Relação, perfil de resistência e procedência dos isolados de M. tuberculosis estudados.
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- Moisés de Paiva Frade
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1 Anexos
2 Anexos 144 ANEXO 1 Relação, perfil de resistência e procedência dos isolados de M. tuberculosis estudados. Isolados Perfil de resistência Procedência Z, S UEM-Maringá/PR 1264 SENSÍVEL UEM-Maringá/PR Z, H, R UEM-Maringá/PR 44-A Z, H, R IAL-Ribeirão Preto/SP 48-A Z, H, R IAL-Ribeirão Preto/SP 49-A Z, H, R, E, S IAL-Ribeirão Preto/SP 69-A Z, H, R IAL-Ribeirão Preto/SP 71-A Z, H, R IAL-Ribeirão Preto/SP 72-A Z, H, R IAL-Ribeirão Preto/SP 73-A Z, H, R IAL-Ribeirão Preto/SP 71-C Z, H, R IAL-Sorocaba/SP 1137 Z, R, S IAL-Sorocaba/SP 46-S Z, H, R IAL-Sorocaba/SP 4850 Z, H, R, E, S IAL-Sorocaba/SP 3224 Z UEM-Maringá/PR 5505 Z IAL-Sorocaba/SP MGA 1 Z UEM-Maringá/PR MGA 2 Z UEM-Maringá/PR MGA 3 Z UEM-Maringá/PR SENSÍVEL UEM-Maringá/PR 1235 SENSÍVEL Inst. Clemente Ferreia/SP 3360/00 H, S Inst. Clemente Ferreia/SP 1118 SENSÍVEL Inst. Clemente Ferreia/SP 2075/00 Z, H, S Inst. Clemente Ferreia/SP 3543/00 Z, H, R, S, E Inst. Clemente Ferreia/SP 3614/00 Z, H, R, S, E Inst. Clemente Ferreia/SP 1193/01 Z, H, R, S, E Inst. Clemente Ferreia/SP 2130/00 Z, H, R Inst. Clemente Ferreia/SP 2193/00 Z, H, R Inst. Clemente Ferreia/SP 2965/00 Z, H, S, E Inst. Clemente Ferreia/SP Onde: Z-Pirazinamida; H-Isoniazida; R-Rifampicina; S-Estreptomicina; E-Etambutol; Et- Etionamida; UEM-Universidade Estadual de Maringá; IAL-Instituto Adolfo Lutz.
3 Anexos 145 ANEXO 2 Seqüências e concentrações dos oligonucleotídeos espaçadores usados na realização da marcação da membrana de Biodyne C para a realização da técnica de Spoligotyping. Espaçador Seqüência de oligonucleotídeos Concentração (pmol/150 µl) 1 ata gag ggt cgc cgg ttc tgg atc a 12,5 2 cct cat aat tgg gcg aca gct ttt g 30,0 3 ccg tgc ttc cag tga tcg cct tct a 12,5 4 acg tca tac gcc gac caa tca tca g 12,5 5 ttt tct gac cca ctt gtg cgg gat a 12,5 6 cgt cgt cat ttc cgg ctt caa ttt c 12,5 7 gag gag agc gag tac tcg ggg ctg c 25,0 8 cgt gaa acc gcc cca gcc tcg ccg 50,0 9 act cgg aat ccc atg tgc tga cag c 12,5 10 tcg aca ccc gct cta gtt gac ttc c 15,0 11 gtg agc aac ggc ggc gca acc tgg 30,0 12 gtg agc aac ggc ggc ggc aac ctg g 60,0 13 gac cat cat tgc cat tcc ctc tcc c 12,5 14 ggt gtg atg cgg atg gtc ggc tcg g 30,0 15 ctt gaa taa cgc gca gtg aat ttc g 30,0 16 cga gtt ccc gtc agc gtc gta aat c 12,5 17 gcg ccg gcc cgc gcg gat gac tcc g 100,0 18 cat gga ccc ggg cga gct gca gat g 12,5 19 taa ctg gct tgg cgc tga tcc tgg t 12,5 20 ttg acc tcg cca gga gag aag atc a 12,5 21 tcg atg tcg atg tcc caa tcg tcg a 25,0 22 gat cag cga cca ccg cac cct gtc a 12,5 23 agc atc gct gat gcg gtc cag ctc g 50,0 24 ccg cct gct ggg tga gac gtg ctc g 50,0 25 gat cag cga cca ccg cac cct gtc a 25,0 26 ctt cag cac cac cat cat ccg gcg c 12,5 27 gga ttc gtg atc tct tcc cgc gga t 25,0 28 tgc ccc ggc gtt tag cga tca caa c 12,5 29 aaa tac agg ctc cac gac acg acc g 12,5 30 ggt tgc ccc gcg ccc ttt tcc agc c 12,5 31 tca gac agg ttc gcg tcg atc aag t 12,5 32 gac caa ata ggt atc ggc gtg ttc a 25,0 33 gac atg acg gcg gtg ccg cac ttg a 100,0 34 aag tca cct cgc cca cac cgt cga a 25,0 35 tcc gta cgc tcg aaa cgc ttc caa c 12,5 36 cga aat cca gca cca cat ccg cag c 12,5 37 cgc gaa ctc gtc cac agt ccc cct t 12,5 38 cgt gga tgg cgg atg cgt tgt gcg c 25,0 39 gac gat ggc cag taa atc ggc gtg g 25,0 40 cgc cat ctg tgc ctc ata cag gtc c 12,5 41 gga gct ttc cgg ctt cta tca ggt a 12,5 42 atg gtg gga cat gga cga gcg cga c 25,0 43 cgc aga atc gca ccg ggt gcg gga g 50,0
4 Anexos 146 ANEXO 3 Padrões de Spoligotyping, origem, mutações no gene pnca, perfis de sensibilidade à pirazinamida e resultados do teste de pirazinamidase encontrados nos isolados clínicos de M. tuberculosis. Isolados Origem Spoligotyping Padrões Mutações R/S PZase 71-C Sorocaba A Inserção C 314 R - 44-A Ribeirão Preto A Inserção C 314 R - 71-A Ribeirão Preto A A -> G -11 pb R NC 72-A Ribeirão Preto A A -> G -11 pb R NC 1193/01 São Paulo A I133S R Maringá A S164P R - 69-A Ribeirão Preto A K96T R /00 São Paulo A - S /00 São Paulo A A3P R /00 São Paulo B P54Q R - 73-A Ribeirão Preto B S59P R /00 São Paulo B V155E R Maringá B - R + 49-A Ribeirão Preto C Inserção C 495 R São Paulo C - S São Paulo C - S /00 São Paulo C H51R R Maringá D - R + 46-S Sorocaba D V139A R NC 2965/00 São Paulo E D63G R NC 2075/00 São Paulo F - R + 48-A Ribeirão Preto G L172P R NC 1264 Maringá H IS pb S Sorocaba I Deleção C 135 R NC Maringá J - S + Onde: R-resistente; S-sensível; (+)-Positivo; (-)-Negativo; NC: sem crescimento.
5 Anexos 147 ANEXO 4 Resultados da CIM pelos métodos MABA, BMM e das proporções em L-J, do teste de atividade da PZase, perfis de Spoligotyping, e as mutações encontradas no gene pnca dos isolados clínicos de M. tuberculosis. Isolados MABA BMM L-J Mutações PZase Spoligo µg/ml NC 12,5 µg/ml IS pb + H < 12,5 µg/ml < 12,5 µg/ml 12,5 µg/ml - + J µg/ml 50 µg/ml 12,5 µg/ml - + C 3360/00 50 µg/ml < 12,5 µg/ml 12,5 µg/ml - + A µg/ml < 12,5 µg/ml 12,5 µg/ml - + C H37Rv 12,5 µg/ml 12,5 µg/ml 12,5 µg/ml - + K 2075/ µg/ml 100 µg/ml 200 µg/ml - + F 48-A NC NC NC L172P NC G 71-A NC NC NC A -> G -11 pb NC A 72-A NC NC NC A -> G -11 pb NC A 2965/00 NC NC NC D63G NC E 46-S NC NC NC V139A NC D 4850 NC 1600 µg/ml NC Deleção C 135 NC I 73-A > 1600 µg/ml NC > 800 µg/ml S59P - B > 1600 µg/ml 1600 µg/ml > 800 µg/ml - + B 3224 > 1600 µg/ml 100 µg/ml 800 µg/ml - + D > 1600 µg/ml > 1600 µg/ml > 800 µg/ml S164P - A 44-A > 1600 µg/ml > 1600 µg/ml > 800 µg/ml Inserção C A 49-A 400 µg/ml 400 µg/ml 400 µg/ml Inserção C C 69-A > 1600 µg/ml > 1600 µg/ml > 800 µg/ml K96T - A 71-C > 1600 µg/ml > 1600 µg/ml > 800 µg/ml Inserção C A 1137 > 1600 µg/ml > 1600 µg/ml > 800 µg/ml L120R > 1600 µg/ml > 1600 µg/ml > 800 µg/ml Deleção total - - MGA 1 > 1600 µg/ml > 1600 µg/ml > 800 µg/ml H57R - - MGA 2 > 1600 µg/ml > 1600 µg/ml > 800 µg/ml W68F - - MGA 3 > 1600 µg/ml >1600 µg/ml > 800 µg/ml W68F /00 >1600 µg/ml >1600 µg/ml >800 µg/ml V155E - B 1193/ µg/ml >1600 µg/ml >800 µg/ml I133S - A 2130/ µg/ml >1600 µg/ml >800 µg/ml P54Q - B 2193/00 >1600 µg/ml 1600 µg/ml >800 µg/ml H51R - C 3543/00 >1600 µg/ml >1600 µg/ml >800 µg/ml A3P - A
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