DIAGNÓSTICO DE GESTAÇÃO E QUANTIFICAÇÃO EMBRIONÁRIA/FETAL POR MEIO DE AVALIAÇÃO ULTRA-SONOGRÁFICA TRANSRETAL EM OVINOS

ARS VETERINARIA, 17(1):17-21, 2001. 17 DIAGNÓSTICO DE GESTAÇÃO E QUANTIFICAÇÃO EMBRIONÁRIA/FETAL POR MEIO DE AVALIAÇÃO ULTRA-SONOGRÁFICA TRANSRETAL EM OVINOS (PREGNANCY DIAGNOSIS AND EMBRIONARY/FOETAL QUANTIFICATION BY TRANSRECTAL UNTRASONOGRAPHYC EVALUATION IN SHEEP) M. CHALHOUB 1, N. C. PRESTES 2, M.D. LOPES 2, L. A. TRINCA 3, A. L. RIBEIRO FILHO 1 RESUMO O diagnóstico precoce de gestação e a habilidade de quantificar os fetos são úteis para um bom manejo reprodutivo e nutricional. Objetivou-se averiguar a probabilidade de acerto no diagnóstico de gestação e na quantificação embrionária/ fetal, em função do tempo após a cobertura, realizado por ultra-sonografia transretal. Para tal, utilizaram-se 20 ovelhas Bergamácia, adultas, com cio sincronizado e cobertas por um mesmo reprodutor. A avaliação ultra-sonográfica foi realizada a cada 24 horas, iniciando-se no 15 O dia e seguindo até o 30 O dia pós cobertura; além disso, as avaliações foram realizadas a cada cinco dias do 30 O ao 45 O dia, utilizando-se aparelho com transdutor linear de 5,0 e 7,5 MHz. No modelo ajustado (p=0,99), a percentagem de acerto no diagnóstico de gestação de 95 e 99% ocorreu nos dias 23 e 27 após cobertura, respectivamente. No modelo ajustado (p=0,98) a percentagem de acerto da quantificação embrionária/fetal de 95% ocorreu no 32 O dia, e a partir do dia 37 esta probabilidade foi de 99%. Concluiu-se que o diagnóstico de gestação e a quantificação embrionária/fetal por ultra-sonografia transretal em ovinos são viáveis e de grande acurácia. PALAVRAS-CHAVE: Diagnóstico de gestação, quantificação embrionária/fetal, ultra-sonografia, ovino. SUMMARY Early pregnancy diagnosis and the ability to count the number of fetuses are useful tools for the good ovine nutritional and reproductive management. The objectives of this study were to investigate the possibility of performing accurate pregnancy diagnoses and embryonic/fetal quantification based on mating date by transrectal ultrasonography. Twenty adult Bergamacia ewes with synchronized estrus were covered by the same male. Ultrasonographic evaluation was performed every 24 hours from the 15 th day until the 30 th day post mating, and then every five days from the 30 th to the 45 th day, using 5.0 and 7.5 MHz linear transducers. The adjusted model (p=0.99) showed that the 95% and 99% of pregnancies were accurately diagnosed on the 23 rd and the 27 th days post mating, respectively. The adjusted model (p=0.98) also showed that the 95% embryonic/fetal quantification was accurately made on the 32 nd day, and from the 37 th day the probability was 99%. In conclusion, pregnancy diagnosis and embryonic/fetal quantification by transrectal ultrasonography in ovine are feasible and very accurate. KEY-WORDS: Pregnancy diagnosis, embryonic/fetal quantification, ultrasonography, ovine. 1 Professor do Departamento de Patologia e Clínicas da EMV/UFBA. e-mail: chalhoub@ufba.br 2 Professor do Departamento de Reprodução Animal e Radiologia Veterinária da FMVZ/Unesp - Botucatu 3 Professora do Departamento de Bioestatística do IB/Unesp - Botucatu

18 ARS VETERINARIA, 17(1):17-21, 2001. INTRODUÇÃO O diagnóstico de gestação em ovelhas é considerado de valor econômico para os produtores. O diagnóstico precoce de gestação e a habilidade de quantificar os fetos são úteis para um manejo reprodutivo, nutricional e para fins comerciais (AIUMLAMAI et al., 1992). Além disso, a maior causa de perdas reprodutivas nos rebanhos ovinos é de ovelhas que supostamente estavam gestantes após uma cobertura, porém falharam em parir (SMITH et al., 1996). Uma alimentação adequada minimiza perdas reprodutivas e maximiza a eficiência de conversão alimentar e retorno econômico, quando o status da gestação e a idade gestacional poderem ser determinados (LANGFORD et al., 1984). O principal motivo para o diagnóstico precoce de gestação é a possibilidade de descrição e acompanhamento do desenvolvimento embrionário e fetal, com detecção de prováveis perdas no momento em que se faz esse diagnóstico mais precocemente (AIUMLAMAI et al., 1992; KAHN, 1994). O objetivo deste estudo foi averiguar a probabilidade de acerto no diagnósticos de gestação por ultra-sonografia transretal e na quantificação embrionária/ fetal em função do tempo após a cobertura. MATERIAL E MÉTODOS Utilizaram-se 20 ovelhas Bergamácia, com idade variando de três a seis anos. Os animais foram tratados com duas injeções de prostaglandina F 2 α (cloprostenol1 ) na dose de 125 μg por animal (0,4 ml), com intervalo de 11 dias, por via intramuscular, para sincronizar o estro. Para detecção do estro utilizou-se rufião vasectomizado, sendo realizadas duas observações diárias. As ovelhas em cio foram cobertas por um mesmo reprodutor da raça Bergamácia, de forma controlada. A avaliação ultra-sonográfica foi realizada a cada 24 horas, iniciando-se no 15 O dia e seguindo até o 30 O dia pós-cobertura, a partir do qual foram efetuadas a cada cinco dias, até o dia 45. O dia zero foi considerado o dia da cobertura. O estudo foi realizado com aparelho 2 composto de transdutor linear de 5,0 e 7,5 MHz. Para efetivação dos exames foi utilizado um adaptador de tubo de policloreto de vinila (PVC), com a finalidade de servir como extensor e apoio para o transdutor, facilitando sua manipulação transretal (CHALHOUB, 2000). No momento do exame, o operador aplicava sobre o dedo enluvado carboximetilcelulose (mucilagem) para lubrificar o esfíncter anal, facilitando o subseqüente esvaziamento do reto. Posteriormente, a mucilagem foi colocada sobre o transdutor, o qual foi introduzido no reto até que fosse possível a identificação de um dos cornos uterinos. Neste momento, o transdutor foi rotacionado em um ângulo de 90 graus no sentido horário e 180 graus no sentido oposto, até que todo o trato reprodutivo fosse explorado. Os animais não foram submetidos a jejum hídrico ou alimentar. O diagnóstico de gestação e a quantificação embrionária/fetal foram realizados a cada exame. Evitouse o relacionamento do número do animal e seu estado reprodutivo na avaliação anterior. Para tal, fizeram-se os exames ultra-sonográficos sem a identificação prévia do animal. As prováveis perdas embrionárias precoces (PEP) foram averiguadas. Para as avaliações realizadas entre o 30 O e 45 O dia de gestação, considerou-se o intervalo médio entre os exames. Para a avaliação da probabilidade de acerto no diagnóstico de gestação em função do tempo após a cobertura, utilizou-se a análise probit. Para os animais gestantes, na avaliação da probabilidade de acerto na quantificação embrionária/fetal em função do tempo após a cobertura, utilizou-se o mesmo tipo de análise (COLLETT, 1991). RESULTADOS E DISCUSSÃO Dos 20 animais inicialmente utilizados, um não respondeu ao tratamento hormonal de sincronização de cio. Dos 19 animais que entraram em cio, 100% emprenharam, sendo 57,9% (n=11) gestações simples, 36,8% (n=7) gestações gemelares e 5,3% (n=1) gestações indefinidas quanto ao número de embriões, devido a PEP. Nos animais em que se identificaram embriões, as gestações vieram a termo, com exceção de uma que foi interrompida pela morte de uma ovelha devido a enterotoxemia no 37 O dia de gestação. A não-realização de jejum hídrico ou alimentar não influenciou negativamente a manipulação do transdutor e a localização das estruturas almejadas. Como os procedimentos foram realizados diariamente, o jejum de 12 horas poderia comprometer o regime alimentar dos animais. O adaptador de PVC utilizado facilitou a manipulação do transdutor na ampola retal. Não foram observados traumatismos no esfíncter ou na ampola retal, porém pequenas estrias de sangue estiveram presentes nos dois ou três primeiros dias da realização dos exames em alguns animais. Essas pequenas lesões não apresentaram nenhuma importância clínica e foram igualmente relatadas por SCHRICK & INSKEEP (1993). Os resultados do diagnóstico de gestação,

ARS VETERINARIA, 17(1):17-21, 2001. 19 independentemente do número de fetos, e da quantificação embrionária/fetal estão apresentados na Tabela 1. A análise de regressão probitusada para avaliar o efeito de dias de gestação na percentagem de acerto, fornecendo os modelos de ajuste para o diagnóstico de gestação e a quantificação embrionária/fetal, está ilustrada nas Figuras 1 e 2, respectivamente. No modelo ajustado (p=0,99), a percentagem de acerto no diagnóstico de gestação de 95 e 99% ocorreu nos dias 23 e 27 após a cobertura, respectivamente. Os valores observados para satisfazer a probabilidade de 50% ocorreram no primeiro dia de avaliação (15 O dia), e para 95 e 99% ocorreram no dia 26 após a cobertura, quando todos animais foram corretamente diagnosticados. A quantificação embrionária/fetal foi avaliada a partir do 20 O dia após a cobertura. Antes disso não foi possível diferenciar entre gestação simples e múltipla. No modelo ajustado (p=0,98), a percentagem de acerto antes do 20 O dia foi inferior a 50 %, e no dia 32, de 95%; a partir do dia 37 essa probabilidade foi de 99%. Os valores observados para satisfazer a probabilidade de 95 e 99% ocorreram no 40 O dia após a cobertura, quando todos animais tiveram seus fetos corretamente quantificados. A percentagem de diagnóstico de gestação correto a partir do 22 O dia (94,74%) foi semelhante à dos trabalhos relatados por WHITE et al. (1984), TAVERNE et al. (1985), DAVEY (1986), LONGUE et al. (1987), BUCKRELL (1988), ALVES (1992), BOTELHO et al. (1993), OLIVEIRA et al. (1993) e MALIK et al. (1998), que utilizaram diferentes períodos de avaliação, vias de acesso e transdutores, definindo que a técnica de ultrasonografia de tempo real é muito precisa para essa finalidade. Por outro lado, a via de acesso transretal utilizada neste experimento permitiu o diagnóstico de gestação mais precoce do que os relatados pelos autores que utilizaram a via transabdominal. Quando se considera a via transretal, o diagnóstico de gestação é mais precoce em relação à via transabdominal. GARCIA et al. (1993) utilizaram transdutor de 5,0 MHz e encontraram uma acurácia de 52% e 85% com animais entre 17 e 19 dias e entre 30 e 32 dias após a cobertura, respectivamente. Essas percentagens são inferiores às obtidas neste experimento, pois no 17 O dia a percentagem de diagnóstico de gestação foi de 70,59%, e a partir do 26 O dia, de 100%. Deve-se levar em conta que o transdutor utilizado foi de 7,5 MHz, que possui maior capacidade de resolução de imagem; além disso, neste trabalho todos os animais conceberam. Com a percentagem de acerto no diagnóstico de gestação de 100% a partir do 26 O dia de gestação, e em concordância com KAHN (1994), o diagnóstico não deve ser realizado antes do 30 O dia após a cobertura, principalmente em rebanhos comerciais. A caracterização da perda embrionária em um animal se deu pelo acompanhamento ultra-sonográfico. Entre o 15 O e o 17 O dia não se identificou líquido intra- Tabela 1 - Acurácia no diagnóstico de gestação e quantificação embrionária/fetal em ovelhas da raça Bergamácia obtida entre os dias 15 e 45 após a cobertura, por meio de ultra-sonografia transretal. Apresentação dos dias após a cobertura, número de animais avaliados (n avaliado) e percentagem de acerto (%). Diagnóstico de gestação Quantificação em brionária/fetal Dias após a cobertura N O avaliado Percentagem de acerto (*) N O avaliado Percentagem de acerto (*) 15 13 53,85 (7) - - 16 17 76,47 (13) - - 17 17 70,59 (12) - - 18 17 70,59 (12) - - 19 19 78,95 (15) - - 20 19 84,21 (16) 17 52,94 (9) 21 19 89,47 (17) 18 55,56 (10) 22 19 94,74 (18) 19 57,89 (11) 23 19 94,74 (18) 19 57,89 (11) 24 17 94,12 (16) 17 70,58 (12) 25 16 93,75 (15) 16 68,75 (11) 26 18 100,00 (18) 17 82,35 (14) 27 18 100,00 (18) 17 94,41 (16) 28 17 100,00 (17) 16 87,50 (14) 29 17 100,00 (17) 16 87,50 (14) 30 18 100,00 (18) 17 94,41 (16) 35 19 100,00 (19) 18 94,44 (17) 40 18 100,00 (18) 17 100,00 (17) 45 17 100,00 (17) 16 100,00 (16) (*) Número de animais com diagnóstico correto.

20 ARS VETERINARIA, 17(1):17-21, 2001. Percentagem de acerto -- 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Dias de gestação Percentagem observada Percentagem ajustada Figura 1 - Acurácia no diagnóstico de gestação e quantificação embrionária/fetal em ovelhas da raça Bergamácia obtido entre os dias 15 e 45 após a cobertura através de ultrasonografia transretal. Apresentação da percentagem de acerto no diagnóstico de gestação em ovelhas em função do dia de gestação. 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 15 20 25 30 35 40 45 50 Dias de gestação Percentagem observada Percentagem ajustada Figura 2 - Acurácia no diagnóstico de gestação e quantificação embrionária/fetal em ovelhas da raça Bergamácia obtido entre os dias 15 e 45 após a cobertura através de ultrasonografia transretal. Percentagem de acerto na quantificação embrionária/fetal em ovelhas em função do dia de gestação. Percentagem de acerto -- uterino, fato que ocorreu no 18 O dia após cobertura. No 19 O dia observou-se a formação de uma vesícula de forma arredondada de, 8,2 mm de diâmetro, no 22 O e 23 O dia o diâmetro foi de 9,1 e 12,4 mm, respectivamente. No 25 O dia a quantidade de líquido intra-uterino diminuiu, sendo demonstrada pela redução do diâmetro da vesícula para 5,9 mm, valor muito inferior ao dos demais animais com a mesma idade após cobertura (16,2 ± 3,7 mm), e a partir do 26 O dia não foi mais possível a identificação da vesícula. Baseando-se nesses achados, a PEP ocorreu entre os dias 18 e 25 após a cobertura. Com relação ao resultado, em nenhum caso ocorreu erro na determinação da quantidade de fetos. Após a identificação dos embriões não se detectou perda embrionária ou fetal, de modo parcial ou total. Contrariamente, SCHRICK & INSKEEP (1993) relataram a PEP parcial em duas ovelhas com gestação gemelar em torno dos dias 25 e 40, e SANTIAGO MORENO et al. (1995) relataram quatro PEPs entre os dias 19 e 29 de gestação, sendo três totais e uma parcial. KAULFUSS et al. (1996) encontraram 24,59% de PEP, sendo 6,56% perda total e 18,03% perda parcial. Para GARCIA et al. (1993), no caso da via transretal antes do dia 24, o diagnóstico de gestação em vários casos baseou-se na aparência ultra-sonográfica do lume uterino associada à localização do útero em relação à bexiga, e não na detecção do embrião. Por outro lado, quando se utiliza a via transabdominal, normalmente o feto já é identificável (KAHN, 1994). Esse fato, associado à menor ocorrência de perda fetal em relação à perda embrionária, pode explicar a maior relação entre fetos identificados e cordeiros nascidos do que embriões identificados e cordeiros nascidos. CONCLUSÃO Concluiu-se que o diagnóstico de gestação e a quantificação embrionária/fetal por ultra-sonografia transretal em ovinos são viáveis e de grande acurácia. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS AIUMLAMAI, S., FREDRICKSSON, G., NISLFORS, L. Real-time ultrasonography for determination of the gestational age of ewes. Veterinary Record, v.131, p.560-62, 1992. ALVES, L.C. Biopsia vaginal, dosagem de progesterona, laparoscopia e ultra-sonografia, com meios de diagnóstico de gestação em ovinos. Santa Maria, RS. 1992. 60p. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) - Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Santa Maria. BOTELHO, C.B., MATTOS, R.C., GREGORY, R.M. Diagnóstico ultra-sonográfico de gestação em ovinos.

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