,5 N/A 0,9 N/A 1,0 N/A Amostra 3 24,6 0,5 2,2 1,8 7,2 1,8 7,5 Amostra 4 49,8 1,1 2,1 3,5 7,0 3,6 7,3 Amostra 5 110,5 1,6 1,5 7,3 6,6 7,5 6,8 Amostra 6 141,4 2,2 1,6 8,4 5,9 8,7 6,1 Página 7

Intervalo Média (n=80) Intra execução Unidades = nmol/l Inter execução Total (intra laboratório) DP %CV DP %CV DP %CV Amostra 1 16,0 0,8 N/A 1,3 N/A 1,5 N/A Amostra 2 33,3 1,3 N/A 2,2 N/A 2,6 N/A Amostra 3 61,4 1,3 2,2 4,4 7,2 4,6 7,5 Amostra 4 124,6 2,6 2,1 8,7 7,0 9,1 7,3 Amostra 5 276,2 4,1 1,5 18,4 6,6 18,8 6,8 Amostra 6 353,5 5,5 1,6 21,0 5,9 21,7 6,1 Interferências Os dados representativos para as interferências são fornecidos apenas a título ilustrativo. Podem ocorrer variações nos desempenhos obtidos em diferentes laboratórios. As amostras de vitamina D com concentrações de 20, 40 e 150 ng/ml (50, 100 e 375 nmol/l) foram misturadas com concentrações múltiplas das substâncias apresentadas abaixo e processadas num Sistema de Imunoensaio Access 2 único. Os valores foram calculados tal como descrito na directriz CLSI EP7 A2. 22 A interferência foi determinada testando controlos (sem substância interferente adicionada) e amostras de teste correspondentes (com substância interferente adicionada). Dos compostos testados, nenhum mostrou causar um desvio de > 10,0% utilizando as concentrações de teste mais elevadas indicadas na tabela apresentada abaixo. Substância Paracetamol Bilirrubina (não conjugada) Ácido acetilsalicílico Hemoglobina Colesterol Heparina (peso molecular baixo) Ibuprofeno Multivitamina Factor reumatóide Proteína (globulina gama) Triglicéridos Concentração mais elevada adicionada 20 mg/dl 40 mg/dl 65 mg/dl 50 mg/dl 500 mg/dl 3 U/mL 30 mg/dl 0,9% (v/v) 200 IU/mL 6 g/dl 3280 mg/dl Access 25(OH) Vitamin D Total B29597A 2014 Beckman Coulter, Inc. Página 8

Especificidade analítica Os dados representativos para a especificidade analítica são fornecidos apenas a título ilustrativo. Podem ocorrer variações nos desempenhos obtidos em diferentes laboratórios. Reconhecimento equimolar de 25(OH) Vitamina D 2 e 25(OH) Vitamina D 3 O reconhecimento do ensaio de 25(OH) vitamina D 2 e 25(OH) vitamina D 3 foi avaliado utilizado sete amostras de soro emparelhadas, contendo um total de concentrações de 25(OH) vitamina D entre 12,2 e 39,3 ng/ml (30,5 e 98,2 nmol/l). Estas amostras foram misturadas com quantidades iguais de 25(OH) vitamina D 2 ou 25(OH) vitamina D 3 e um rácio dose calculado como o valor da amostra misturada com 25(OH) vitamina D 2 sobre o valor da amostra misturada com 25(OH) vitamina D 3. O valor rácio dose determinado para este estudo foi de 100%, demonstrando a equimolaridade de 25(OH) vitamina D 2 e 25(OH) vitamina D 3 quando medido pelo ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total. Reactividade cruzada com outros metabolitos de vitamina D Com base nas orientações do protocolo CLSI EP7 A2 22, foi realizado um estudo para avaliar o potencial da reactividade cruzada do ensaio com outras substâncias semelhantes em termos estruturais à 25(OH) vitamina D. As substâncias apresentadas na tabela seguinte foram adicionadas a amostras contendo 25(OH) vitamina D e processadas num único Sistema de Imunoensaio Access 2. Os valores de percentagem de reactividade cruzada foram calculados através da equação abaixo e, em seguida, normalizados para a reactividade cruzada de 25(OH) vitamina D 3. % de reactividade cruzada = valor médio misturado (ng/ml) valor médio não misturado (ng/ml) Concentração de reagente cruzado adicionada (ng/ml) X 100 Os resultados deste estudo estão resumidos na tabela seguinte: Substância Concentração adicionada (ng/ml) Concentração adicionada (nmol/l) Média % Reactividade cruzada Vitamina D 2 (Ergocalciferol) 19 232 50 000 0 Vitamina D 3 (Colecalciferol) 19 832 50 000 0 25(OH) vitamina D 3 20 50 100 1,25(OH) 2 vitamina D 2 9 20 1202 1,25(OH) 2 vitamina D 3 25 60 206 24,25(OH) 2 vitamina D 3 104 250 4 3 epi 25(OH) vitamina D 3 100 250 56 1αOH vitamina D 3 (alfacalcidol) 8013 20 000 0 As concentrações testadas foram 125 375 vezes os níveis endógenos normalmente encontrados para 1,25 (OH) 2 vitamina D. 23 Os dados representativos para o Limite do Branco, o Limite de Detecção e o Limite de Quantificação são fornecidos apenas a título ilustrativo. Podem ocorrer variações nos desempenhos obtidos em diferentes laboratórios. Limite do Branco O ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total foi concebido para apresentar um Limite do Branco (LoB) de 1,50 ng/ml ( 3,75 nmol/l). Num estudo realizado, o LoB foi testado utilizando um protocolo baseado na directriz CLSI EP17 A2. 24 No total, foram medidas 154 repetições de uma amostra com concentração de analito igual a zero (Access 25(OH) Vitamin D Total Calibrator S0) em 12 processamentos utilizando várias embalagens de reagentes e dois lotes de calibrador em vários Sistemas de Imunoensaio Access 2. Este estudo determinou que o LoB para o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total era de 0,55 ng/ml (1,38 nmol/l). Página 9

Limite de Detecção O ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total foi concebido para apresentar um Limite de Detecção (LoD) de 2,0 ng/ml ( 5,0 nmol/l). Num estudo realizado, o LoD foi testado utilizando um protocolo baseado na directriz CLSI EP17 A2. 24 Foram medidas três repetições de cinco amostras de nível baixo utilizando várias embalagens de reagentes e dois lotes de calibrador em 12 processamentos em vários Sistemas de Imunoensaio Access 2. Este estudo determinou que o LoD para o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total era de 1,0 ng/ml (2,5 nmol/l). Limite de Quantificação O ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total foi concebido para apresentar um Limite de Quantificação (LoQ) de 6,0 ng/ml ( 15,0 nmol/l). Num estudo realizado, o LoQ foi testado utilizando um protocolo baseado na directriz CLSI EP17 A2. 24 Foram medidas três repetições de 10 amostras utilizando várias embalagens de reagentes e um lote de calibrador em 22 processamentos em vários Sistemas de Imunoensaio Access 2. O LoQ foi determinado como a concentração mais baixa que correspondeu aos requisitos de concepção de imprecisão total 20% CV. Este estudo determinou que o LoQ para o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total era de 3,0 ng/ml (7,5 nmol/l). Access 25(OH) Vitamin D Total B29597A 2014 Beckman Coulter, Inc. Página 10

25(OH) VITAMIN D TOTAL CALIBRATORS B24839 PARA UTILIZAR NOS SISTEMAS DE IMUNOENSAIO ACCESS 2 COM NOME DE TESTE: VitdA Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Rastreabilidade Os Access 25(OH) Vitamin D Total Calibrators são utilizados para calibrar o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total para a determinação quantitativa dos níveis totais de 25 hidroxivitamina D [25(OH)D] no soro humano e no plasma utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access 2. Os resultados devem ser utilizados como auxílio na avaliação de suficiência de vitamina D. A calibração de um ensaio quantitativo é o processo pelo qual as amostras com concentrações conhecidas de analito (por ex., calibradores de ensaio) são testadas como amostras de doentes a fim de medir a sua resposta. A relação matemática entre as respostas medidas e as concentrações conhecidas de analito define a curva de calibração. Esta relação matemática, ou curva de calibração, é usada para converter as medidas de Unidades Relativas de Luz (RLU) das amostras dos doentes em concentrações de analito quantitativas específicas. A substância a ser medida (analito) nos Access 25(OH) Vitamin D Total Calibrators é rastreável relativamente a um procedimento de método de referência (RMP) de espectrometria de massa por diluição isotópica (ID LC MS/MS) aprovado pelo Joint Committee for Traceabilty in Laboratory Medicine (JCTLM) e desenvolvido na Ghent University. 25,26 Este procedimento de método de referência (RMP) é também rastreável relativamente a NIST SRM 2972. 26,27 O processo de rastreabilidade baseia se na norma EN ISO 17511. Uma comparação entre 40 amostras de soro avaliadas com o ensaio Access 25(OH) Vitamin D Total no sistema de Imunoensaio Access 2 e este procedimento de método de referência (RMP) deu origem aos seguintes resultados (regressão de Deming ponderada): N Inclinação Intervalo de observações Unidade = ng/ml Intercepção Unidade = nmol/l Intervalo de observações Intercepção 40 0,94 (0,75 1,13) 9,0 79,2 0,17 ( 5,34 5,69) 22,5 198,0 0,43 ( 13,35 14,22) Intervalo de concentração observada do RMP. Página 11

Gráfico de dispersão com correlação de Deming 100 90 Access 25(OH) Vitamin D Total Access 2 (ng/ml) 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Identidade Correlação de Deming ponderada y = 0.94x + 0.17 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 RMP ID-LC-MS/MS 25(OH) vitamina D (ng/ml) Os valores atribuídos por outras metodologias podem ser diferentes. Tais diferenças, se presentes, podem ser causadas por desvios entre os métodos. Informações sobre o produto Access 25(OH) Vitamin D Total Calibrators (para utilizar em Sistemas de Imunoensaio Access 2) N.º Cat. B24839: S0 S5, 1,4 ml/recipiente Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e congelar entre 15 e 30 C. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado, por abrir, entre 15 e 30 C. Descongelar à temperatura ambiente. Misturar bem o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Depois de retirados do armazenamento entre 15 e 30 C, os recipientes descongelados permanecem estáveis entre 2 e 10 C durante 56 dias. Rotular os recipientes com a data de descongelamento ou a data de validade. Colocar os calibradores a uma temperatura entre 2 e 10 C após cada utilização. Não voltar a congelar recipientes abertos. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. Consultar o cartão de calibração para as concentrações exactas. S0: Soro humano, < 0,1% de azida sódica e 0,1% de ProClin 300 S1, S2, S3, S4, S5: Cartão de calibração: Soro humano com níveis de 25(OH) vitamina D de aproximadamente 7, 18, 35, 74 e 167 ng/ml. (18, 45, 88, 185 e 418 nmol/l), < 0,1% de azida sódica e 0,1% de ProClin 300 1 Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos Access 25(OH) Vitamin D Total B29597A 2014 Beckman Coulter, Inc. Página 12

adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos recipientes segundo os regulamentos e as normas locais. O material de origem humana utilizado na preparação do reagente foi testado e considerado negativo ou não reactivo para a Hepatite B, a Hepatite C (HCV) e para o Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV 1 e HIV 2). Dado que nenhum método de ensaio conhecido pode oferecer a segurança completa da ausência de agentes infecciosos, manusear os reagentes e as amostras dos doentes como potencialmente infecciosos. 28 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 10 Xi. Irritante: ProClin 300 0,1%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28 37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Detalhes de calibração Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Executar o Access 25(OH) Vitamin D Total Calibrator S0 em quadruplicado, o Calibrador S1 em triplicado e o Calibrador S2 S5 em duplicado. Os Access 25(OH) Vitamin D Total Calibrators são fornecidos em 6 níveis zero e aproximadamente 7, 18, 35, 74 e 167 ng/ml. (18, 45, 88, 185 e 418 nmol/l). A calibração do ensaio é necessária a cada 28 dias. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. Página 13

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Fabricado por: Beckman Coulter, Inc. 250 S. Kraemer Blvd. Brea, CA 92821 U.S.A. Beckman Coulter do Brasil Com e Imp de Prod Lab Ltda Estr dos Romeiros, 220 Galpao G3 KM 38.5 06501 001 Sao Paulo SP Brasil CNPJ: 42.160.812/0001 44 Beckman Coulter Ireland Inc. Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland 353 91 774068 Impresso nos Estados Unidos da América Fabricado nos Estados Unidos da América Editado em Janeiro 2014 Página 15