Simoni PELCHEBISKI 1 ; Márcia. S. LAVINA 1 ; Fábio. B. SCOTT 2 ; Claudia. N. SANTOS 3 ; Luciene S. SOUZA 3 ; Maria de Lurdes A. RODRIGUES 4* RESUMO

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1 DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO DE HELMINTOS GASTRINTESTINAIS DE CÃES E AVALIAÇÃO DE TÉCNICAS (Parasitological diagnosis of gastrintestinais helminths of dogs and techniques evalution) Simoni PELCHEBISKI 1 ; Márcia. S. LAVINA 1 ; Fábio. B. SCOTT 2 ; Claudia. N. SANTOS 3 ; Luciene S. SOUZA 3 ; Maria de Lurdes A. RODRIGUES 4* 1 Pós-Grad em Ciências Veterinárias EDESC Univ. Est. de Santa Catarina; 2 Dep. Parasitol. Animal, Lab. de Quimioterapia Exp Parasit. Animal, UFRRJ; 3 Pós-Grad.Ciências Veterinárias, Dep. de Parasitol. Animal, UFRRJ; 4 Dep. de Parasitol. Animal, CPGCV, Lab. Helmintol., Inst. de Vet., UFRRJ RESUMO O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a sensibilidade de duas técnicas para contagem de ovos de helmintos gastrintestinais de cães: a técnica de centrifugo-flutuação e a de Willis. O experimento foi realizado no Laboratório de Helmintologia da Estação para Pesquisas Parasitológicas W. O. Neitz, do Departamento de Parasitologia Animal da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Foram utilizados 26 cães, da raça Beagle, do canil do Laboratório de Quimioterapia Experimental em Parasitologia Veterinária, naturalmente infectados por nematóides gastrintestinais. Das 26 amostras processadas pela técnica de centrifugo-flutuação, 25 estavam positivas para A. caninum e 22 para T. vulpis, e pela de Willis, o resultado foi de 25 e 21, respectivamente. A Técnica de centrifugo-flutuação apresentou maior sensibilidade na recuperação de ovos, principalmente em animais com número de ovos baixo. PALAVRAS-CHAVE: Willis-Mollay, centrifugo-flutuação, cães, nematoídes gastrintestinais. ABSTRACT The present study was to evaluate the sensitivity of two techniques for counting eggs of gastrintestinal helminths of dogs: the centrifugal-flotation and Willis technique. The experiment was conducted at the Laboratory of Helminthology Station for parasitological W. O. Neitz, Department of Animal Parasitology of the Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. We used 26 dogs, Beagle kennel Laboratory of Experimental Chemotherapy in Veterinary Parasitology, naturally infected with gastrointestinal nematodes. Of the 26 samples processed by centrifugal flotation technique, 25 were positive for A. caninum and 22 for T. vulpis and Willis-Mollay the result was 25 and 21 respectively. The centrifugal-flotation technique showed greater sensitivity in the recovery of eggs, especially in animals with low numbers of eggs. KEY WORDS: Willis-Mollay, Centrifugal flotation, Dogs, gastrintestinal nematodes. No Brasil, cães são os animais de companhia mais freqüentes, principalmente em grandes centros urbanos (OLIVEIRA- SIQUEIRA et al,. 2002). O papel do cão como * Endereço para correspondência: Lab. Helmintol., Inst. de Vet., UFRRJ, km 7 da BR 465, Seropédica, RJ Brasil, lurdesar@ufrrj.br, hospedeiro definitivo para um número de parasitos zoonóticos tem sido amplamente estudado e reconhecido como um problema de saúde pública, especialmente nos países em desenvolvimento e em comunidades socioeconomicamente desfavorecidas (CRAIG; MACPHERSON, 2000). As infecções podem ser assintomáticas (HACKETT; LAPPIN, 2003) ou 51

2 causar desordens intestinais, anorexia, perda ou pouco ganho de peso (BARUTZKI; SCHAPER, 2003), variando com a espécie e com a carga parasitária, entretanto, os donos dos animais tem pouco conhecimento sobre os parasitos e a transmissão (BUGG et al., 1999). Alguns desses helmintos são responsáveis por zoonoses, como a larva migrans cutânea causada pelo Ancylostoma caninum, e larva migrans visceral causada pelo Toxocara canis. Alguns autores vêm relatando casos de larva migrans visceral causada pelo Trichuris vulpis (SAKANO; HAMAMOTO, 1980; MASSUDA et al., 1987). O diagnóstico coproparasitológico através da técnica de Willis, para as helmintoses gastrintestinais de animais de companhia ainda é o recurso laboratorial mais utilizado, devido à fácil execução e baixo custo (MELLO et al., WILCOX, COURA, 1991). Técnicas de centrifugo-flutuação vem sendo empregadas demonstrando alta eficiência no diagnóstico, principalmente quando a carga parasitária é baixa. O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a sensibilidade de duas técnicas para contagem de ovos de helmintos intestinais de cães: a Técnica de centrifugoflutuação (FIGUEIREDO et al, 1984) e a Técnica de Willis (1921). O experimento foi realizado no Laboratório de Helmintologia da Estação para Pesquisas Parasitológicas W. O. Neitz, do Departamento de Parasitologia Animal da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Foram utilizados 26 cães, da raça Beagle, do canil do Laboratório de Quimioterapia Experimental em Parasitologia Veterinária (LQEPV), naturalmente infectados por nematóides gastrintestinais, e mantidos em gaiolas individuais por 24 h, para coleta de fezes. Amostras de fezes foram coletadas em sacos plásticos previamente identificados, mantidas sob refrigeração até o processamento, homogeneizadas, pesadas e processadas pelas 52 técnicas de Willis e centrifugo-flutuação. Para cada técnica utilizou-se um grama de fezes, as leituras foram realizadas em duplicata, permanecendo a lamínula por um tempo de 5 a 10 minutos sobre o tubo. Das 26 amostras processadas pela técnica de centrifugo-flutuação; 25 estavam positivas para A. caninum e 22 para T. vulpis e para de Willis o resultado foi de 25 e 21 respectivamente (tabela 1). Em apenas uma das amostras o resultado foi negativo para ambas as técnicas. Foi utilizado o teste de Kolmogorov- Smirnov para testar a normalidade no intervalo de confiança de 95% (p>0,05) e o teste t para dados pareados na comparação entre as técnicas. Para cálculo do percentual de OPG realizou-se regra de três simples. Maior número de ovos foi observado na técnica de centrigugo-flutuação para A. caninum e T. vulpis (tabela 2) com diferença significativa entre as técnicas de centrifugo-flutuação e Willis para ovos de Ancylostoma sp. (p=0,0015) e Trichuris sp. (p=0,026). Apesar de não ser o objetivo deste estudo, observou-se associação entre a idade e a infecção, o que está de acordo com os resultados de Balassiano et al. (2009), confirmando que cães mais jovens apresentaram maior OPG (ROBERTSON; THOMPSON, 2002), isso se deve principalmente ao fato de que muitos parasitas utilizam vias de transmissão que expõem especificamente recém-nascidos ou neonatos e também porque os cães jovens não respondem imunologicamente de forma eficaz (RAMÍREZ-BARRIOS et al., 2004; FONTANARROSA et al., 2006), entretanto, Haralabidis et al. (1988) não relataram uma associação entre idade e infecção. A recuperação média de ovos de A. caninum foi maior na centrifugo-flutuação (média=156,6) quando comparado com Willis (media=56,3), porém o percentual de positividade (96%) foi igual para ambas as técnicas, indicando que a técnica de Willis é uma boa técnica. Para OPG baixo

3 Tabela 1. Amostras, idade, sexo dos animais e resultado da contagem de ovos nas fezes pelas técnicas de Centrifugo-flutuação e Willis em cães da raça Beagle. Técnicas coproparasitológicas Identificação dos cães Centrifugo-flutuação Willis Nº amostra Idade (m) Sexo Ancylostoma sp. Trichuris sp. Ancylostoma sp. Trichuris sp M 14, F M M F F M M F M F F F F M F F M F M F M M F M M recomenda-se a técnica de centrifugo-flutuação, com chance de demonstrar o falso negativo encontrado na técnica de Willis, resultados que concordam com os publicados por Táparo et al., (2006). Por outro lado, Oliveira-Siqueira et al., (2002), não encontraram diferenças entre as técnicas de Flutuação e Centrifugo-flutuação, porém os autores não relatam a contagem de ovos. Diferentes técnicas de diagnóstico podem influenciar a prevalência de parasitos gastrintestinais (ROBERTSON et al., 2000; KAGIRA; KANYARI, 2001). Neste estudo o nematóide mais prevalente foi Ancylostoma caninum também encontrado por Balassiano et al., (2009). Relatos de casos de larva migrans visceral por Trichuris vulpis vem sendo relatados na literatura, desta forma chama-se a atenção para a alta freqüência, deste nematóide, encontrada nos animais examinados, uma vez que os ovos podem sobreviver por vários meses 53

4 Tabela 2. Comparação entre as Técnicas Centrifugo-flutuação e Willis, percentual de positividade e número médio de ovos e erro padrão de Nematóides gastrintestinais em cães da raça Beagle. Positivos (%) X * ± SEM ** Técnicas N Ancylostoma sp. Trichuris sp. Centrífugo-flutuação 26 96,15(25)163,58± 36,96a 84,61(22) 102,44± 24,197a Willis 26 96,15(25) 56,36± 13,30b 80,77 (21) 46,61± 11,07b *Média; **Erro padrão no ambiente ( SOULSBY, 1987). Diante dos resultados, pode-se concluir que a Centrifugoflutuação, apresentou maior sensibilidade, detectando positividade de 84% para Ancylostoma e de 59% para T. vulpis na comparação com Willis. REFERÊNCIAS BALASSIANO, B. C. C.; CAMPOS, M. R.; MENEZES, R. C. A. A.; PEREIRA, M. J. S. Factors associated with gastrointestinal parasite infection in dogs in Rio de Janeiro, Brazil. Preventive Veterinary Medicine, n. 91, p , BARUTZKI, D.; SCHAPER, R. Endoparasites in dogs and cats in Germany Parasitology Research, v.90, supl. 3, p.s148-s150, BUGG, R. J.; ROBERTSON, I. D.; ELLIOT, A. D.; THOMPSON, R. C. Gatrointestinal parasites of urban dogs in Perth, Western Australia. Veterinary Journal, v. 157, p , CRAIG, P. S.; MACPHERSON, C. N. L., Dogs and cestode zoonoses. MACPHERSON, C. N. L.; MESTIN F. X. WANDELER A. I., eds. Dogs zoonoses and Public Health. Oxon, United Kingdom: CAB International, p FIGUEIREDO, P. C.; SERRA-FREIRE, N. M.; GRISI, L. Eimerias de bovinos leiteiros no Estado do Rio de Janeiro: Técnica de diagnóstico e espécies identificadas. Atas Soc. Biol. Rio de Janeiro, v. 24, p , FONTANORROSA, M. F.; VEZZANI, D.; BASABE, J.; EIRAS, D. F. An epidemiological study 54 of gastrointestinal parasitesof dogs from Southern Greater Buenos Aires (Argentina): age, gender, breed, mixed infections, and seasonal and spatial patterns. Veterinary Parasitology, v. 136, p , GIRALDO, M. I.; GARCÍA, N. I.; CASTAÑO, J. C. Prevalência de helmintos intestinales em caninos del departamento del Quindío. Biomédica, n. 25, p , HACKETT, T.; LAPPIN, M. R. Prevalence of enteric pathogens in dogs of North-central Colorado. Journal of the American Animal Hospital Association, v.39, n.1, p.52-56, HARALABIDIS, S. T.; PAPAZACHARIADOU, M. G.; KOUTINAS, A. F.; RALLIS, T. S. A survey on the prevalence of gastrointestinal parasites of dogs in the area of Thessalonoki, Greece. Journal of Helmintology, v. 62, n.1, p , KAGIRA, J. M.; KANYARI, P. W. N. Parasitic diseases as causes of mortality in dogs in Kenya: a retrospective study of 351 cases ( ). Israel Journal of Veterinary Medicine, v. 56, n.1, MASUDA, Y.; KISHIMOTO, T.; ITO, H.; TSUJI, M. Visceral Larva Migrans caused by Trichuris vulpis presenting as a pulmonary mass. Thorax, v. 42, p , MELLO, R.T.; ROCHA, M.O.; COSTA, C.A.; GIOVANNINI, H.R.; MOREIRA, M.C.C.G. Estudo comparativo entre os métodos Coprotest e de Hoffman, Pons e Janer no diagnóstico deparasitoses intestinais. Revista de Farmácia e Bioquímica Da Universidade Federal de Minas Gerais, v.10, p.9-15, OLIVEIRA-SEQUEIRA, T. C. G.; AMARANTE, A.

5 F. T.; FERRARI, T. B.; NUNES, L. C. Prevalence of intestinal parasites in dogs from São Paulo State, Brazil. Veterinary Parasitology, v.103, n.1-2, p.19-27, RAMÍREZ-BARRIOS, R.A.; BARBOZA-MENA, G.; MUNOZ, J.; ANGULOCUBILLAN, F.; HERNANDEZ, E.; GONZALEZ, F.; ESCALONA, F. Prevalence of intestinal parasites in dogs under veterinary care in Maracaibo. Venezuela. Veterinary Parasitology, v.121, p.11-20, ROBERTSON, I. D.; IRWIN, P. J.; LYMBERY, A. J.; THOMPSON, R. C. A. The role of companion animals in the emergence of parasitic zoonoses. International Journal for Parasitology, v.30, n.12-13, p , ROBERTSON, I. D.; THOMPSON, R. C. Enteric parasitic zoonoses of domestical dogs and cats. Microbes and Infection, v.4, n.8, p , SAKANO, T.; HAMAMOTO, K.; KOBAYASHI, Y.; SAKATA, Y.; TSUJI, M.; USUI, T. Visceral larva migrans caused by Trichuris vulpis. Archives of Disease in Childhood, v. 55, p , SOULSBY, E. J. L. Parasitoloía y enfermedades parasitarias em los animales domésticos. 7ª edición. México: Nueva Editorial Interamericana, 823p, TÁPARO, C.V.; PERRI, S.H.V.; SERRANO, A.C.N.; ISHIZAK, M.N.; COSTA, T.P; AMARANTE, A.F.T.; BRESCIANI, K.D.S. Comparação entre técnicas coproparasitológicas no diagnóstico de ovos de helmintos e oocistos de protozoários em cães. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária, n.15, v.1, p.1-5, WILLCOX, H.P.; COURA, J.R. The efficiency of Lutz, Kato-Katz and Baermann-Moraes (adapted) techniques association to the diagnosis of intestinal helmints. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v.86, n.4, p , WILLIS, I. I. A simple levitation method for the detection of hookworm ova. Medical Journal of Austrália, v. 8, p ,