CERTIFICADO No. 113/2013 Insumos para diagnósticos laboratoriais de Influenza por Biologia Molecular
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- Leonor Santarém Tavares
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1 CERTIFICADO No. 113/2013 Insumos para diagnósticos laboratoriais de Influenza por Biologia Molecular Amplificação com alta eficiência e especificidade das sequências alvos do Vírus da Influenza e Gene RNP por RT-PCR em Tempo Real pelo kit One-Step qrt-pcr utilizando os seguintes conjuntos de oligonucleotídeos e sondas fluorescentes: InfA Direto, InfA Reverso e InfA Sonda Pdm InfA Direto, Pdm InfA Reverso e Pdm InfA Sonda Pdm H1 Direto, Pdm H1 Reverso e Pdm H1 Sonda AH1 Direto, AH1 Reverso e AH1 Sonda AH3 Direto, AH3 Reverso e AH3 Sonda InfB Direto, InfB Reverso e InfB Sonda RNP Direto, RNP Reverso e RNP Sonda Lotes dos Insumos Certificados com Procedência DNA Express Biotecnologia 1. Código do Produto: DNA AU100 Frasco de 100mL Lote: F10A2830 Data da Fabricação: 07/03/2013 Data de Validade: 07/09/ Guarulhos, SP Página 1
2 2.Kit One-Step qrt-pcr Código do Produto: DNA Kit One-Step qrt-pcr 500 Suficiente para 500 testes (volume final da reação de qrt-pcr de 50uL) Suficiente para 1000 testes (volume final da reação de qrt-pcr de 25uL) Lote: K10A1437 Data da Fabricação: 13/06/2013 Data de Validade: 13/10/ Oligonucleotídeo InfA Direto Cód. do Produto: Primer InfA Direto 50uL 40uM Sequência: 5 -GAC CRA TCC TGT CAC CTC TGA C -3 Lote: Oligonucleotídeo InfA Reverso Código do Produto: Primer InfA Reverso 50uL 40uM Sequência: 5 - AGG GCA TTY TGG ACA AAK CGT CTA -3 Lote: Oligonucleotídeo Pdm InfA Direto Código do Produto: Primer Pdm InfA Direto 50uL 40uM Sequência: 5 -TTG CAG TAG CAA GTG GGC ATG A -3 Lote: Guarulhos, SP Página 2
3 6.Oligonucleotídeo Pdm InfA Reverso Código do Produto: Primer Pdm InfA Reverso 50uL 40uM Sequência: 5 - TCT TGT GAG CTG GGT TTT CAT TTG -3 Lote: Oligonucleotídeo Pdm H1 Direto Código do Produto: Primer Pdm H1 Direto 50uL 40uM Sequência: 5 -GTG CTA TAA ACA CCA GCC TCC CAT T-3 Lote: Oligonucleotídeo Pdm H1 Reverso Código do Produto: Primer Pdm H1 Reverso 50uL 40uM Sequência: 5 - AGA CGG GAY ATT CCT CAA TCC TG -3 Lote: Oligonucleotídeo AH1 Direto Código do Produto: Primer AH1 Direto 50uL 40uM Sequência: 5 -AAC TAC TAC TGG ACT CTR CTK GAA-3 Lote: Guarulhos, SP Página 3
4 10.Oligonucleotídeo AH1 Reverso Código do Produto: Primer AH1 Reverso 50uL 40uM Sequência: 5 -CCA TTG GTG CAT TTG AGK TGA TG-3 Lote: Oligonucleotídeo AH3 Direto Código do Produto: Primer AH3 Direto 50uL 40uM Sequência: 5 -AAG CAT TCC YAA TGA CAA ACC-3 Lote: Oligonucleotídeo AH3 Reverso Código do Produto: Primer AH3 Reverso 50uL 40uM Sequência: 5 -ATT GCR CCR AAT ATG CCT CTA GT-3 Lote: Oligonucleotídeo InfB Direto Código do Produto: Primer InfB Direto 50uL 40uM Sequência: 5 -TCC TCA AYT CAC TCT TCG AGC G-3 Lote: Guarulhos, SP Página 4
5 14.Oligonucleotídeo InfB Reverso Código do Produto: Primer InfB Reverso 50uL 40uM Sequência: 5 -CGG TGC TCT TGA CCA AAT TGG-3 Lote: Oligonucleotídeo RNP Direto Código do Produto: Primer RNP Direto 50uL 40uM Sequência: 5 -AGA TTT GGA CCT GCG AGC G-3 Lote: Oligonucleotídeo RNP Reverso Código do Produto: Primer RNP Reverso 50uL 40uM Sequência: 5 -GAG CGG CTG TCT CCA CAA GT-3 Lote: InfA Sonda Código do Produto: Sonda InfA 50uL 10uM Sequência: 5 -(FAM) TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC ACG (BHQ-1)-3 Frasco contendo 50uL na concentração de 10uM em solução Tris EDTA ph 8.0 Lote: Data da Fabricação: 14/06/ Guarulhos, SP Página 5
6 18. Pdm InfA Sonda Código do Produto: Sonda Pdm InfA 50uL 10uM Sequência: 5 -(FAM) TGA ATG GGT C [T(BHQ-1)]A TCC CGA CCA GTG AGT AC (C3 spacer)-3 Frasco contendo 50uL na concentração de 10uM em solução Tris EDTA ph 8.0 Lote: Data da Fabricação: 14/06/ Pdm H1 Sonda Código do Produto: Sonda Pdm H1 50uL 10uM Sequência: 5 -(FAM) ATA CAT CCG A[T(BHQ-1)]C ACM ATT GGA AAA TGT CC (C3 spacer)-3 Frasco contendo 50uL na concentração de 10uM em solução Tris EDTA ph 8.0 Lote: Data da Fabricação: 14/06/ RNP Sonda Código do Produto: Sonda RNP 50uL 10uM Sequência: 5 -(FAM) TTC TGA CCT GAA GGC TCT GCG CG (BHQ-1)-3 Frasco contendo 50uL na concentração de 10uM em solução Tris EDTA ph 8.0 Lote: Data da Fabricação: 14/06/ AH1 Sonda Código do Produto: Sonda AH1 50uL 10uM Sequência: 5 -(FAM) TGA YCC AAA GCC [T(BHQ-1)]CT ACT CAG TGC GAA AGC (C3 spacer)-3 Frasco contendo 50uL na concentração de 10uM em solução Tris EDTA ph 8.0 Lote: Data da Fabricação: 14/06/ Guarulhos, SP Página 6
7 22. AH3 Sonda Código do Produto: Sonda AH3 50uL 10uM Sequência: 5 -(FAM) CAG GAT CAC ATA TGG GSC CTG TCC CAG (BHQ-1)-3 Frasco contendo 50uL na concentração de 10uM em solução Tris EDTA ph 8.0 Lote: Data da Fabricação: 14/06/ InfB Sonda Código do Produto: Sonda InfB 50uL 10uM Sequência: 5 -(FAM) CCA ATT CGA GCA GCT GAA ACT GCG GTG (BHQ-1)-3 Frasco contendo 50uL na concentração de 10uM em solução Tris EDTA ph 8.0 Lote: Data da Fabricação: 14/06/ Guarulhos, SP Página 7
8 Insumos certificados com testes realizados no equipamento 7500 Real-Time PCR System (Applied Biosystems) utilizando os seguintes parâmetros: Leitura do Sinal de Fluorescência: Detector: Influenza (cor vermelha) ou RNP (cor preta) Reporter: FAM Quencher: (none) Leitura do sinal de fluorescência realizada durante o 3º passo do ciclo de amplificação (68 o C por 45 segundos) Guarulhos, SP Página 8
9 InfA Reagentes Kit One-Step qrt-pcr por reação de RT-PCR em Tempo Real (concentração final de 3mM MgSO 4 ) 2X Tampão de Reação qrt-pcr 40uM InfA Direto 40uM InfA Reverso 10uM InfA Sonda Corante de Referência ROX Enzimas qrt-pcr 12,5uL 5uL Volume por Reação de RT-PCR em Tempo Real RNA Viral / Controle Negativo / Controle Positivo 20uL 5uL Controle Negativo: Controle Positivo Lote P07 Data de Fabricação 11/06/2013 RNA sintético produzido in vitro contendo a seguinte sequência de material genético: Influenza A virus (A/Puerto Rico/8/34(H1N1)) segment 7 Sequence ID: ref NC_ Guarulhos, SP Página 9
10 InfA Guarulhos, SP Página 10
11 Pdm InfA Reagentes Kit One-Step qrt-pcr por reação de RT-PCR em Tempo Real (concentração final de 3mM MgSO 4 ) 2X Tampão de Reação qrt-pcr 40uM Pdm InfA Direto 40uM Pdm InfA Reverso 10uM Pdm InfA Sonda Corante de Referência ROX Enzimas qrt-pcr 12,5uL 5uL Volume por Reação de RT-PCR em Tempo Real RNA Viral / Controle Negativo / Controle Positivo 20uL 5uL Controle Negativo: Controle Positivo Lote P07 Data de Fabricação 11/06/2013 RNA sintético produzido in vitro contendo a seguinte sequência de material genético: Influenza A virus (A/Mexico City/INERPHAC4/2010(H1N1)) segment 5 nucleocapsid protein (NP) gene Sequence ID: gb KC Guarulhos, SP Página 11
12 Pdm InfA Guarulhos, SP Página 12
13 Pdm H1 Reagentes Kit One-Step qrt-pcr por reação de RT-PCR em Tempo Real (concentração final de 6mM MgSO 4 ) 2X Tampão de Reação qrt-pcr 50mM MgSO 4 40uM Pdm H1 Direto 40uM Pdm H1 Reverso 10uM Pdm H1 Sonda Corante de Referência ROX Enzimas qrt-pcr 12,5uL 3,5uL 1,5uL Volume do Mix por Reação de RT-PCR em Tempo Real RNA Viral / Controle Positivo / Controle Negativo 20uL 5uL Controle Negativo: Controle Positivo Lote P07 Data de Fabricação 11/06/2013 RNA sintético produzido in vitro contendo a seguinte sequência de material genético: Influenza A virus (A/Mexico City/INERPHAC4/2010(H1N1)) segment 4 hemagglutinin (HA) gene Sequence ID: gb KC Guarulhos, SP Página 13
14 Pdm H Guarulhos, SP Página 14
15 AH1 Reagentes Kit One-Step qrt-pcr por reação de RT-PCR em Tempo Real (concentração final de 6mM MgSO 4 ) 2X Tampão de Reação qrt-pcr 50mM MgSO 4 40uM AH1 Direto 40uM AH1 Reverso 10uM AH1 Sonda Corante de Referência ROX Enzimas qrt-pcr 12,5uL 3,5uL 1,5uL Volume do Mix por Reação de RT-PCR em Tempo Real RNA Viral / Controle Positivo / Controle Negativo 20uL 5uL Controle Negativo: Controle Positivo Lote P07 Data de Fabricação 11/06/2013 RNA sintético produzido in vitro contendo a seguinte sequência de material genético: Influenza A virus (A/Michigan/31/2009(H1N1)) segment 4 hemagglutinin (HA) gene Sequence ID: gb KC Guarulhos, SP Página 15
16 AH Guarulhos, SP Página 16
17 AH3 Reagentes Kit One-Step qrt-pcr por reação de RT-PCR em Tempo Real (concentração final de 3mM MgSO 4 ) 2X Tampão de Reação qrt-pcr 40uM AH3 Direto 40uM AH3 Reverso 10uM AH3 Sonda Corante de Referência ROX Enzimas qrt-pcr 12,5uL 5uL Volume por Reação de RT-PCR em Tempo Real RNA Viral / Controle Negativo / Controle Positivo 20uL 5uL Controle Negativo: Controle Positivo Lote P07 Data de Fabricação 11/06/2013 RNA sintético produzido in vitro contendo a seguinte sequência de material genético: Influenza A virus (A/swine/South Dakota/A /2013(H3N2)) segment 4 hemagglutinin (HA) gene Sequence ID: gb KC Guarulhos, SP Página 17
18 AH Guarulhos, SP Página 18
19 InfB Reagentes Kit One-Step qrt-pcr por reação de RT-PCR em Tempo Real (concentração final de 3mM MgSO 4 ) 2X Tampão de Reação qrt-pcr 40uM InfB Direto 40uM InfB Reverso 10uM InfB Sonda Corante de Referência ROX Enzimas qrt-pcr 12,5uL 5uL Volume por Reação de RT-PCR em Tempo Real RNA Viral / Controle Negativo / Controle Positivo 20uL 5uL Controle Negativo: Controle Positivo Lote P07 Data de Fabricação 11/06/2013 RNA sintético produzido in vitro contendo a seguinte sequência de material genético: Influenza B virus (B/Arizona/03/2011) segment 8 nuclear export protein (NEP) and nonstructural protein 1 (NS1) genes Sequence ID: gb KC Guarulhos, SP Página 19
20 InfB Guarulhos, SP Página 20
21 RNP Reagentes Kit One-Step qrt-pcr por reação de RT-PCR em Tempo Real (concentração final de 3mM MgSO 4 ) 2X Tampão de Reação qrt-pcr 40uM RNP Direto 40uM RNP Reverso 10uM RNP Sonda Corante de Referência ROX Enzimas qrt-pcr 12,5uL 5uL Volume por Reação de RT-PCR em Tempo Real RNA Viral / Controle Negativo / Controle Positivo 20uL 5uL Controle Negativo: Controle Positivo Lote P07 Data de Fabricação 11/06/2013 RNA sintético produzido in vitro contendo a seguinte sequência de material genético: Homo sapiens ribonuclease P/MRP 30kDa subunit (RPP30), transcript variant 1 Sequence ID: ref NM_ Guarulhos, SP Página 21
22 RNP Guarulhos, SP Página 22
23 Resultados dos Testes Amplificação com alta eficiência e especificidade das sequências alvos do Vírus da Influenza e Gene RNP por RT-PCR em Tempo Real pelo kit One-Step qrt-pcr utilizando os seguintes conjuntos de oligonucleotídeos e sondas fluorescentes Controle Positivo (Média Ct) Controle Negativo (Ct) InfA 25,03 Undet. Pdm InfA 25,15 Undet. Pdm H1 26,64 Undet. AH1 25,84 Undet. AH3 25,18 Undet. InfB 23,67 Undet. RNP 24,14 Undet. Especificação de alta eficiência e especificidade: Amplificação das sequências alvos do Vírus da Influenza e Gene RNP (Controles Positivos) por RT-PCR em Tempo Real apresentado um valor da média dos Cts menor que 30. Ausência de amplificação do controle negativo (Ct Undet.) Resultado: ATENDE AS ESPECIFICAÇÕES Guarulhos, SP Página 23
24 Este certificado restringe-se apenas aos números dos lotes fornecidos. Data da aprovação: 16/06/2013 João Marcos M. Mercado CRBM ª Região SP Gerente de Produção Fabricado no Brasil pela : CNPJ / Rua João Batista Nogueira 500 Módulo 29, Guarulhos, SP SAC (11) / Guarulhos, SP Página 24
Relação, perfil de resistência e procedência dos isolados de M. tuberculosis estudados.
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