ANEXOS ANEXO I Cálculos para a Preparação de Solução Tampão de Fosfato de Potássio 0,1 M, p.h. 6,8 M(K 2 HPO 4 ) = 174,18 g/mol M(KH 2 PO 4 )=136,09 g/mol Cálculo do número de mol n necessário para a realização de uma solução de concentração 1M e de volume 25 ml: Cálculo da massa m correspondente a 0,025 mol de cada um dos reagentes: de K 2 HPO 4 de KH 2 PO 4
ANEXO II Cálculos para Preparação de Solução Tampão de Tris-HCl 0,1 M, p.h. 7,0 M(HCl) = 36,5 g/mol Densidade da solução de HCl a 37% = 1,19 g/ml 1,19 Kg/L M((HOCH 2 ) 3 CNH 2 )= 121 g/mol Cálculo do número de mol n necessário para a realização de uma solução de concentração 0,1M e de volume 100 ml: Cálculo da massa m, em gramas, correspondente a 0,010 mol de (HOCH 2 ) 3 CNH 2 : de (HOCH 2 ) 3 CNH 2 Cálculo do volume v, em ml, de HCl a 37 % necessário para a realização de uma solução de concentração 0,1M e de volume 100 ml: 1. Cálculo do valor de massa m, em gramas, de HCl por litro de solução: de HCl por Litro de solução
2. Cálculo da massa m, em gramas, correspondente a 0,010 mol necessárias para a realização da solução de HCl de concentração 0,1M e de volume 100 ml: de HCl 3. Cálculo do volume v, em ml, da solução de HCl 37% necessário: de solução de HCl a 37%.
ANEXO III Cálculos para Preparação das soluções padrão de o-np M(C 6 H 5 NO 3 ) = 139,1 g/mol Cálculo do número de moles n necessário para a realização de uma solução de concentração 1 mm e de volume 100 ml: Cálculo da massa m, em gramas, correspondente a de C 6 H 5 NO 3 : de C 6 H 5 NO 3 Cálculo dos volume V 1, em ml, que irão ser retirados da solução-mãe para realização das soluções padrão: Sendo: C 1 a concentração da solução-mãe 1000 µm; V 1 o volume a ser retirado da solução-mãe; C 2 a concentração da solução padrão a realizar de 5 a 50 µm; V 2 o volume total da solução padrão 10 ml.
Tabela A-I. Resumo dos valores obtidos nos cálculos necessários para a realização das soluções padrão de o-np Volume retirado da solução-mãe (ml) Volume de solução tampão adicionada (ml) Volume total da solução (ml) Concentração da solução padrão (µm) 0,05 9,95 10 5 0,10 9,90 10 10 0,15 9,85 10 15 0,20 9,80 10 20 0,25 9,75 10 25 0,30 9,70 10 30 0,35 9,65 10 35 0,40 9,60 10 40 0,45 9,55 10 45 0,50 9,50 10 50
ANEXO IV Cálculos para Preparação das soluções padrão de Lactozym 2600 L para o ensaio de Bradford Densidade de Lactozym 2600 L = 1,115 g/ml Cálculo da concentração C 2, em grama por mililitro, da solução mãe: Cálculo das concentrações C 2, em grama por mililitro, das soluções padrão feitas a partir da solução-mãe: Sendo: C 1 a concentração da solução-mãe 0,1115 g/ml; V 1 o volume que foi retirado da solução-mãe de 2 a 60 µl; C 2 a concentração da solução padrão; V 2 o volume total da solução padrão 1 ml.
Tabela A-II. Resumo dos valores obtidos nos cálculos necessários para a realização das soluções padrão de proteína Volume retirado da solução-mãe (µl) Volume de solução tampão adicionada (µl) Volume total da solução (ml) Concentração da solução padrão (g/ml) 2 998 1 0,0002 5 995 1 0,0006 10 990 1 0,0011 15 985 1 0,0017 20 980 1 0,0022 25 975 1 0,0028 30 970 1 0,0033 40 960 1 0,0045 50 950 1 0,0056 60 940 1 0,0067
ANEXO V Cálculo para a Preparação das diluições de Lactozym 2600 L utilizadas paras os ensaios com enzima livre Densidade de Lactozym 2600 L = 1,115 g/ml Cálculo das concentrações C 2, em grama por mililitro, das soluções padrão feitas a partir de Lactozym 2600 L : Sendo: C 1 a concentração da preparação enzimática 1,115 g/ml; V 1 o volume que foi retirado da solução-mãe de 0,004 ml a 1 ml; C 2 a concentração da solução padrão; V 2 o volume total da solução padrão 10 ml. Tabela A-III. Resumo dos valores obtidos nos cálculos necessários para a realização das diluições de Lactozym 2600 L Volume retirado da solução-mãe (µl) Volume de solução tampão adicionada (µl) Volume total da solução (ml) Concentração da solução padrão (g/ml) 0,02 9,980 10 0,0023 0,01 9,990 10 0,0012 0,008 9,992 10 0,0009 0,005 9,995 10 0,0006 0,004 9,994 10 0,0005
ANEXO VI Cálculos para a Preparação de Solução de Ácido Sulfúrico 12N Densidade de H 2 SO 4 95-97%= 1,84 g/ml Equivalente-grama (E) de H 2 SO 4 = 49 g Cálculo do número de equivalentes, nº eq., existentes numa solução de H 2 SO 4 de concentração 12N e de volume 50 ml: Cálculo da massa, m, de H 2 SO 4 existente em 0,6 equivalentes: Cálculo do volume, v, de solução de H 2 SO 4 a 95-97% necessária para a realização de uma solução de H 2 SO 4 de concentração 12N, tendo em conta a massa, m calculada anteriormente:
ANEXO VII Cálculo para a Preparação das soluções padrão de glucose M(C 6 H 12 O 6 ) = 180,16 g/mol Cálculo do número de moles n necessário para a realização de uma solução de concentração 50 mm e de volume 50 ml: Cálculo da massa m, em gramas, correspondente a de C 6 H 12 O 6 : de C 6 H 12 O 6 Cálculo dos volume V 1, em ml, que irão ser retirados da solução-mãe para realização das soluções padrão: Sendo: C 1 a concentração da solução-mãe 50 mm; V 1 o volume a ser retirado da solução-mãe; C 2 a concentração da solução padrão a realizar de 0,25 a 2 mm; V 2 o volume total da solução padrão 10 ml.
Tabela A-IV. Resumo dos valores obtidos nos cálculos necessários para a realização das soluções padrão de glucose Volume retirado da solução-mãe (ml) Volume de solução tampão adicionada (ml) Volume total da solução (ml) Concentração da solução padrão (mm) 0,05 9,95 10 0,25 0,10 9,90 10 0,50 0,15 9,85 10 0,75 0,18 9,82 10 0,90 0,20 9,80 10 1,00 0,25 9,75 10 1,25 0,30 9,70 10 1,50 0,35 9,65 10 1,75 0,38 9,62 10 1,90 0,40 9,60 10 2,00