ROSANA HELENA TEIXEIRA DE LIMA RIBEIRO ANDRADE EXPRESSÃO DE CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS EM LESÕES PERIRRADICULARES DE DIABÉTICOS TIPO 2
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1 ROSANA HELENA TEIXEIRA DE LIMA RIBEIRO ANDRADE EXPRESSÃO DE CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS EM LESÕES PERIRRADICULARES DE DIABÉTICOS TIPO Programa de Pós-Graduação em Odontologia Av. Alfredo Baltazar da Silveira, 580, cobertura Rio de Janeiro, RJ Tel. (0XX21)
2 ROSANA HELENA TEIXEIRA DE LIMA RIBEIRO ANDRADE EXPRESSÃO DE CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS EM LESÕES PERIRRADICULARES DE DIABÉTICOS TIPO 2 Dissertação apresentada ao Programa de Pós-graduação em Odontologia da Universidade Estácio de Sá, como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Odontologia (Endodontia). Orientadora: Prof ª. Dra. Luciana Armada Dias UNIVERSIDADE ESTÁCIO DE SÁ RIO DE JANEIRO 2017 ii
3 DEDICATÓRIA Dedico esse trabalho à Deus que esteve ao meu lado em todos os momentos dessa longa jornada. Aos meus pais amados, Maria Helena e Carlos Alberto por serem meus maiores incentivadores e meu porto seguro. Ao meu marido Régis, pelo amor, carinho e paciência em todos os momentos. À minha filha Helena, por compreender, mesmo tão novinha, a minha ausência e me apoiar incondicionalmente com todo seu amor. iii
4 AGRADECIMENTOS Agradeço a Deus, por estar ao meu lado em todos os momentos da minha vida, abençoando meu caminho e me carregando no colo nos momentos mais difíceis em que pensei desistir. Agradeço imensamente aos meus pais, Maria Helena e Carlos Alberto, meus maiores incentivadores e exemplos a serem seguidos e por me proporcionar com todo amor ao longo da vida, o apoio necessário para que eu continuasse nessa longa caminhada para a realização de todos os meus sonhos. Obrigada por todo sacrifício que fizeram por mim e continuam fazendo e acima de tudo pelo amor incondicional que certamente foram fundamentais para que eu chegasse até aqui. Agradeço ao meu marido Régis, por todo amor, carinho e paciência ao longo dessa caminhada e por sempre me levantar nos momentos em que estava prestes a cair. Obrigada por ser esse pai maravilhoso para nossa filha e se fazer presente em todos os momentos, principalmente na minha ausência, dias e noites dedicados ao estudo. Sua tranqüilidade e segurança fizeram meus dias mais leves. Obrigada por seu amor. Agradeço à minha filha Helena, presente de Deus na minha vida, por seu amor incondicional, por ser minha força e por mostrar todos os dias o verdadeiro sentido da vida, o verdadeiro significado do que é o amor. Obrigada minha filha amada, por compreender minha ausência em diversos momentos e por sempre nutrir a minha vida com seu amor e sua alegria. Você certamente é minha inspiração para que eu sempre busque ser uma pessoa melhor. iv
5 Às minhas amigas queridas, que fizeram parte e compartilharam do mesmo sonho, e se tornaram minha fortaleza para que eu nunca desistisse no meio do caminho: Cristiane, Poliana, Katia, Taís, Márcia. Obrigada por tudo. À minha querida orientadora, Prof. Dra Luciana Armada, pelo grande exemplo de profissional competente, dedicada, e por ser essa pessoa tão incrível e iluminada. Obrigada por todos os ensinamentos, pela dedicação integral e disponibilidade em todos os momentos, sempre tão atenciosa e amável. Você com certeza estará sempre presente em minha memória e coração. Muito orgulho em tê-la como minha orientadora. Muito obrigada por tudo. Aos Professores Drs. José Siqueira, Fábio Ramôa, Flávio Alves, Isabela Rôças, Lúcio Gonçalves, Hélio Lopes, Mônica Neves, José Provenzano, Dennis Carvalho e Fábio Vidal por todos os ensinamentos e pelo curso de excelência que nos proporcionaram. À querida Angélica que desde o primeiro momento me acolheu com tanto carinho. Obrigada por toda ajuda e incentivo. Agradeço imensamente a Deus por tudo. v
6 ÍNDICE RESUMO... ABSTRACT... LISTA DE FIGURAS... LISTA DE TABELAS... LISTA DE ABREVIATURAS... vii ix xi xii xiii 1. INTRODUÇÃO REVISÃO DE LITERATURA JUSTIFICATIVA HIPÓTESE OBJETIVO MATERIAIS E MÉTODOS RESULTADOS DISCUSSÃO CONCLUSÃO REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS vi
7 RESUMO Objetivo. Avaliar através da imunohistoquímica a expressão de citocinas próinflamatórias (IL-17, IL-1 β, TNF- α) em lesões perirradiculares (LP) de pacientes diabéticos tipo 2 (DM2). Materiais e Métodos. Foram selecionadas 26 LPs (13 de DM2 e 13 de controles). Lâminas silanizadas contendo cortes de parafina foram utilizadas para a realização das reações imunohistoquímicas. A análise das imagens foi realizada com auxílio de microscópio óptico e cada lâmina foi subdividida em 5 campos de grande aumento. Foram atribuídos valores (0-2) para cada campo, de acordo com o número de marcações positivas para o anticorpo. Os dados foram analisados tendo como significância o valor de p<0,05. Resultados. A avaliação qualitativa da expressão das citocinas revelou maiores percentuais de marcações focal e fraco/moderado em IL-1β e principalmente marcação focal em TNF-α nos grupos avaliados. Foi possível observar diferenças entre os grupos apenas para IL-17, com maior expressão focal em controles e maior expressão fraca/moderada e forte em diabéticos. A análise quantitativa das citocinas em LP de diabéticos revelou maior expressão de IL-17 (p=0,0009). Nos pacientes controles não houve diferença significativa. Ao comparar diabéticos com controles foi possível observar resultados semelhantes exceto pela maior expressão de IL-17 em portadores de DM2 (p=0,047). Conclusão. A expressão de IL-1β, IL-17 e TNFα nas LP reforçou a participação destes mediadores químicos em patologias perirradiculares. Foi possível observar diferenças entre os grupos apenas para IL-17 sugerindo o envolvimento desta citocina tanto na progressão de LP como no DM2. vii
8 Palavras-chave: Cisto periapical; citocinas; diabetes mellitus tipo 2; granuloma periapical; interleucina 17. viii
9 ABSTRACT Aim. Evaluate through immunohistochemistry the expression of proinflammatory cytokines (IL-17, IL-1 β, and TNF-α) perirradicular lesions in type 2 diabetic patients (DM2). Materials and Methods. 26 perirradicular lesions were selected (13 DM2 and 13 controls). Silanized slides containing paraffin were used for the immunohistochemical reactions. The analysis of the images was done by using an optical microscope and each blade was subdivided into 5 big fields increased, in which we evaluated the epithelium (cysts) and connective tissue. It were assigned values (0-2) for each field, based on the number of positive markups to the antibody. The data were analyzed with 5% significance (p<0,05). Results. The qualitative evaluation of the proinflammatory cytokines expression unveiled higher percentages of focal and weak/moderate markings on IL-1 β and mainly focal TNF-α marking in the evaluated groups. It was possible to observe differences among groups only for IL-17. There was bigger focal expression in controls and bigger weak/moderate and strong expressions in diabetics. The quantitative analysis of the cytokines in LP of diabetics showed a greater expression of IL-17 (P=0,0009). In the control group, there was not significant differences. When comparing diabetic with controls it was possible to observe similar results except for the greater expression of IL-17 in DM2 (p=0,047). Conclusion. The expression of IL-1 β, IL-17,, and TNF-α in LP enhanced the participation of these pro-inflammatory cytokines in perirradicular pathologies. It was possible to observe differences among groups only for IL-17, suggesting the involvement of this cytokine in progression LP and DM2. ix
10 Keywords: Cytokines; diabetes mellitus type 2; interleukin 17; periapical cyst; periapical granuloma. x
11 LISTA DE FIGURAS Figura 1. Interação entre infecção endodôntica e diabetes mellitus Figura 2. Cortes histológicos de lesões perirradiculares corados em hematoxilina e eosina Figura 3. Expressão de citocinas pró-inflamatórias em lesões perirradiculares de pacientes diabéticos Figura 4. Fotomicrografias de cortes histológicos com marcação positiva para citocinas pró-inflamatórias em lesões perirradiculares de pacientes diabéticos (imunoperoxidase; 40x) Figura 5. Expressão de citocinas pró-inflamatórias em lesões perirradiculares de pacientes controles Figura 6. Fotomicrografias de cortes histológicos com marcação positiva para citocinas pró-inflamatórias em lesões perirradiculares de pacientes controles (imunoperoxidase; 40x) Figura 7. Comparação entre a expressão de citocinas pró-inflamatórias em lesões perirradiculares de pacientes diabéticos com pacientes controles (Mann-Withney test) xi
12 LISTA DE TABELAS Tabela 1. Distribuição das variáveis tipo de lesão perirradicular, localização e posição na arcada das amostras dos grupos diabéticos e controles Tabela 2. Comparação entre as citocinas pró-inflamatórias em lesões perirradiculares de diabéticos Tabela 3. Comparação entre as citocinas pró-inflamatórias em lesões perirradiculares de controles xii
13 LISTA DE ABREVIATURAS AGES Advanced glycation end-produts (Produtos finais de glicação avançada AIDS Acquired immunodeficiency syndrome (Síndrome da imunodeficiência adquirida) DM Diabetes Mellitus DM1 Diabetes Mellitus tipo 1 DM2 Diabetes Mellitus tipo 2 FVIII Fator VIII de coagulação FIX Fator IX de coagulação FVW Fator de Von Willebrand HbA1c Hemoglobina glicada HIV Human immunodeficiency vírus (Vírus da imunodeficiência humana) Ig Imunoglobulina IL Interleucina LP Lesão perirradicular ON Óxido nítrico PG Prostaglandina RAGES receptor for advanced glycation end-produts (Receptor de produtos finais de glicação avançada) TNF-α Tumor necrosis fator alpha (Fator de necrose tumoral alfa) Tc Linfócitos T citotóxicos TGF- β1 Fator de crescimento transformador β1 Th Linfocitos T helper VEGF Fator de crescimento endotelial xiii
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