Teor de fenois, flavonoides e taninos condensados das folhas e raízes de Serjania marginata Casar.

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1 17 Workshop de Plantas Medicinais do Mato Grosso do Sul/7º Empório da Agricultura Familiar PN Teor de fenois, flavonoides e taninos condensados das folhas e raízes de Serjania marginata Casar. Jucilene Martins Alves 1 (PG), Maria do Carmo Vieira 1 (PQ); Anelise Samara Nazari Formagio 1* (PQ); Néstor Antonio Heredia Zárate 1 (PQ), Carla Roberta Volobuff 1 (PG), Kamilla Felipe do Nascimento 1 (PG), Jacenir Vieira da Silva 1 (PG), Diego Cegóbia Ferreira 1 (IC). 1 Universidade Federal da Grande Dourados. UFGD Faculdade de Ciências Agrárias, Caixa Postal 533, , Dourados MS; aneliseformagio@ufgd.edu.br*; ju_martinsalves@hotmail.com RESUMO Serjania marginata Casar. é conhecida como cipó-uva ou cipó-timbó e popularmente utilizada internamente para dores no estômago. O objetivo do trabalho foi avaliar o teor de flavonoides, fenois e taninos condensados presentes nas folhas e raízes de S. marginata. A secagem do material vegetal e obtenção do extrato bruto foram feitas ao ar a temperatura ambiente e em seguida, trituradas em moinho de faca. A extração foi feita com metanol com intervalos de tempo de 48 a 72 horas. O teor de fenois foi determinado pelo método de folin-ciocalteu s, flavonoides pela reação com cloreto de alumínio e taninos condensados por reação com vanilina acidificada. As folhas e raízes apresentaram teores de fenois totais similares, variando em 86,89 mg/g. Por outro lado, o teor de flavonoides das raízes não apresentaram valores promissores (0,69 mg/g) quando comparados aos das folhas (100,88 mg/g). Para o teor de taninos condensados, as raízes apresentaram ,24 mg/g maior do valor obtido nas folhas. Concluiu-se que as raízes da S. marginata apresentaram elevada quantidade de metabólitos secundários, sendo promissora para futuros estudos visando a atividade antioxidante in vitro e in vivo. Palavras-chave: Sapindaceae, cipó-timbó, constituintes químicos. INTRODUÇÃO A grande diversidade biológica vegetal, aliada aos contrastes sociais, faz do uso de plantas medicinais uma prática comum no Brasil, onde se estima que 82,0% da população utilizem esses produtos, porém, apenas 8,0% das espécies foram estudadas para a pesquisa de compostos bioativos e espécies foram avaliadas em suas propriedades medicinais (JOLY et al., 2011). Serjania marginata (Sapindaceae) é nativa do Brasil, Paraguai, Bolívia e Argentina, conhecida popularmente como cipó-uva ou cipó-timbó. É uma trepadeira escandente e tem sido investigada quanto às suas propriedades terapêuticas, baseando-se, principalmente, na indicação popular, de uso das folhas para dores no estômago (BOURDY et al., 2004). Estudo fitoquímico realizado com o extrato etanólico 70%, obtido das folhas de S. marginata, evidenciou a presença de saponinas, taninos e flavonoides glicosilados. As proantocianidinas, isoladas da espécie apresentaram alta atividade antioxidante, pelo

2 2 método do reagente DPPH, sendo, segundo os autores, essas substâncias, as prováveis responsáveis pelo efeito gastroprotetor do extrato (HEREDIA-VIEIRA et al., 2015). Em relação a avaliação farmacológica, Périco et al. (2013) avaliaram a atividade anti-edematogênica do extrato hidroalcoólico da S. marginata e observaram que o extrato possui atividade anti-inflamatória aguda que pode ser mediada por quelar as espécies reativas de oxigênio geradas pela peroxidação lipídica induzida por xilol; além de inibir ou bloquear a liberação de PGE2, comprovando o uso da planta na medicina tradicional para o tratamento da inflamação. Em relação a estudos agronômicos com o cipó-timbó, nosso grupo de pesquisa, estudando o efeito do uso de adubos verdes (Stizolobium aterrimum, Crotalaria spectabilis e Canavalia ensiformes), com ou sem a presença de nitrogênio, na produção de biomassa e composição química da planta, concluíram que S. aterrimum e C. ensiformes foram as culturas de cobertura mais promissoras para o cultivo do timbó, melhorando a produção de biomassa e provavelmente a economia de N (Tabaldi et al., 2012). Ainda, Alves et al. (2014), avaliando a influência de fontes de resíduos orgânicos, com e sem adição de fósforo, sobre o desenvolvimento inicial do cipó-timbó, constataram que as plantas cresceram mais com o uso dos resíduos orgânicos Organosuper e cama de frango, independente do uso ou não de fósforo. Dando continuidade ao estudo fotoquímico, o objetivo do trabalho foi avaliar o teor de constituintes como flavonoides, fenois e taninos condensados presentes nas folhas e raízes de Serjania marginata Casar. MATERIAL E MÉTODOS S. marginata foi coletada no Horto de Plantas Medicinais da UFGD e exsicatas foram depositadas nos Herbários CGMS (Campo Grande-MS) (nº 41054) e no DDMS (Dourados-MS) (nº 5000). O projeto foi desenvolvido no Laboratório de Plantas Medicinais da UFGD-FCA. Secagem do material e obtenção do extrato metanólico A secagem do material vegetal (folhas e raízes) foi feita ao ar a temperatura ambiente e em seguida, trituradas em moinho de faca. A extração foi feita com metanol com intervalos de tempo de 48 a 72 horas. Em seguida, foram filtrados e concentrados

3 em rotaevaporador sob pressão reduzida, em temperatura de no máximo 60ºC. O extrato metanólico concentrado foi transferido para um recipiente previamente pesado. 3 Determinação do teor de fenois totais A concentração de fenólicos totais das amostras foi determinada pelo Método Folin-Ciocalteu s (SINGLENTON E ROSSI, 1965). Para os testes, a cada 100 μl de amostra adicionou-se 1,5 ml de solução aquosa de carbonato de sódio 2%, 0,5 ml de reagente Folin-Ciocalteau (1:10 v/v) e 1 ml de água destilada. Reagiu-se por 30 minutos. A leitura foi realizada no espectrofotômetro em comprimento de onda de 760 nm. O mesmo procedimento foi empregado na análise do branco, sendo substituídos 100 μl de amostra por 100 μlde metanol (DJERIDANE et al., 2006). Para calcular a concentração de fenois foi preparada uma curva analítica (10,0; 20,0; 25,0; 45,0; 50,0 e 60,0 μg) empregando o ácido gálico como padrão e as respectivas absorbâncias foram lidas. O procedimento experimental realizado com o padrão foi o mesmo utilizado para as amostras. Com estes dados foi feita a regressão linear e obtida a equação da reta, a qual teve seus dados empregados no cálculo das amostras reais. Todos os testes foram realizados em triplicata. Teste teor de flavonoides Para o teste de flavonoides, a cada 500 μl das amostras adicionaram-se 1,50 ml de álcool etílico 95%, 0,10 ml de cloreto de alumínio 10% (AlCl3.6H2O), 0,10 ml de acetato de sódio (NaC2H3O2.3H2O) (1 mol L-1) e 2,80 ml de água destilada. Deixou-se reagir à temperatura ambiente por 40 minutos. Realizou-se a leitura no espectrofotômetro em comprimento de onda de 415 nm. O mesmo procedimento foi empregado na análise do branco (LIN e TANG, 2007). Para calcular a concentração de flavonoides foi preparada uma curva analítica (2,5; 5,0; 10,0; 15,0; 30,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0 e 100,0 μg) empregando a quercetina como padrão e as respectivas absorbâncias foram lidas. Com estes dados foi feita a regressão linear e a equação da reta foi obtida. Todos os testes foram realizados em triplicata. Teste teor Taninos Condensados (TC)

4 4 As concentrações de TC foram determinadas por uma versão modificada do método desenvolvido por Broadhurst e Jones (1978), adaptado por Agostini-Costa et al. (1999). Foram pesados 100 mg da amostra e solubilizado em 10 ml de metanol HPLC, em seguida 1 ml desta solução foi misturado a 5 ml de reagente de vanilina em tubos de ensaio com tampas de rosca. Em seguida os tubos de ensaio foram mantidos em banhomaria por 20 min. A leitura foi realizada em triplicata em espectrofotômetro em 510 nm. A catequina foi utilizada como padrão, nas concentrações de 2,5 a 40 μl. Os resultados foram expressos em mg/g de extrato. RESULTADOS E DISCUSSÃO A determinação dos fenóis totais (FT) pelo método Folin Ciocalteu foi realizada através da elaboração da curva padrão do ácido gálico em várias concentrações, flavonoides pela curva padrão da quercetina e taninos condensados (TC) pela curva padrão de catequina em várias concentrações (Figura 1). Observou-se que as folhas e raízes apresentaram teores de fenois totais similares, variando em 86,89 mg/g (Tabela 1). Por outro lado, o teor de flavonoides das raízes não apresentaram valores promissores (0,69 mg/g) quando comparados aos das folhas (100,88 mg/g). Para o teor de taninos condensados, as raízes apresentaram ,24 mg/g maior do valor obtido nas folhas. Os estudos demonstraram que as raízes da S. marginata apresentaram elevada quantidade de metabólitos secundários, sendo promissora para futuros estudos visando a atividade antioxidante in vitro e in vivo. AGRADECIMENTOS Ao CNPq e CAPES, pelas bolsas concedidas e à FUNDECT-MS, pelo apoio financeiro. REFERÊNCIAS AGOSTINI-COSTA, T. S.; GARRUTI, D. S.; LIMA, L.; FREIRE, S.; ABREU, F. A. P.; FEITOSA, T. Avaliação de metodologias para determinação de taninos no suco de caju. Boletim CEPPA, Curitiba, v. 17, n. 2, p , ALVES, J.M.; VIEIRA, M.C.; ZÁRATE, N.A.H.; CARNEVALI, T.O.; GONÇALVES, W.V.; LIMA, V.T.; ARAN, H.D.V.R. Desenvolvimento inicial de Serjania marginata Casar. com diferentes resíduos orgânicos com e sem fósforo. In: III Congresso Brasileiro de Resíduos Orgânicos e IX Encontro Nacional de Substratos para Plantas, 2014, Vitória-ES. Anais... Vitória: Incaper, 2014.

5 5 BOURDY, G.; CHAVEZ DE MICHEL, L.R.; ROCA-COULTHARD, A. Pharmacopeia in a shamanistic society: the Izoceño-Guaraní (Bolivian Chaco). Journal of Ethnopharmacology, v. 91, p , BROADHURST, R. B.; JONES, W. T. Analysis of condensed tannins using acidified vanillin. Journal of the Science of Food and Agriculture, v. 29, n.9, p , DJERIDANE, A., YOUSFI, M., NADJEMI, B., BOUTASSOUNA, D., STOCKER, P., VIDAL, N. Antioxidant activity of some algerian medicinal plants extracts containing phenolic compounds. Food Chemistry, v. 97, p , HEREDIA-VIEIRA, S.C.; SIMONET, A.M.; VILEGAS, W.; MACÍAS, F.A. Unusual C,O- Fused Glycosylapigenins from Serjania marginata Leaves. Journal of Natural Products, v. 78, n. 1, p , JOLY, C.A.; HADDAD, C.F.B.; VERDADE, L.M.; OLIVEIRA, M.C.de, BOLZANI, V.da S., BERLINK, R.G.S. Diagnóstico da pesquisa em biodiversidade no Brasil. Revista USP, v. 89, n. 2, p , LIN, J-Y e TANG, C-Y. Determination of total phenolic and flavonoid contents in selected fruits and vegetables, as well as their stimulatory effects on mouse splenocyte proliferation Food Chemistry, v. 101, p , PÉRICO, L.L; BESERRA, F.P.; LOPES, J.A.; VIEIRA, S.C.H; VILEGAS, W.; ROCHA, L.R.M.; HIRUMA-LIMA, C.A. Anti-edematogenic activity of hidroalcoholic extract from Serjania marginata Casar. (Sapindaceae): role of PGE2. In: International Symposium on Drug Discovery, 3, Araraquara, SINGLETON VL, ROSSI J.A., Colorimetry of total phenolics with phosphomolibdicphosphotungstic acid reagent. American Journal of Enology and Viticulture, 16, TABALDI, L.A.; VIEIRA M.C.; ZARATE, N.A.H.; SILVA, L.R.; GONCALVES, W.L.F.; PILECCO, M.; FORMAGIO, A.S.; PADOVAN, M.P.; GASSI, R.P. Cover crops and their effects on the biomass yield of Serjania marginata plants. Ciência Rural, v. 42, n. 4, p , 2012.

6 Absorbância Absorbância Absorbância (A) (B) 6 0,45 1,8 0,40 1,6 0,35 1,4 0,30 1,2 0,25 1,0 0,20 0,8 0,15 0,10 0,05 0,00 ÁCIDO GÁLICO y= 6,94444x - 0,05233, R= 0, ,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 Massa (mg) 0,6 0,4 0,2 0,0 QUERCETINA y= 12,6521x + 0,03546, R= 0, ,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 Massa (mg) (C) 0,35 0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0,00 CATEQUINA y= 0,01033x + 0,39359, R= 0,9992 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 Massa (mg) Figura 1. Curva de calibração para teor de fenois (A), flavonoides (B) e taninos consensados (C). Tabela 1. Teor de fenois, flavonoides e taninos condensados de S. marginata. Constituintes Folha (mg/g) Raiz (mg/g) Fenois 724,50 637,61 Flavonoides 100,88 0,69 Taninos , ,31