MATERIAL DE REFERÊNCIA CERTIFICADO
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- Luiz Guilherme Fontes Bergler
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1 MATERIAL DE REFERÊNCIA CERTIFICADO Lab-Elite UTILIZAÇÃO PREVISTA O material de referência certificado Lab-Elite (MRC) é uma preparação pura, homogénea e estável de um microrganismo liofilizado com características microscópicas, macroscópicas, fenotípicas e genotípicas bem caracterizadas. A identidade do MRC foi confirmada pela sequenciação do gene de ARN ribossómico (ARNr). Como MRC, este produto tem uma passagem de ponto zero. Um certificado de análise, fornecido com o MRC, enuncia as propriedades fenotípicas da estirpe, assim como a American Type Culture Collection (ATCC ) ou outros números de cultura de referência autênticos. Um relatório de análise da amostra e um relatório de electroforese em campo pulsado (Pulsed-Field Gel Electrophoresis, PFGE) enuncia as características genotípicas e fenotípicas, incluindo a ID (identificação) com base no ARNr e a impressão de ADN do organismo com o sumário da enzima de restrição declarada. O MRC é recomendado para a validação de um novo método, para ser utilizado em ensaios para compêndios de farmacopeia e para controlo de qualidade quando é requerido um padrão com propriedades genotípicas e fenotípicas conhecidas. RESUMO E HISTÓRIA A Microbiologics tornou-se acreditada pela norma ISO, Guia 34, em 2009 como um produtor de material de referência qualificado. O Guia 34 ISO define o material de referência como material que é suficientemente homogéneo e estável com respeito a uma ou mais propriedades, que foram estabelecidas como sendo adequadas ao seu uso previsto num processo de medição. As propriedades podem ser quantitativas ou qualitativas (ex. identidade de substâncias ou espécies). 1 A homogeneidade do MRC é assegurada testando a pureza, viabilidade e características morfológicas de amostras de cada novo lote. Para que o novo lote de MRC possa ser posto à venda, todas as amostras têm de ser puras, crescer de forma satisfatória e demonstrar características morfológicas típicas para a estirpe. A estabilidade é monitorizada testando a viabilidade de cada MRC no final do respectivo prazo de validade. A estabilidade é considerada aceitável se for obtido uma boa cultura a partir da amostra testada. O material de referência certificado da Lab-Elite é uma preparação de microrganismos liofilizados. A utilização deste material liofilizado fornece resultados equivalentes aos dos métodos tradicionais usados na preparação, conservação e manutenção de colecções de culturas de stock de referência. PRINCÍPIO O material de referência certificado da Lab-Elite incorpora um método de liofilização, proposto por Obara et al., que utiliza um meio de suspensão que consiste em gelatina, leite magro, ácido ascórbico, dextrose e carvão 2. A gelatina serve como veículo para o microrganismo. O leite magro, o ácido ascórbico e a dextrose protegem o microrganismo preservando a integridade da parede celular durante a liofilização e a conservação. O carvão é incluído para neutralizar quaisquer substâncias tóxicas formadas durante o processo de liofilização. COMPONENTES DA FÓRMULA Cada preparação liofilizada consiste em: População de microrganismos Leite magro Dextrose Gelatina Ácido ascórbico Carvão DESCRIÇÃO DO PRODUTO O material de referência certificado da Lab-Elite é embalado numa unidade denominada KWIK-STIK. Cada unidade KWIK-STIK contém um pélete liofilizado de uma estirpe única de microrganismos, um reservatório de líquido hidratante e uma zaragatoa de inoculação. A unidade é selada dentro de uma bolsa laminada que contém um dessecante para prevenir a acumulação de humidade adversa. O material de referência certificado da Lab-Elite é enviado numa embalagem metálica que contém uma unidade KWIK-STIK, um certificado de análise, um relatório de análise da amostra, um relatório de sub-tipologia de electroforese em campo pulsado (PFGE) e um folheto informativo com instruções de utilização. O certificado e os relatórios contêm a informação seguinte: 1) Certificado de análise: enuncia o nome do microrganismo, o número de catálogo, o ATCC ou outro número de cultura de referência autêntica, pureza, recuperação, prazo de validade, informação de libertação, características macroscópicas e microscópicas e resultados de teste fenotípico. 2) Relatório de análise da amostra: relata a reacção à coloração de Gram, a diferença genética das espécies em comparação com outras espécies semelhantes e a ID microbiana com base em testes fenotípicos e genotípicos (gene ARNr). 3) Relatório de sub-tipologia PFGE: relata o padrão do RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) associado à estirpe utilizando o sumário da enzima de restrição declarada. A preparação liofilizada ou a unidade KWIK-STIK não contêm mercúrio nem látex. PRECAUÇÕES E LIMITAÇÕES Estes produtos destinam-se apenas a utilização in vitro. Estes dispositivos e o crescimento subsequente destes microrganismos em meios de cultura são considerados como sendo material com perigo biológico. Estes dispositivos contêm microrganismos viáveis que podem, sob determinadas circunstâncias, originar doenças. Devem ser empregues técnicas adequadas para evitar a exposição e contacto com qualquer cultura de microrganismos. O laboratório de microbiologia deve estar equipado e ter as instalações para receber, processar, manter, armazenar e eliminar material com perigo biológico..revision 2010.APR.01 Portuguese (Português) Page 1 of 6
2 Os funcionários de laboratórios de microbiologia que utilizam estes dispositivos devem ter formação para e serem capazes de demonstrar proficiência no processamento, manutenção, conservação e eliminação de material com perigo biológico. Há agências e estatutos que regulamentam a eliminação de todos os materiais com perigo biológico. Cada laboratório deve ter conhecimento de, e estar em conformidade com a eliminação apropriada de materiais com perigo biológico. CONSERVAÇÃO E VALIDADE Conserve o material de referência certificado da Lab-Elite entre 2 C e 8 C na ampola selada original ou na bolsa que contém o dessecante. Se conservado conforme indicado, a preparação de microrganismos irá reter as suas especificações e desempenho dentro dos limites enunciados até ao prazo de validade indicado no rótulo do dispositivo. O produto não deve ser utilizado se: 1) Conservado incorrectamente; 2) Existirem indícios de exposição excessiva ao calor ou humidade; 3) O prazo de validade tiver sido ultrapassado MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS O boletim de informação técnica (TIB.081) Recommended Growth Requirements (Requisitos de cultura recomendados) enuncia os meios recomendados e requisitos de incubação. Este boletim está disponível no nosso sítio web em O material de referência certificado da Lab-Elite requer meio de ágar não-selectivo, nutritivo ou enriquecido para optimizar a cultura e a recuperação. O material de referência certificado da Lab-Elite requer tempos de incubação específicos e condições para optimizar a cultura e a recuperação. GARANTIA DO PRODUTO Estes produtos têm garantia de conformidade com as especificações e desempenho impressos e ilustrados nos respectivos folhetos informativos, instruções e literatura de suporte. A garantia, expressa ou implícita, é limitada sempre que: Os procedimentos empregues no laboratório forem contrários às instruções ou indicações impressas e ilustradas Os produtos forem empregues para aplicações diferentes das indicações mencionadas nos respectivos folhetos informativos, instruções e literatura de suporte. INSTRUÇÕES PARA UTILIZAÇÃO DE MATERIAL DE CONSULTA CERTIFICADO Remova a unidade Lab-Elite (KWIK-STIK ) da conservação entre 2 C e 8 C e deixe que a bolsa fechada se equilibre à temperatura ambiente. 1. Abra a bolsa e remova o KWIK-STIK. 2. Retire a etiqueta destacável do rótulo do dispositivo. O rótulo pode ser anexado a Registos de Controlo de Qualidade permanentes ou à placa primária com meio de cultura de ágar para identificação. 3. Tome nota da posição do pélete na parte do fundo do dispositivo e da reserva de líquido de hidratação na parte superior (tampa) do dispositivo. NÃO desmonte o dispositivo durante a hidratação. 4. Liberte o líquido de hidratação partindo a ampola, utilizando uma acção de pressão no meio da ampola na tampa do dispositivo. Deixe o líquido de hidratação fluir através do eixo da zaragatoa e PARA DENTRO da parte do fundo da unidade que contém o pélete liofilizado. 5. Segurando o dispositivo verticalmente, com a tampa para cima, bata ligeiramente na parte do fundo do dispositivo, sobre a bancada, para facilitar ainda mais o fluxo do líquido. 6. Utilizando uma acção de pressão na parte do fundo da unidade, esmague e misture o pélete no líquido até que as partículas do pélete tenham uma dimensão uniforme e a suspensão tenha uma aparência homogénea. 7. IMEDIATAMENTE, sature a zaragatoa com o material hidratado e transfira o material para um meio de ágar não-selectivo, nutritivo ou enriquecido. Com uma ligeira pressão, rode a zaragatoa e inocule uma área circular (ex. uma polegada ou 25 mm de diâmetro) do meio de ágar. Utilizando a mesma zaragatoa ou uma ansa esterilizada, estrie repetidamente (10 a 20 vezes) pela área inoculada e depois continue a preparar a cultura em estria na superfície de ágar restante para o isolamento. 8. IMEDIATAMENTE, incube o meio inoculado à temperatura e condições apropriadas ao microrganismo. 9. Depois da incubação, seleccione colónias representativas bem isoladas para transferências indicadas. 10. Elimine qualquer material hidratado que reste de acordo com o protocolo do laboratório para eliminação de materiais com perigo biológico. GUIA DE RESOLUÇÃO DE PROBLEMAS Se tiver um problema, consulte este guia e os Requisitos de Cultura Recomendados, TIB.081. Problema Possível causa Recomendações Não há cultura Conservação incorrecta Faça a refrigeração dos microrganismos liofilizados a 2-8ºC à chegada. Hidratação inadequada Quebre a ampola no topo do dispositivo KWIK-STIK. O líquido da ampola é utilizado para emulsificar o pélete. Não incube a suspensão hidratada. Utilize o pélete hidratado dentro de trinta (30) minutos. Meios incorrectos Siga as recomendações de Requisitos de Cultura Recomendados, TIB.081. Alguns microrganismos requerem meios nutritivos especiais. Por exemplo, os anaeróbios devem ser iniciados em meios anaeróbios, Columbia Blood Agar ou ágar pré-reduzido. É melhor começar com os microrganismos liofilizados em ágar não-selectivo. Temperatura incorrecta Verifique a temperatura na sua incubadora. Alguns microrganismos não crescem se a temperatura estiver acima dos 37ºC. Verifique se o seu termómetro está a fazer a leitura correcta. Faça estudos de uniformidade da incubadora para excluir a existência de pontos críticos de calor. Atmosfera incorrecta Quando são necessárias condições anaeróbicas, utilize um indicador anaeróbico para assegurar que as condições anaeróbicas sejam cumpridas..revision 2010.APR.01 Portuguese (Português) Page 2 of 6
3 Período de incubação demasiado curto Pode ser necessário um período de incubação mais longo. Alguns microrganismos, tais como o Clostridium sporogenes, podem levar entre 48 e 72 horas a crescer. Contaminação Incubação em meio líquido É melhor começar com os péletes liofilizados em ágar, porque os contaminantes se multiplicam rapidamente em meios líquidos. Resultados dos testes Determinação inadequada de subtipos Não faça ensaios fenotípicos na cultura do pélete. A subcultura repetida pode causar a mutação. Teste sempre culturas frescas. inesperados Inóculo demasiado grande ou demasiado pequeno. Siga as instruções de teste do fabricante para o tamanho ou densidade do inóculo. Microrganismo de CQ (controlo de qualidade) errado Utilize a cultura de referência recomendada pelo fabricante ou entidade reguladora. CONTROLO DE QUALIDADE Este produto é desenvolvido, fabricado e distribuído: Em conformidade com os mandatos da FDA: Regulação do Sistema de Qualidade (QSR), 21CFR Parte 820 Em conformidade com os elementos da norma ISO 9001 Em conformidade com os requisitos da marca CE Em conformidade com o Guia 34 ISO As funções de controlo de qualidade podem incluir, entre outras: Características de pureza e de cultura Características morfológicas Sub-tipologia molecular através da electroforese em campo pulsado Actividade bioquímica A identidade e origem das populações de microrganismos a partir de uma cultura de referência A decisão de fazer um controlo de qualidade adicional é da responsabilidade de cada laboratório individual..revision 2010.APR.01 Portuguese (Português) Page 3 of 6
4 INSTRUÇÕES ILUSTRADAS Rasgue a bolsa para abrir, no entalhe, e retire o dispositivo Lab- Elite (KWIK-STIK ). Retire a etiqueta destacável do rótulo e anexe-a à placa da cultura primária ou registo de CQ. Pressione (apenas uma vez) imediatamente abaixo do menisco de líquido da ampola encontrado na tampa para libertar o líquido de hidratação. Segure verticalmente e bata numa superfície dura para facilitar o fluxo do líquido através do eixo para o fundo da unidade que contém o pélete. Esmague o pélete e misture no líquido utilizando uma acção de pressão. IMEDIATAMENTE, sature fortemente a zaragatoa na suspensão hidratada. Utilizando a eliminação adequada de materiais com perigo biológico, elimine o dispositivo Lab-Elite (KWIK-STIK ). Inocule a(s) placa(s) da cultura primária, rolando suavemente a zaragatoa sobre um terço da placa. Utilizando uma ansa esterilizada, faça uma cultura em estria para facilitar o isolamento das colónias. IMEDIATAMENTE, incube a(s) placa(s) de cultura primária inoculadas..revision 2010.APR.01 Portuguese (Português) Page 4 of 6
5 LIMPEZA DE MATERIAL BIOLÓGICO PERIGOSO Se ocorrer a fuga ou derrame acidental do dispositivo ou cultura subsequente dos microrganismos em meios ágar, a informação que se segue descreve materiais e procedimentos que irão facilitar a limpeza de materiais com perigo biológico em segurança. 1. Ficha de dados de segurança do material (MSDS) Deve ser guardado um ficheiro com todos os documentos MSDS para os materiais com perigo biológico. O ficheiro MSDS deve estar disponível a todos os funcionários. Todos os funcionários devem conhecer a localização dos ficheiros MSDS. 2. Kit de derrame com perigo biológico Os kits de derrame com perigo biológico estão disponíveis junto de fontes comerciais ou podem ser feitos utilizando os seguintes materiais. A. Uma garrafa de um litro de uma solução germicida aquosa B. Um par de luvas descartáveis de látex e/ou sem látex C. Pinças D. Um saco para materiais com perigo biológico, com fecho E. Uma pilha ou rolo de toalhas de papel 3. Procedimento Notifique TODAS as pessoas que trabalham na área imediata ao incidente. NÃO deixe a área sem supervisão (a não ser que seja a única pessoa na área). Designe outro funcionário para vigiar a área do incidente e desviar o trânsito para longe da área do incidente. Depois de notificar todos os funcionárias na área imediata, recolha o Kit de derrame para materiais com perigo biológico e regresse IMEDIATAMENTE à área. Calce as luvas descartáveis. Com as pinças, apanhe o máximo de material possível e coloque cuidadosamente os materiais no saco para materiais com perigo biológico. Sature a área do derrame com a solução germicida. Mantenha a área do derrame húmida com a solução germicida durante a quantidade apropriada de tempo, conforme indicado na solução germicida utilizada. Limpe a área com toalhas de papel. Coloque todas as toalhas de papel no saco para materiais com perigo biológico. Depois da limpeza, retire cuidadosamente as luvas e coloque-as no saco para materiais com perigo biológico. Sele o saco para materiais com perigo biológico. Elimine o saco para materiais com perigo biológico em conformidade com os requisitos regulamentares. SIGNIFICADO DOS SÍMBOLOS Representante autorizado na Comunidade Europeia Perigos e riscos biológicos Marca CE Dispositivo médico para diagnóstico in vitro Limites de temperatura Código do lote (Lote) Cuidado, consulte os documentos inclusos Atenção, consulte as instruções de utilização Fabricante Número do catálogo Utilizar até SÍTIO WEB Visite o nosso sítio Web para obter informação técnica recente e dados sobre a disponibilidade dos produtos REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS MicroBioLogics, Inc. 217 Osseo Avenue North St. Cloud, MN EUA Tel Fax info@mbl2000.com MediMark Europe 11, rue Emile Zola B.P Grenoble Cedex 2, France Tel. 33 (0) Fax. 33 (0) info@medimark-europe.com * O emblema da ATCC Licensed Derivative, a marca da palavra da ATCC Licensed Derivative e as marcas do catálogo da ATCC são marcas registadas da ATCC. A MicroBiologics, Inc. tem a licença para utilizar estas marcas registadas e vender produtos derivados de culturas ATCC. Procure o emblema ATCC Licensed Derivative para produtos derivados de culturas ATCC. AGRADECIMENTOS 1. ISO Guide 34:2009. International Organization for Standardization. 3rd Edition, Prepared by the ISO Reference Materials Committee 2. Y. Obara, S. Yamai, T. Nikkawa, Y. Shimoda, and Y. Miyamoto J. Clin. Microbiol. 14: A selecção de culturas de stock de referência é apenas uma parte integrante do esquema geral de procedimentos e técnicas de desafio para o controlo de qualidade. É essencial consultar as directrizes para as aplicações de cada laboratório. É possível incluir como exemplo as referências bibliográficas seguintes: 1. Clinical Microbiology Procedures Handbook. ASM. Washington, D.C. 2. FDA Bacteriological Analytical Manual. 3. Manual of Clinical Microbiology, ASM, Washington, D.C. 4. Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically. CLSI. 5. Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists..Revision 2010.APR.01 Portuguese (Português) Page 5 of 6
6 6. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests. CLSI. 7. Quality Assurance for Commercially Prepared Microbiological Culture Media. CLSI. 8. Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria. CLSI. 9. Standard Methods for the Examination of Dairy Products. American Public Health Association. 10. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Water Works Association. 11. US Pharmacopeia and National Formulary.Revision 2010.APR.01 Portuguese (Português) Page 6 of 6
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