d.a.u. Monoclonal Amphetamine/Methamphetamine Assay

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1 Syva d.a.u. Monoclonal Amphetamine/Methamphetamine Assay Informações Actualizadas: Consultar as secções 9, 11, 12, 14 e o painel final. Ensaio de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal 1 Fim a que se destina O Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal é um imunoensaio enzimático homogéneo que se destina a ser utilizado na análise qualitativa ou semiquantitativa de anfetaminas em urina humana. Este ensaio utiliza um nível de "cutoff" de 1000 ng/ml para distinguir as amostras positivas das negativas. O Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal fornece apenas um resultado preliminar de teste analítico. Deve ser utilizado um método químico alternativo 1 com maior especificidade para obter um resultado analítico confirmado. O método de confirmação preferido é a cromatografia gasosa/espectrometria de massa (CG/EM). 1 Encontram-se disponíveis outros métodos de confirmação química. A consideração clínica e a avaliação profissional deverão ser utilizadas em qualquer resultado do teste de droga de abuso, particularmente quando são utilizados resultados positivos preliminares. 2 Resumo e explicação do teste Aa anfetaminas são estimulantes do sistema nervoso central que produzem um estado de alerta, aumento da energia, redução da fome e uma sensação geral de bem-estar. 1,2 O termo "anfetamina" inclui muitas drogas, mas as mais comuns são a D-anfetamina, D-metanfetamina (o derivado N-metil da anfetamina) e a D,L-anfetamina. 2 As anfetaminas podem ser ingeridas por via oral, intravenosamente, por fumo ou inalação. 1 As anfetaminas são facilmente absorvidas pelo tracto gastrointestinal e depois são desactivadas no fígado ou eliminadas inalteradas pela urina. A importância relativa destes modos de eliminação depende do ph urinário. A anfetamina é metabolizada em metabolitos desaminados (ácidos hipoúricos e benzóicos) e hidroxilados. A metanfetamina é parcialmente metabolizada em anfetamina, o seu metabolito activo principal. 1 As anfetaminas aparecem na urina dentro de três horas após qualquer tipo de administração 3 e podem ser detectadas por este ensaio Emit até 24 a 48 horas depois da última dose. 1 O Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal utiliza um nível de "cutoff" de 1000 ng/ml de D-metanfetamina, compatível com o nível recomendado nas directrizes do National Institute on Drug Abuse (NIDA) quando é efectuado o despiste de anfetaminas. O ensaio também detecta a D-anfetamina, D,L-anfetamina, metilenedioxianfetamina (MDA) e metilenedioximetanfetamina (MDMA) em urina humana (consultar a Tabela 4). Visto conter anticorpos monoclonais, este ensaio está menos sujeito a interferência por compostos semelhantes à anfetamina do que os ensaios que contêm anticorpos policlonais. Embora as interferências sejam reduzidas com este ensaio, como em qualquer teste imunológico, existem no entanto alguns compostos interferentes. Por este motivo, é sempre recomendada a confirmação de resultados positivos preliminares. Os métodos historicamente utilizados para a detecção de anfetaminas em líquidos biológicos incluem a cromatografia em camada fina, cromatografia gasosa, fluorometria, microcristalografia, imunoensaio enzimático e radioimunoensaio. 4 Apesar de outras técnicas de confirmação para além da CG/EM poderem ser adequadas para algumas drogas de abuso, a CG/EM é geralmente aceite como uma técnica de confirmação eficaz para todas as drogas, uma vez que fornece o melhor nível de confiança no resultado. 1 3 Princípio Syva 3C534UL.16SL O Ensaio Emit é uma técnica de imunoensaio enzimático homogéneo utilizada para a análise de compostos específicos em urina humana. 5 O ensaio baseia-se na competição para os locais de ligação dos anticorpos entre a droga presente na amostra e a droga marcada com a enzima glucose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH). A actividade enzimática diminui após a ligação com o anticorpo, pelo que a concentração da droga na amostra pode ser medida em termos de actividade enzimática. A enzima activa converte o dinucleótido de adenina nicotinamida (NAD) para NADH, resultando numa alteração na absorvância que é medida espectrofotometricamente. A G6PDH sérica endógena não interfere, pois a coenzima funciona apenas com a enzima bacteriana (Leuconostoc mesenteroides) utilizada no ensaio. 4 Reagentes REF Descrição do produto Quantidade/Volume 3C549 Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/ Aproximadamente Metanfetamina Monoclonal 300 testes Reagente A Anticorpo/Substrato 6.0 ml* Anticorpos monoclonais de rato reactivos à D-anfetamina e D-metanfetamina, glicose-6-fosfato, nicotinamida adenina dinucleótido, tampão Tris, agentes espessantes, estabilizadores e azida de sódio a 0.05% Reagente B Enzima 6.0 ml* Anfetaminas marcadas com glicose-6-fosfato desidrogenase bacteriano, Tampão Tris, agentes espessantes, estabilizadores e azida de sódio a 0.05% Tampão concentrado Emit para o ensaio de drogas 13.3 ml Quando diluído, contém Tampão Tris, surfactante e azida de sódio a 0.05% 9A049 Calibrador de Nível 0 Emit (negativo) 5.0 ml* 9A169 Calibrador A de Nível 1 Emit (cutoff) 5.0 ml* 9A189 Calibrador A de Nível 2 Emit (máximo) 5.0 ml* 9A059 Calibrador de Nível 0 Emit (negativo) 25.0 ml* 9A369 Calibrador A de Nível 1 Emit (cutoff) 25.0 ml* 9A389 Calibrador A de Nível 2 Emit (máximo) 25.0 ml* (Consultar Tabela 1 para as concentrações da droga) *Os reagentes e calibradores são enviados sob a forma liofilizada. O volume indicado é o volume necessário para a reconstituição. A titulação do anticorpo e a actividade do conjugado enzimático podem variar de lote para lote. Necessário para utilização com o Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal. Vendido em separado. O Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metamfetamina Monoclonal foi optimizado para utilização com os calibradores Emit conjunto A, que contêm D-metanfetamina; não deve ser utilizado com os calibradores Emit conjunto B, que contêm D-anfetamina. Nota: Os reagentes A e B são fornecidos como um conjunto correspondente. Não devem ser trocados com componentes de kits com números de lote diferentes. Os Calibradores Emit, quando reconstituídos, contêm as concentrações de D-metanfetamina referidos na Tabela 1. Tabela 1 Concentrações de D-Metanfetamina nos Calibradores Emit Calibrador Calibrador de Nível 0 Emit (negativo) 0 Calibrador A de Nível 1 Emit (cutoff)* 1000 Calibrador A de Nível 2 Emit (máximo)* 3000 *Estes calibradores contêm drogas de abuso suplementares que não afectam o ensaio. Para utilização em diagnóstico in vitro. Precauções Os reagentes e o tampão contêm azida de sódio. A azida de sódio pode reagir com as canalizações de chumbo ou de cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Se os resíduos forem eliminados através dos esgotos, enxaguar com um grande volume de água para prevenir a formação de azidas. Após a reconstituição inicial, cada kit não contém mais do que % p/v de mercúrio, sob a forma de timerosal (timerosal 0.005% p/v). Manusear e eliminar de forma adequada. Preparação e armazenamento dos componentes do ensaio Reagentes Para reconstituir os reagentes A e B: Registar a data de reconstituição. Retirar o selo metálico e a tampa de borracha do frasco. Marcar a tampa de borracha para a identificar com o frasco. Adicionar 6 ml de água destilada ou desionizada. Colocar a tampa de novo no frasco. Agitar o frasco até o pó se encontrar dissolvido. Manter os reagentes reconstituídos a uma temperatura ambiente de C durante pelo menos uma hora antes da utilização; alternativamente, reconstituir os reagentes no dia anterior a serem utilizados e armazenar em frigorífico (2 8 C, F) de um dia para o outro. Permitir que os reagentes atinjam a temperatura ambiente antes da sua utilização.

2 Tampão Para preparar a solução tampão a partir do tampão concentrado: Registar a data da preparação do tampão. Retirar a tampa e o selo do frasco de tampão concentrado. Deitar a totalidade do tampão concentrado para um contentor de plástico ou vidro, limpo e graduado. Enxaguar o frasco do concentrado várias vezes com água destilada ou desionizada, deitando a água no contentor de cada vez que o fizer. Encher o contentor até atingir a marca dos 200 ml com água destilada ou desionizada. Colocar a tampa no contentor e inverter várias vezes para misturar exaustivamente. Tabela 2 Preparação, armazenamento e estabilidade dos componentes do ensaio Tempo e Temp. de Volume de temp. Estabilidade* Armazen- Reconst. mínimos de Preparado/ Componente amento (ml) reconst. Não aberto Aberto Reagente A 2 8 C h Prazo val. 4 sem Reagente B 2 8 C h Prazo val. 4 sem Tampão Não aberto 2 8 C Nenhum Prazo val. (36 46 F) Diluído C sem Calibradores 2 8 C 5.0/ h Prazo val. 12 sem *A estabilidade depende da manipulação dos reagentes conforme é indicado. Após a reconstituição, armazenar os calibradores sempre na vertical. Permitir que todos os componentes armazenados em frigorífico atinjam a temperatura ambiente de C antes da utilização. Não congelar ou expor a temperaturas acima de 32 C (90 F). 5 Instrumentos A Syva Company fornece instruções para a utilização do Sistema Syva ETS Plus. 6,7 Contactar o Centro de assistência técnica nos EUA ou o representante local da Syva Company para obter mais informações. 6 Colheita e preparação das amostras As amostras de urina podem ser recolhidas em contentores de plástico (isto é, polipropileno, policarbonato, polietileno) ou de vidro. Alguns plásticos adsorvem as drogas. Se não forem analisadas imediatamente, as amostras podem ser armazenadas sem refrigeração durante um período máximo de sete dias após a colheita. 8 Durante o ensaio, as amostras devem estar à temperatura ambiente de C. As amostras com turvação elevada devem ser centrifugadas antes da análise. As amostras de urina com um ph situado dentro dos limites normais (4.5 8) não requerem qualquer ajuste prévio de ph. As amostras com ph situado fora dos limites normais devem ser alvo de suspeita de adulteração. A adulteração da amostra de urina poderá originar resultados erróneos. Se houver suspeita de adulteração, obter outra amostra. As amostras de urina humanas deverão ser manipuladas e tratadas como se fossem potencialmente infecciosas. 7 Procedimento Materiais fornecidos Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal Reagente A Reagente B Tampão concentrado para o ensaio de drogas Materiais necessários mas não fornecidos Calibrador de Nível 0 Emit (negativo) Calibrador A de Nível 1 Emit (cutoff) Calibrador A de Nível 2 Emit (máximo) Outros itens: Pipeta volumétrica de Classe A Água destilada ou desionizada Sequência do ensaio Para executar o ensaio, consultar o Manual do operador do Sistema Syva ETS Plus. Calibração Existem três níveis de calibradores disponíveis da Syva Company: o Calibrador de Nível 0 Emit (negativo), o Calibrador A de Nível 1 Emit ("cutoff") e o Calibrador A de Nível 2 Emit (máximo). Para analisar os dados, utilizar o Calibrador A de Nível 1 Emit para a análise qualitativa e os três calibradores para a análise semiquantitativa. Calibrar no início de cada dia de trabalho. Recalibrar se mudar de reagentes ou de acordo com as indicações dos resultados de controlo. Consultar as instruções de utilização do Calibrador A Emit ou o Manual do operador do Sistema Syva ETS Plus. Controlo da Qualidade Validar a calibração diária através do ensaio de um controlo positivo e de um negativo. Se os resultados se situarem dentro dos limites aceitáveis definidos pelo seu laboratório e as separações mínimas se mantiverem, efectuar o ensaio das amostras. Para obter informações específicas ao calibrador ou a curva de calibração, consultar o cartão de especificações do calibrador fornecido no kit do ensaio. Manutenção diária Consultar os procedimentos de encerramento e de manutenção do Manual do operador do Sistema Syva ETS Plus. 8 Resultados O Calibrador A de Nível 1 Emit, que contém uma concentração de D-Metanfetamina de 1000 ng/ml, é utilizado como uma referência para distinguir as amostras "positivas" das "negativas". Resultados positivos Uma amostra que apresente uma alteração do valor de absorvância ( A) igual ou superior ao valor A do Calibrador A de Nível 1 é interpretada como positiva. A amostra contém anfetaminas. Resultados Negativos Uma amostra que apresente uma alteração do valor de absorvância ( A) inferior ao valor A do Calibrador A de Nível 1 deve ser interpretada como negativa: Ou a amostra não contém anfetaminas ou estas estão presentes em concentrações inferiores ao nível de "cutoff" para este ensaio. Resultados semiquantitativos É possível efectuar determinações semiquantitativas de anfetaminas através do Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal. Quando forem pretendidas estimativas das concentrações totais relativas da droga, deve ser preparada uma curva padrão através da elaboração de um gráfico com os valores A relativos ao Calibrador de Nível 0 Emit, Calibrador A de Nível 1 e Calibrador A de Nível 2, contra as concentrações de metanfetamina do calibrador. Os valores de A das amostras positivas podem ser comparados com esta curva padrão. Os imunoensaios que produzem um único resultado na presença de múltiplos componentes não podem quantificar completamente a concentração dos componentes individuais. A interpretação dos resultados deve também ter em consideração que as concentrações de urina podem variar muito com a ingestão de líquidos e com outras variáveis biológicas. Deve ser utilizado um método químico alternativo com maior especificidade para obter um resultado analítico confirmado (consultar a secção 1, Fim a que se destina). 9 Limitações O ensaio foi concebido para ser utilizado apenas com urina humana. Um resultado positivo do ensaio indica a presença de anfetaminas ou possivelmente de compostos semelhantes à anfetamina, mas não indica nem mede o nível de intoxicação. As doses terapêuticas das seguintes drogas podem produzir resultados positivos com este ensaio: cloroquina (Aralen ), clorpromazina (Thorazine ), metoxifenamina, quinacrina, fentermina, ranitidina (Zantac ), isometeptina (Midrin ) e procainamida e respectivo metabolito N-acetilprocainamida (NAPA). Visto que a benzfetamina (Didrex ) metaboliza em anfetamina e metanfetamina, as doses terapêuticas desta droga podem também produzir um resultado positivo. Outras substâncias e/ou outros factores não referidos (por ex., erros técnicos ou de procedimento) podem interferir com o teste e produzir resultados falsos. 10 Valores esperados Quando o Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal é utilizado como um ensaio qualitativo, a quantidade de drogas e metabolitos detectada pelo ensaio em determinada amostra não pode ser estimada. Os resultados do ensaio distinguem as amostras positivas das negativas positivo indicando amostras que contêm anfetaminas ou compostos semelhantes à anfetamina ou ambos. Quando utilizado semiquantitativamente, o ensaio apresenta as concentrações cumulativas aproximadas das drogas e metabolitos detectados pelo ensaio (consultar a Secção 8, Resultados). 2 3C534UL.16SL

3 11 Desempenho Os dados apresentados nesta secção foram recolhidos a partir do Sistema Syva ETS. Exactidão Duzentas (200) amostras clínicas de urina foram testadas utilizando o Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal. Oitenta e nove (89) amostras foram positivas com o Ensaio Emit d.a.u. e 111 amostras foram negativas com o Ensaio Emit d.a.u.. Oitenta e oito (88) das amostras determinadas positivas com o Ensaio Emit d.a.u. foram confirmadas por CG/EM como contendo anfetaminas. As amostra restante foi determinada por CG/EM como contendo uma combinação de compostos semelhantes à anfetamina mas não continha anfetamina ou metanfetamina. O Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal e Assay forneceu resultados correctos em 99% dos testes. Em investigações clínicas, a precisão intra-ensaio foi determinada utilizando calibradores Emit contendo concentrações de D-metanfetamina de 0 ng/ml, 1000 ng/ml e 3000 ng/ml. Os dados são apresentados na Tabela 3. Tabela 3 Precisão intra-ensaio Média Desvio Coeficiente de Lab N ( A) padrão( A) variação ( A) Calibrador negativo (0 ng/ml de D-metanfetamina) Calibrador baixo (1000 ng/ml de D-metanfetamina) Calibrador Máximo (3000 ng/ml de D-metanfetamina) Especificidade O Ensaio Emit d.a.u. de Anfetamina/Metanfetamina Monoclonal detecta os compostos de anfetamina na urina. A Tabela 4 apresenta os compostos de anfetamina que se verificou produzirem uma resposta positiva a concentrações iguais ou superiores às apresentadas. Tabela 4 Concentrações dos compostos de Anfetamina que produzem uma resposta positiva D-Anfetamina 400 D,L-Anfetamina 1000 D-Metanfetamina 1000 Metilenodioxianfetamina (MDA) 1000 Metilenodioximetanfetamina (MDMA) 3000 A Tabela 5 apresenta os compostos de anfetamina que se verificou produzirem uma resposta negativa a concentrações inferiores às apresentadas. As concentrações superiores às apresentadas podem produzir uma resposta positiva. Tabela 5 Concentrações de compostos de Anfetamina que produzem uma resposta Negativa (Concentrações superiores podem produzir uma resposta Positiva) L-Anfetamina <2000* L-Metanfetamina <7000* *Têm sido relatadas concentrações de 1600 ng/ml de L-anfetamina 9 e 3160 ng/ml de L-metanfetamina 10 (pico médio). A Tabela 6 apresenta as concentrações dos compostos semelhantes à anfetamina que foram testados e que apresentaram uma resposta negativa. As concentrações superiores aos níveis mencionados podem produzir uma resposta positiva e podem ocorrer em situações terapêuticas. Por este motivo, devem ser confirmados todos os resultados positivos através de um método alternativo. Tabela 6 Concentrações dos compostos semelhantes à Anfetamina que produzem uma resposta negativa L-Efedrina 50 Fenfluramina 10 Mefentermina 10 Fendimetrazina 100 Fenetilamina 10 Fenmetrazina 100 Fenilefrina 200 Fenilpropanolamina 75 Propilhexedrina 2 Pseudoefedrina 100 Nor-pseudoefedrina OH-Tiramina 200 A Tabela 7 apresenta as concentrações dos compostos estruturalmente não relacionados com a anfetamina que foram testados e que apresentaram uma resposta negativa. Tabela 7 Concentrações dos compostos que produzem uma resposta negativa Benzoilecgonina 1000 Dextrometorfano 1000 Dietilpropiona 750 Labetalol 750 Metadona 1000 Morfina 1000 Oxazepam 1000 Fenciclidina 500 Propoxifeno 1000 Secobarbital 1000 As doses terapêuticas das seguintes drogas podem produzir resultados positivos com este ensaio: cloroquina (Aralen ), clorpromazina (Thorazine ), metoxifenamina, quinacrina, fentermina, ranitidina (Zantac ), isometeptina (Midrin ) e procainamida e respectivo metabolito N-acetilprocainamida (NAPA). Visto que a benzfetamina (Didrex ) metaboliza em anfetamina e metanfetamina, as doses terapêuticas desta droga podem também produzir um resultado positivo. A Tabela 8 apresenta as concentrações dos compostos que foram testados para pelo menos um lote e que apresentaram uma resposta negativa. Tabela 8 Concentrações dos compostos testados para pelo menos um lote e que apresentaram uma resposta Negativa Amitriptilina 1000 Desipramina 1000 Imipramina 1000 D,L-Isoproterenol 1000 Isoxsuprina 500 Metilfenidato 1000 Nicotina 250 Nortriptilina 1000 Nilidrina 750 Fenelzina 100 Ácido Ftálico 1000 Escopolamina 500 Trifluoperazina 500 Trimetoprim 500 Tiramina Risco e segurança Tóxico. Contém azida de sódio, timerosal, D-glicose-6-fosfato, sal monossódico. R20/21: Nocivo por inalação e em contacto com a pele. R25: Tóxico por ingestão. R32: O contacto com ácidos liberta gáses muito tóxicos. R33: Perigo de efeitos cumulativos. R43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. Nota: Esta classificação refere-se ao produto liofilizado; após a reconstituição, os ingredientes perigosos serão diluídos e estas precauções poderão não ser aplicáveis. S36/37: Usar vestuário de protecção e luvas adequadas. S45: Em caso de acidente ou de indisposição, consultar imediatamente o médico (se possível mostrar-lhe o rótulo. Preparado em conformidade com a Directiva 92/32/EEC do Concelho da UE sobre rótulos. EINECS EINECS EINECS Para obter informações adicionais sobre saúde e segurança, consultar a ficha de material de segurança (Material Safety Data Sheet - MSDS) disponível no site Internet da Dade Behring Inc., ou contactar o seu representante local. 3 3C534UL.16SL

4 13 Bibliografia Notas 1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA) Research Monograph 73, Cox TC et al: Drugs and Drug Abuse, Addiction Research Foundation, 1983, pp AHFS Drug Information 87, American Society of Hospital Pharmacists, Inc. 1987, pp Gorodetzky CW: Detection of drugs of abuse in biological fluids, in Martin WR (ed): Drug Addiction I. New York, Springer-Verlag, 1977, pp Henry JB: Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. Philadelphia, WB Saunders Co. 1991, pp Syva ETS Plus System Operator s Manual, Cupertino, CA, Syva Company. 7. Syva ETS Plus System Guide, Cupertino, CA, Syva Company. 8. Notice of mandatory guidelines for federal workplace drug testing program; Final Guidelines. Federal Register 1988;69 (April 11): Erfurth SC: Methamphetamine stereoisomer resolution can prevent false positives. Forensic Urine Drug Testing, 1990, pp Fitzgerald RL et al: Resolution methamphetamine stereoisomers in urine drug testing: urinary excretion of R( )-methamphetamine following use of nasal inhalers. J Anal Toxicol 1988;12: Chave dos símbolos Fabricado por EC REP Representante Autorizado IVD Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro LOT Código do Lote EXP YYYY-MM-DD A data em "Utilizar antes de" encontra-se no formato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD) 2 C 8 C Limitação da Temperatura Marca CE REF Número de Catálogo Consulte as Instruções de Utilização PT-1 Para obter assistência técnica, contactar a Syva Company: nos EUA no Canadá Fora dos EUA e Canadá, contactar o representante local da Syva Company SAC - Serviço de Atendimento ao Cliente sac/[email protected] Importado e distribuído por DADE BEHRING LTDA. Rua Geraldo Flausino Gomes, 61-1º Andar Brooklin - São Paulo - SP - CEP Fone (11) Fax (11) CNPJ: / Resp. Téc.: Nanci A. Trindade CRF - SP: Aviso: A adulteração dos reagentes, a utilização de instrumentos inadequados ou outra falha no cumprimento das instruções definidas neste rótulo podem afectar as características do desempenho e as indicações do rótulo explícitas ou implícitas. Syva, Syva, d.a.u., ETS e Emit são marcas comerciais registadas da Syva Company nos EUA e noutros países. Aralen é uma marca comercial registada da Sanofi Synthelabo Inc. Thorazine é uma marca comercial registada da SmithKline Beecham. Zantac é uma marca comercial registada da Glaxo Wellcome Inc. Midrin é uma marca comercial registada da Carnrick Laboratories Inc. Didrex é uma marca comercial registada da The Upjohn Company. 1996, Syva Company EC REP Dade Behring Limited Regus House, Atterbury Milton Keynes MK10 9RG United Kingdom Syva Company Dade Behring Inc. Cupertino, CA Printed in USA Revisto Junho C534UL.16SL

5 06/17/02 Part No. 3C534UL.16SL_Portuguese Layout: 8-1/2" x 11" Final size: N/A Folded to: N/A Doc # (if applicable) Colors: Black