REAGENTES Compartimentos A Forma Ingrediente Concentração B Líquido Tiouréia Acetato Tampão Surfactante 50 mm/l 750 mm/l. Inibidor Microbiano

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1 DADE BEHRING REAGENTE DE FERRO DIAGNOSTICA SÃO PAULO Código DF49A USO - O método IRN empregado no sistema de química clínica DIMENSION é uma análise de diagnóstico in vitro, que tem por objetivo a determinação quantitativa de ferro no soro. RESUMO - O método de IRN é uma adaptação da análise direta de ferro desenvolvida por Smith et al. 1 usando o cromóforo Ferene. Mais tarde o trabalho de Higgins, Artiss et al. e Hennessy et al. demonstraram a alta sensibilidade do Ferene e sua utilidade nos ensaios de ferro. O método IRN é um procedimento direto de ferro que emprega um surfactante para prevenir a precipitação proteíca. Emprega-se um soro branco para corrigir as diferenças de turbidez das amostras. Potenciais interferências pelo cobre são minimizadas pela adição de tiouréia. Ferene é uma marca registrada de Diagnostic Chemicals, LTD, Charlottetown, P.E.I., Canada C1A4H5. PRINCÍPIOS DE PROCEDIMENTOS - Em meio ácido (ph 4,5), o ferro fixado à transferrina é liberado na presença de um agente redutor, ácido ascórbico. O produto resultante, Fe ++ forma um complexo azul com 3-(2- piridil)-5,6-di-2-(5-furil àcido sulfônico)-1, 2,4-triazin, sal disódico Ferene. A absorbância do complexo, medida por uma técnica bicromática de ponto final (600,700 nm), é proporcional à concentração de ferro fixado a transferrina no soro. Fe Transferrina Fe Transferrina 2 Fe Ácido Ascórbico 2 Fe ++ + Ácido Dehidroascórbico + 2 H + Fe Ferene Fe ++ - Ferene 3 complexo (absorbe a 600 nm) REAGENTES Compartimentos A Forma Ingrediente Concentração B 1-5 Tablete Ácido Ascórbico Ferene 85 mm/l mm/l 6 Líquido Inibidor Microbiano 7 Líquido Tiouréia Acetato Tampão Surfactante 50 mm/l 750 mm/l Inibidor Microbiano a. Os compartimentos estão enumerados consecutivamente a partir do extremo fim do cartucho. b. Valor nominal na diluição final da reação. c. Ver precauções. PRECAUÇÕES - Compartimento 7-8: NOCIVO. CONTÉM tiouréia.possibilidade DE EFEITOS IRREVERSÍVEIS.Usar roupas de proteção apropriadas. AS CUBETAS USADAS CONTENDO FLUÍDOS ORGÂNICOS HUMANOS, DEVEM SER MANIPULADAS COM CUIDADO APROPRIADO PARA EVITAR CONTATO COM A PELE OU INGESTÃO. 6 Para uso diagnóstico IN VITRO

2 DILUIÇÃO E MISTURA - A diluição e mistura de reagente e amostra são efetuados automaticamente pelo sistema Dimension. O copo da amostra deve ter capacidade de volume suficiente para conter a mostra e o volume morto ; não é necessário o volume exato do copo. O volume morto é de 30µl para um copo de capacidade de 1.5ml. CONSERVAÇÃO - Guardar em ambiente refrigerado de 2-8 ºC. PRAZO DE VALIDADE - Verificar o prazo de validade na caixa de cada cartucho de reativo fechado. Os compartimentos fechados e não hidratados de cartuchos dentro do equipamento são estáveis por 30 dias. Os compartimentos 1-5 uma vez abertos pelo instrumento são estáveis por 72 horas. Os compartimentos 6-8 uma vez abertos pelo instrumento são estáveis por 30 dias. TOMADA DE AMOSTRA - Para as amostras a serem analisadas por este método, deve-se empregar os métodos e procedimentos normais de coleta e armazenamento, para conservação do soro. SUBSTÂNCIA DE INTERFERÊNCIA CONHECIDA - As substâncias seguintes não têm efeitos significativos sobre os resultados de IRN, nas concentrações indicadas: Acetaminofeno 200 µg/ml [1.3mmol/l] d Ampicilina 20 µg/ml [57 µmol/l] Diazepan 20 µg/dl [70 µmol/l] Digoxina 20 ng/ml [25.6 nmol/l] Etanol 800 mg/dl [174 mmol/l] Gentamicina 16 µg/ml [29.4 µmol/l] Lipemia 600 mg/dl [6.86 mmol/l] Triglicérides Nortriptilina 1000 ng/ml [3797 nmol/l] Fenobarbital 80 µg/ml [344 µmol/l] Fenitoína 30 µg/ml [119 µmol/l] Salicilato 100 mg/dl [7.24 mmol/l] Fluoreto de sòdio 400 mg/dl [4g/l] e Teofilina 100 µg/ml [555 µmol/l] Os tubos de coleta de sangue Corvac e SST não afetam os resultados IRN. Cada laboratório deve estabelecer as normas de aceitação de seus tubos de coleta de amostra de sangue, como também os produtos para separação de soro. Já que estes produtos podem apresentar variações de um fabricante para outro e às vezes entre lotes do mesmo fabricante. Hemoglobina a 50 mg/dl [0.03 mmol/l(monômero)] aumenta os resultados de IRN em 20 µg/dl [3.6 µmol/l] a uma concentração de IRN de 88 µg/dl [15.8 µmol/l]. Tubos de coleta de sangue contendo EDTA, um quelante forte de ions metálicos, ou a combinação de oxalato de potássio, não devem ser usados. Heparina Lítica (280 U/ml [ U/L]) e aumenta os resultados de ferro em 90 µg/dl[16.2 µmol/l] a uma concentração de ferro de 100 µg/dl[17.9 µmol/l]. Citrato de Sódio a 30 mm aumenta a concentração de IRN em 10 µg/dl [1.8 µmol/l] a uma concentração de 87 µg/dl [15.6 µmol/l]. Bilirrubina a 20 mg/dl [342 µmol/l] diminui os resultados de IRN em 14 µg/dl [2.5 µmol/l] a uma concentração de ferro de 102 µg/dl [18.3 µmol/l]. Corvac é uma marca registrada de Monoject, Division of Sherwood Medical, St. Louis, MO. SST é uma marca registrada da Becton - Dickinson, Rutherford, NJ. d. As unidades do Sistema internacional de unidades estão entre parênteses. e. Concentrações normais geralmente encontradas em tubos de coleta de sangue. PROCEDIMENTOS

3 MATERIAS NECESSÁRIOS CATÁLOGO NÚMERO Cartucho de reagente IRN Flex TM DF49 Papel para impressa D827 Copos para amostras (1,5 ml) DSC4 Água purificada ou equivalente (diluente) f Cartucho de cubetas D828 f- referência no manual de seu Dimension. PROCESSO DE ANÁLISE - O sistema de química clínica Dimension processa a amostra automaticamente através das etapas necessárias e imprime os resultados. CONDIÇÕES DO TESTE Volume da amostra: 50 µl Volume de Reativo 1: 100 µl Volume de Reativo 2: 25 µl Volume de diluente: 225 µl Temperatura do ensaio: 37 ºC Comprimento de onda: 600 e 700 nm Tipo de medição: ponto final bicromático CALIBRAÇÃO - As seguintes informações devem ser consideradas quando da calibração do método IRN: Limite de ensaio: Material de referência: Níveis de calibração recomendados: Esquema de calibração: Freqüência de calibração: Coeficiente linear: Co C µg/dl [0-179 µmol/l] Standards primários como o Calibrador IRN/TIBC DuPont (CAT. NO. DC21) 50,500, 1000 µg/dl [9,90, 179 µmol/l] Em 3 níveis em triplicata. A cada novo lote de reagente ou a cada 3 meses para um mesmo lote. CONTROLE DE QUALIDADE - Pelo menos uma vez ao dia, analisar uma solução em dois níveis de um controle com concentrações conhecidas. Os resultados obtidos devem estar dentro dos limites de variabilidade diária do sistema, medida no laboratório do usuário. Se os resultados não estiverem dentro dos limites aceitáveis do laboratório do usuário, seguir os procedimentos descritos no manual de seu sistema Dimension. Existe a possibilidade de um funcionamento incorreto do instrumento, se for observada a precisão seguinte em 5 testes consecutivos: Atividade D. P. (desvio padrão) 50 µg/dl[8.95 µmol/l] > 7.5 µg/dl [1.34 µmol/l] 1000 µg/dl[179 µmol/l] > 30.0 µg/dl [5.37 µmol/l] RESULTADOS O instrumento calcula e imprime automaticamente a concentração de IRN em µg/dl [µmol/l] utilizando o esquema de cálculo ilustrado no manual de seu sistema Dimension. LIMITAÇÕES DOS PROCEDIMENTOS - Os resultados com excesso de 1000 µg/dl [179 µmol/l] devem ser repetidos após se diluir a amostra com a Água Purificada DuPont o equivalente para se obter uma concentração dentro dos limites analíticos do sistema. O resultado deve ser multiplicado pelo fator de diluição para se obter a concentração real da amostra não diluída. O sistema de informações do instrumento contém mensagens de erro que advertem o operador sobre falhas específicas de funcionamento. Qualquer informação que contenha estas mensagens de erro deve ser guardada para comprovação.

4 INTERVALO DE REFERÊNCIA µg/dl [6-27 µmol/l] A população de referência consistiu-se em: 60 homens com idades entre 19 e 86 anos 60 mulheres com idades entre 19 e 86 anos O intervalo de referência foi calculado não parametricamente e representa 95% da população. Há informações de uma variação diurna de ferro sérico até um nível de 50 µg/dl [9 µmol/l]. O ferro sérico é mais elevado no período da manhã do que a noite e está relacionado com a ingestão. Cada laboratório deve estabelecer seu próprio intervalo de referência para as análises de IRN processadas no sistema Dimension. CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMENTO REPRODUTIBILIDADE h Desvio Padrão (% CV) Material Média µg/dl [µmol/l] Dentro do mesmo dia Dia-dia QCS TM Soro Controle Normal 113[20] 2.6[0.5] (2.3) 4.1(3.6) Anormal 242[43] 2.9[0.5] (1.2) 5.3(2.2) CORRELAÇÃO Estatísticas de Regressão j Método Coeficiente de Comparativo Pendente Interseção µg/dl[µmol/l] Correlação n Método IRN no [-0.3] analisador aça Du Pont g.todos os ensaios para definir as características específicas de funcionamento, foram processados depois que se efetuaram as comprovações normais e recomendadas de controle de qualidade do equipamento. h. As amostras foram analisadas durante 20 dias em triplicata para cada nível, o desvio padrão intra-dia e total foram calculados pelo método de análise de variância. i. O modelo da equação para oscálculos estatísticos de regressão é: [resultado do sistema Dimension ] = inclinação X [resultado do método comparativo] + intercessão. ESPECIFICIDADE ANALÍTICA - Para maiores detalhes ver a seção de substâncias de interferência conhecida descrita anteriormente. BIBLIOGRAFIA 1- Smith, Fe, Herbert, J, Gaudin, J, Hennessy, J, Reid, Gr, Serum iron determination using ferene triazine, Clin Biochem 1984; 17: Higgins, T, Novel chromogen for serum iron determinations, Clin Chem 1981; 27: Artiss, JD, Vinogradov, S, Zak, B, Spectrophotometric study of several sensitive reagents for serum iron, Clin Biochem 1981; 14: Artiss, JD, Standbergh, DR, Zak, B, Study of continuous flow automation for serum iron on comparing several sensitive reagents, Microchem J 1983; 28: Hennessy, DG, Reid, GR, Smith, FE, Thompson, SL, Ferene-a new spectrophotometric reagent for iron, Can J Chem 1984; 62: Tietz, NW, Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saundres Co., Philadelphia, PA 1986, creatinine) and pp (techniques and procedures to minimize laboratory infections) and pp (specimen collection and storage recommendations).

5 7- Dicht, JJ Watson, LL, Performance Characteristics of the Du Pont TIBC Pretreatment Kit When Used with the IRN Method to Measure Total Iron Binding Capacity, Du Pont Company, Wilmington, DE, Diagnóstica São Paulo Produtos e Equipamentos para Laboratórios Ltda Av. Indianópolis, º andar Tele Fax: Site: diagnosticasp.com.br E:mail: diagnosticasp@sti.com.br