Genética de Bactérias

Transcrição

1 Genética de Bactérias Descrição de mutantes Mecanismos de recombinação Mapeamento de genes

2 Considerações iniciais Microrganismos no contexto da Genética 1940 com Beadle & Tatum mutantes auxotróficos em Neurospora crassa 1946 com Lederberg & Tatum comprovação da transferência de genes por conjugação bacteriana

3 Pré-requisitos para estudos de Genética possibilidade de obtenção e detecção de mutantes mutantes auxotróficos mutantes morfológicos mutantes resistentes a agentes inibidores de crescimento antibióticos bacteriófagos

4 Pré-requisitos para estudos de Genética II Ocorrência de eventos de recombinação transformação bacteriana conjugação bacteriana sexodução transdução generalizada restrita

5 Mutantes bacterianos auxotróficos incapazes de crescimento em meio mínimo meio mínimo 1 fonte de carbono (energia) e sais minerais ex: thr -, lys -, arg -, etc morfológicos coloração de colônias formato das colônias,etc

6 Mutantes bacterianos II temperatura sensíveis (t s ) inativação de enzimas quando expostos a 37º ou 42º C, etc resistentes a agentes inibidores de crescimento antibióticos Ap r, Kan r, St r, Cm r (plasmideos) bacteriófagos - λ, P22, etc

7 Crescimento bacteriano típica curva de crescimento

8 Diluição em série

9 Clones bacterianos

10 Transformação bacteriana Griffith (1928) D. pneumoniae principio transformante termo-resistente Avery et al. (1944) D. pneumoniae uso de enzimas (DNAse, RNAse, etc) DNA fator de transformação material genético das células

11 Transformação bacteriana

12 Posicionamento de genes genes E e F E e F curva A ou B E F curva C

13 Conjugação bacteriana mutantes auxotróficos analisados em meio mínimo recombinantes prototróficos

14 Davis tubo em U necessidade de contato físico entre as bactérias presença do filtro impede o surgimento de recombinantes

15 Bactérias em conjugação

16 Transferência de material genético células F + células F -

17 Plasmideos bacterianos plasmideos autônomos X integrativos (epissomos) conjugativos X não conjugativos operon tra

18 Situação especial Hayes (1953) HFR (AFR) epissomo conjugativo

19 Consequências genéticas mobilização de genes cromossomais para hospedeiras especiais mapeamento de genes da doadora sexodução transferência específica de determinados genes

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22 Exemplo de mapeamento transferência dos genes azi ton lac gal ton

23 localização dos genes azi ton lac gal

24 Generalizando Mapa genético do cromossomo da E. coli

25 Transdução eventos de recombinação envolvendo a transferência de material genético entre bactérias via bacteriófagos

26 Ciclo vital de um bacteriófago

27 Colônias de fagos (Placas de Lise)

28 Tipos de transdução generalizada fagos comuns Ex: M13, φ X174, etc restrita fagos específicos Ex; fago λ em E. coli abortiva situação anormal em que o cromossomo do fago é impedido de agir normalmente

29 Transdução generalizada

30 Transdução restrita

31 Mapeamento por transdução os eventos de recombinação genética via transferência por fagos restringem-se às vizinhaças dos sítios de inserção do profago

32 Mapeamento de regiões muito específicas próximas ao ponto de inserção dos profagos nos cromossomos das bactérias receptoras