man ual usuário Português Hoefer SE615 e SE675 Rodízios gel múltiplos mu SE615-IM/Portuguese/Rev.C0/08-12

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1 man ual usuário Português Hoefer SE615 e SE675 Rodízios gel múltiplos mu SE615-IM/Portuguese/Rev.C0/08-12

2 Conteúdo Advertências e precauções de segurança... ii Introdução...1 Configurando o rodízio...5 Fundição com placas divisoras...7 Derramando padrão géis homogêneos...9 Derramando géis de gradiente padrão...11 Derramando géis de empilhamento...15 Removendo géis polimerizados...16 Solução de problemas...18 Cuidados e manutenção...20 Apêndice A: números de identificação Gel...21 Apêndice B: Referências...21 Informações sobre pedidos...22 pi

3 Advertências e precauções de segurança A acrilamida é uma neurotoxina. Usar luvas ao manusear acrilamida ou poliacrilamida. Use uma máscara contra poeira quando a pesagem acrilamida ou preparação de soluções de acrilamida. Importante! A maioria dos solventes orgânicos, incluindo metanol, isobutanol, isopropanol, e até mesmo de n-butanol vontade mania ou a nuvem de plástico acrílico com a exposição prolongada. Utilize apenas pequenas quantidades para cobrir as géis. Protegendo seu equipamento Para manter seu instrumento em excelente estado, por favor, tome as seguintes medidas importantes: Use água saturada de n-butanol para géis de resolução overlayering durante a polimerização. Evite o uso de espátulas de metal pequenas para separar as placas. Espátulas pode lascar as bordas de placas de vidro e impedi-los de selagem. Após a fundição, você pode precisar usar uma cunha para separar um sanduíche de vidro e gel de outro. Coloque um Wonder Wedge entre sanduíches adjacentes para separá-los. pii

4 Introdução Tamanhos de gel Os Hoefer SE615 e SE675 Rodízios Gel múltiplos são projetados para vazamento vertical gel de acrilamida laje de concentração homogênea ou gradiente. Use os rodízios com cm placas de vidro e 2 cm de largura espaçadores para lançar cm de gel. Use 1-cm de largura espaçadores para lançar cm de gel para eletroforese bidimensional. Os géis resultantes são compatíveis com Hoefer SE400, SE600 e SE600 Chroma Vertical Unidades Eletroforese Slab Gel. Géis homogêneos e gradiente O SE615 e SE675 pode ser utilizado para a fundição géis tanto homogéneos e de gradiente. Géis de gradiente são moldados através da porta, na parte inferior do rodízio. Na conversão de géis homogêneos, os resultados são mais consistentes quando os géis são lançados a partir do fundo. A região em forma de V na parte inferior da unidade de fundição permite que a solução de gel a subir de maneira uniforme, produzindo géis idênticos. p1

5 Padrão de fundição No procedimento de fundição padrão, um gel é vazado entre duas placas de vidro mantidas afastadas por um par de espaçadores. (Veja a Figura 2 na página 5). O resultado pode ser retratado como um sanduíche, com o gel entre duas placas de vidro. Quando você configura uma unidade de eletroforese vertical laje gel, coloque o vidro e sanduíche de gel na unidade de eletroforese. O número máximo de géis pode expressos simultaneamente utilizando o procedimento de fundição padrão é mostrada na Tabela 1. Tabela 1. O número máximo de géis padrão lançado 0,75-mm 1,0-mm 1,5-mm espaçadores espaçadores espaçadores SE SE p2

6 Fundição com placas divisoras Você pode achar que é útil para dobrar o número de géis executados simultaneamente em uma unidade de eletroforese. Isto pode ser realizado por moldagem de um sanduíche. Um sanduíche contém uma placa divisora dentada de vidro e um segundo par de espaçadores entre as placas de padrão, e constitui assim duas camadas de gel de entre três placas de vidro (ver Fig. 3, na página 8). placas Divider estão disponíveis para o SE400 e SE600. O número máximo de géis pode expressos em simultâneo, utilizando placas de divisória (dois géis por sanduíche), é mostrada na Tabela 2. Tabela 2. O número máximo de géis expressos com placas divisoras 0,75-mm 1,0-mm 1,5-mm espaçadores espaçadores espaçadores SE SE Ver Fig. 1, na página 4 para identificar os componentes dos rodízios de gel múltiplas. Para obter informações sobre peças, acessórios e equipamentos relacionados, consulte a página 22. Derramando géis segunda dimensão-laje Ao preparar géis segunda dimensão-laje nos rodízios múltiplos, é importante para verter as lajes para a altura correcta. Se você estiver usando tiras IPG, você não precisa de um gel de empilhamento. Verter o gel dimensão segundo a 0,5-1,0 cm abaixo do topo da sanduíche para o vazamento padrão, ou 1 cm abaixo do entalhe se estiver a fundição com placas divisórias. Isto permite que um amplo espaço para segurar as tiras IPG entre as duas placas de vidro. Use 1,0 ou 1,5 milímetros-espaçadores com tiras IPG. p3

7 Fig 1. Componentes dos SE615 e SE675 Rodízios Gel múltiplos ! 0 SE615 e SE675 componentes número descrição 1 Corpo Caster, inclui faceplate 2 Suporte da mola (4) 3 Junta cabo de espuma 4 Silicone bloco de deslocação* 5 Bloco espaçador acrílico 6 Pente 7 Policarbonato folha de enchimento 8 Placa de vidro 9 Espaçador 10 Orifício de entrada 11 Parafuso de polegar Nylon * Um bloco pequeno deslocamento de silicone também está disponível para o SE675. p4

8 Configurando o rodízio Fig 2. Construir um sanduíche de vidro para a fundição padrão. rodízio placa de vidro espaçador uma sanduíche placa de vidro cera de papel ou policarbonato folha Nota: Não bloquear a porta de entrada de vermelho na parte inferior do painel frontal. Preparando o rodízio 1 Se o painel está ligado à magia, removê-lo. Remova os quatro grampos laterais, solte os dois parafusos, e retire o painel frontal. 2 Remover a vedação cabo de espuma. Aplique uma leve camada de lubrificante Selo Gel e substituir a junta. 3 Na conversão de géis de gradiente, anexar o tubo a partir do fabricante de gradiente para a porta de entrada na parte inferior do painel frontal. Géis homogêneos também pode ser lançada por essa porta. Se fundição géis homogéneos a partir do topo, inserir o bloco de deslocação adequada no aberto, a região em forma de V na parte inferior da câmara. 4 Coloque o rodízio aberta numa posição horizontal com a sua volta no topo de bancada. p5

9 Nota: Para fazer a separação de sanduíches gel polimerizado mais fácil, coloque folhas de papel de cera no rodízio entre cada conjunto de sanduíches de vidro. Nota: Ao analisar um grande número de géis, você pode achar que é útil para incluir números de identificação em gel o gel polimerizado. Veja o apêndice na página 21 para obter instruções sobre como fazer etiquetas de identificação de gel. Levemente molhado e coloque as marcas no canto inferior da sanduíche de gel durante a montagem da pilha. Nota: Se você usar folhas de policarbonato em vez de papel de cera entre cada sanduíche, o rodízio tem sanduíches menos. A construção da pilha 1 Coloque uma folha de policarbonato na rodízio de modo que 1/3 da folha de estende para fora do topo. Você pode usar esta folha como uma alavanca ao inserir folhas de enchimento depois de todos os sanduíches estão no lugar. Todos os componentes restantes são encaixadas contra o fundo e as laterais. 2 Coloque uma folha de papel de cera sobre a folha de policarbonato. Construa o primeiro sanduíche em quem a usa. 3 Coloque uma folha de papel de cera na parte superior da sanduíche e construir o sanduíche seguinte. 4 Repita o passo 3, alternando o papel de cera e sanduíches de gel. Ao longo da sanduíche final, estabelecer uma folha de policarbonato em vez de papel de cera de modo a que o nível de solução de gel é visível através da placa frontal. 5 Coloque a máscara sobre o rodízio e verifique se a pilha se encaixa perfeitamente, cerca de 0,5 mm acima da borda da roda. Se necessário, ajustar o número de folhas suplementares de policarbonato, blocos espaçadores de acrílico, placas de vidro e sanduíches para obter um ajuste confortável. 6 Assegure-se os espaçadores são hetero e ao longo das arestas das placas de vidro. Use o Spacer Mate para corrigir o alinhamento, se necessário. Se necessário, a placa off e certifique-se de todas as bordas dos componentes da pilha são flush. Pressione sobre aqueles que estão saindo até que todas as arestas são lavar e substituir o painel sobre o rodízio. 7 Fixe o painel frontal com os quatro grampos de mola e aperte os parafusos da parte inferior. p6

10 Fundição com placas divisoras Para dobrar o número de geles de funcionar simultaneamente sobre as unidades SE600 e afins, colocar uma placa divisora dentada de vidro e outro par de espaçadores entre as placas de vidro padrão. O resultado é um sanduíche, com duas camadas de gel formado pelas três placas de vidro. Para usar placas divisórias, siga as instruções em Derramando padrão géis homogêneos na página 9 ou Derramando géis de gradiente padrão na página 11. Ao calcular os volumes de solução, usar a fórmula na página 9. Ao empilhar sanduíches de vidro, use o seguinte procedimento. 1 Pilha sanduíches de vidro no rodízio, usando um sanduíche para cada dois géis você irá naufragar. Preencha o espaço extra com blocos de acrílico, placas de vidro e chapas de policarbonato. 2 Deslizar em uma folha de policarbonato contra o encosto. 3 Slide em um sanduíche de vidro. (Veja a Fig. 3.) Para construir um sanduíche, slide em uma placa de vidro rectangular e espaçadores lugar ao longo de cada um dos dois bordos laterais. Deslizar numa placa de vidro e entalhada divisor espaçadores lugar ao longo de cada um dos bordos laterais. Finalmente, deslize em uma placa de vidro segundo rectangular. p7

11 Nota: Para uma óptima visibilidade, coloque uma folha de policarbonato contra o painel. 4 Colocar uma folha de policarbonato ou papel de cera na parte superior do sanduíche. Repita o passo 3, alternando o papel de cera e sanduíches. 5 Após a última sanduíche, adicionar blocos espaçadores acrílico e folhas adicionais de policarbonato até toda a pilha é aproximadamente de 0,5 mm acima da borda da caixa. Fig 3. Construindo um Club Sandwich para lançar com placas divisórias. placa de vidro espaçador placa divisora dentada espaçador um club sandwich placa de vidro cera de papel ou policarbonato folha adicionais club sandwiches p8

12 Atenção! A acrilamida é uma neurotoxina. Usar luvas ao manusear acrilamida ou poliacrilamida. Use uma máscara contra poeira quando a pesagem acrilamida ou preparar ações de acrilamida. Derramando padrão géis homogêneos Tabela 3. Rodinhas de gel e volume necessário rodízio gel volume requerido fabricante de (ml) gradiente tamanho* SE SG500 SE SG100 ou SG500 *O tamanho real depende do volume calculado. 1 Preparar e desgaseificar solução de monómero suficiente para encher todos os sanduíches ao nível da placa dentada. A seguinte fórmula permite solução extra para preencher o espaço entre a sanduíche e da câmara de: Nota: O multiplicador 1,1 nesta fórmula assegura solução suficiente para preencher o volume morto. Monómero vol. = altura largura espaçador número total 1,1 (ml) (cm) (cm) espes. (cm) gel sandwiches N empilhamento de gel. Encha solução até um pouco abaixo do topo da placa de dentada. Se formar bolsas de ar, remover com uma pipeta ou uma seringa. Introduzir um pente, com uma ligeira inclinação, em cada sanduíche, tomando cuidado para não prender o ar sob os dentes. Empilhamento de gel. Encha solução a 4 cm abaixo da parte superior da placa de vidro rectangular. Esta altura permite 1 cm de empilhamento de gel abaixo da poços. Despeje o gel e aplicar uma sobreposição. Depois de o gel é definida, preparar o gel de empilhamento como descrito na página D electroforese. Encha solução a cerca de 1,0 cm abaixo da parte superior da placa de vidro rectangular. Esta altura permite 4 a 5 mm de espaço para a tira de IPG e um selo de agarose. Sobrepor o gel de separação, tal como descrito no passo 3. p9

13 Cuidado! Manias isobutanol ou nuvens nas paredes rodízio de acrílico, o que torna difícil ver os géis. 2 Adicionar iniciador e catalisador, e despejar a solução para as sanduíches de vidro a partir do topo. A solução flui de uma sanduíche para outra através da ranhura na parte inferior do rodízio e eleva-se para o mesmo nível em todas as sanduíches. Despeje lentamente para evitar transbordamento. 3 Depois de atingir o nível final, sobrepor cada sanduíche gel com 300 µl de água saturada de n-butanol ou tampão. Utilizar a mesma quantidade de sobreposição em cada sanduíche gel para assegurar que todos os geles de polimerizar para as mesmas alturas. Despeje o líquido suavemente, tomando cuidado para não perturbar a superfície do gel. Após a polimerização está completa, remover o n-butanol e substituí-la com tampão ou adicionar empilhamento de gel. Água saturada de n-butanol irá turvar peças de acrílico se utilizados em grandes quantidades, ou por longos períodos. 4 Permita que os géis para polimerizar pelo menos uma hora. Para remover os géis polimerizados, consulte Removendo géis polimerizados na página 16. Para adicionar um gel de empilhamento, ver derramar géis de empilhamento na página 15. p10

14 Derramando géis de gradiente padrão Ver Fig. 1, na página 4, para um diagrama dos componentes rodízio. Consulte Configurando o rodízio na página 5 para volumes de soluções recomendadas. Configurando o fabricante de gradiente 1 Preparar uma solução de deslocamento de 50% de glicerol contendo uma pequena quantidade de azul de bromofenol: aproximadamente 75 ml para o SE615 e 35 ml para o SE Calcular a quantidade de solução de gradiente, precisa, referindo-se a fórmula na página 9. Para unidimensionais géis: Utilizar um gel de separação de 12 cm com um gel de 4 cm de empilhamento. Para bidimensionais géis utilizando tiras IPG: Calcular a quantidade de solução necessária para encher as sanduíches de cerca de 0,5-1,0 cm abaixo do topo das placas. 3 Configure a bomba peristáltica. Usando um cilindro graduado e água, ajustar a taxa de fluxo de modo que o volume da solução de separação por gradiente de mais o volume da solução de glicerol será completamente entregue em minutos. 4 Escolha um fabricante de gradiente que contém não mais do que quatro vezes o volume total da solução de gradiente para ser derramado. Verifique se o fabricante de gradiente é limpa e que a saída e porto de mistura são livres de acrilamida polimerizada. p11

15 5 Monte os componentes do gradiente. (Ver Fig. 5.) A. Feche todas as válvulas fabricante de gradiente e colocar uma barra de agitação na câmara de mistura, o que tem a porta do conector do tubo. B. Anexar uma extremidade de um pedaço de tubo para a saída da máquina de gradiente. C. Executar a outra extremidade do tubo através da bomba peristáltica e fixá-la um ligador de tubagem. D. Usar uma segunda peça de tubagem para prender o ligador de tubagem para a porta de entrada de vermelho na parte inferior do rodízio. Fig 5. Gradiente de fazer as conexões do sistema. Câmara de mistura Câmara de mistura Rodízio gel múltipla Fabricante gradiente Bomba peristáltica Agitador magnético p12

16 Atenção! A acrilamida é uma neurotoxina. Usar luvas ao manusear acrilamida ou poliacrilamida. Use uma máscara contra poeira quando a pesagem acrilamida ou preparar ações de acrilamida. Derramando géis de separação de gradiente 1 Preparar e desgaseificar as duas soluções de monômero para a fabricante de gradiente. Adicionar glicerol ou sacarose para a solução de maior concentração de acrilamida para estabilizar o gradiente como a solução é bombeada pol diminuir a concentração de iniciador de polimerização de modo a que ocorre a partir de cima para baixo. Isto minimiza a mistura convectiva devido ao calor gerado pela polimerização. 2 Feche a porta a mistura e porta de saída, se for o caso, sobre o fabricante gradiente. Prenda a tubulação da tomada quando se utiliza o SG Adicionar iniciador e catalisador, e imediatamente despejar a solução de acrilamida de luz (baixa concentração) para dentro da câmara-a câmara de mistura com o orifício de saída. Abrir a válvula de mistura ligeiramente para permitir que o canal de ligação para encher e forçar a saída de bolhas de ar. Fechar a válvula de novo e despejar a solução de acrilamida pesado (alta concentração) para a câmara de reservatório. 4 Iniciar o agitador magnético e unclamp ou abrir a válvula de saída. Inicie a bomba e abrir a válvula de mistura. p13

17 Nota: nuvens Isobutanol o acrílico, o que torna difícil ver os géis. 5 Quando quase toda a solução de acrilamida é drenada a partir do fabricante de gradiente, parar a bomba e fechar a válvula de mistura. Incline a fabricante de gradiente para o lado de saída e remova os últimos mililitros de mistura. Não permitir quaisquer bolhas de ar a entrar no tubo. 6 Adicionar a solução de deslocamento de glicerol para a câmara de mistura e iniciar a bomba. Verifique se não há bolhas são introduzidos. Bomba até o fundo do rodízio é preenchido com uma solução de deslocamento para um pouco abaixo as placas de vidro, em seguida, desligar a bomba. Apertar do tubo para a porta de entrada de vermelho do rodízio. 7 Sobrepor cada sanduíche separado com 300 µl de água saturada de n-butanol ou tampão. Utilizar a mesma quantidade de sobreposição em cada gel para assegurar que todos os geles de polimerizar à mesma altura. Cuidadosamente e delicadamente pipetar o líquido, tomando cuidado para não perturbar a superfície do gel. Após a polimerização, remover o n-butanol. Substituao com tampão ou adicione um gel de empilhamento. 8 Permita que os géis para polimerizar pelo menos uma hora. Para remover os géis polimerizados, consulte Removendo géis polimerizados na página 16. Para adicionar um gel de empilhamento, ver Derramar géis de empilhamento na página 15. p14

18 Derramando géis de empilhamento Você pode adicionar empilhamento géis para todo o conjunto de géis polimerizados (homogêneo ou gradiente), enquanto os sanduíches ainda estão na caixa de fundição, ou você pode adicionar empilhamento gel para géis individuais imediatamente antes da utilização. Para melhor resolução, adicione o gel de empilhamento no último minuto para evitar a difusão de amortecedores entre as duas camadas de gel. 1 Se você está derramando géis de empilhamento mais tarde, pule para o passo 1 em Remover géis polimerizados na página 16. Se estiver vertendo géis de empilhamento agora, calcular o volume de solução de gel de empilhamento monómero necessário, referindo-se a seguinte fórmula: Monómero vol. = altura largura espessura número total 1,1 (ml) (cm) (cm) (cm) empilhamento géis Onde: Altura é a distância entre o gel de separação ea parte superior das placas. Largura é a distância entre os espaçadores. 2 Enxaguar a água saturada de sobreposição de n-butanol, com água destilada ou tampão Tris e inverter o rodízio para drenar-lo. Repita 2-3 vezes. 3 Desgaseificar a solução de monómero de empilhamento gel e adicionar catalisador e iniciador. p15

19 Nota: Oxygen inibe a polimerização de gel. Não prender as bolhas de ar debaixo dos dentes do pente. Nota: Use géis com empilhamento géis imediatamente. Não guarde. 4 Substituir o rodízio em posição vertical. Assegure-se a superfície do gel de separação é livre de líquido. Usar uma pipeta para encher cada sanduíche individualmente com empilhamento de gel de solução de monómero. 5 Segurar um pente, ligado a um pente para trás, em um ângulo de 45 e centrado no interior da sanduíche. Inserir uma extremidade no gel de modo que o dente final é quase completamente inserido. Lentamente baixar os dentes restantes pente em um por um, girando o pente gradualmente para baixo até que se encontra em posição horizontal. Consulte a Figura 1 na página 4 para a posição final do pente. Repita esse procedimento para cada sanduíche. 6 Permitir que os géis de empilhamento para polimerizar pelo menos uma hora. Para remover os géis polimerizados, consulte Removendo géis polimerizados abaixo. Removendo géis polimerizados 1 Depois de os géis foram polimerizados, coloque o rodízio em posição horizontal. Se você derramou géis de empilhamento, deixe os pentes no lugar. Remova o painel frontal. 2 Dica do rodízio para deitar fora a solução de glicerol. 3 Deslize a pilha de sanduíches, blocos de acrílico, policarbonato e folhas de fora do rodízio. Remover os blocos acrílicos e folhas de policarbonato a partir do topo da pilha. p16

20 4 Nota: O tampão de SDS faz com que as placas de vidro escorregadia. Nota: Não use espátulas de metal para separar os sanduíches. Espátulas metálicos estreitos frequentemente lascar as bordas de placas de vidro, fazendo a placa de ineficaz para a vedação para dentro do tanque de electroforese. Nota: Separa-se as sanduíches de um outro antes da colocação dos géis no frigorífico. Cuidadosamente remover vidro individual e sanduíches de gel a partir da pilha. Se necessário, inserir um Wedge Maravilha entre sanduíches adjacentes para separá-los. Trabalhe lentamente e com cautela quando erguer além sanduíches adjacentes após a polimerização. 5 Lavar o rodízio e chapas de policarbonato, conforme descrito em Cuidados e manutenção na página 20. Para armazenar os géis para uso futuro Lavar os sanduíches individuais com água destilada. Encha as cassetes com tampão de gel de armazenamento. Enrole sanduíches gel você não está usando neste momento, em filme plástico e guarde-os na geladeira. Para usar géis imediatamente 1 Remover suavemente os pentes, puxando-as para cima e para fora da sanduíche de gel. 2 Encha as cavidades com tampão SDS electroforese. 3 Carregar amostras e montagem completa. Consulte os manuais que vêm com o SE600 SE400 ou sistemas de eletroforese da Série. p17

21 Solução de problemas sintoma causa possível ação recomendada 1. Géis aderir a placas de vidro durante a abertura sanduíche. 2. Géis lançados simultaneamente são de tamanhos diferentes. 3. Vazamentos de rodízio. 4. Gel alturas desiguais. 5. Poços de amostra danificada ou vazamento. 6. Sanduíches de gel difíceis de separar. 7. Irregulares géis de gradiente. Graxa, sujeira ou impressões digitais em placas. Diferentes quantidades de sobreposição foram utilizados nos géis de separação antes da polimerização. Vazamentos de junta. Junta danificada. Pilha muito alto. Bubbles preso sob sanduíches gel. Polimerizada gel na ranhura. Tempo suficiente para os níveis de gel para estabilizar. As bolhas de ar sob os dentes do pente. Polimerização insuficiente. Pente removidas também abruptamente. Polimerização pobres. No papel de cera entre as placas de vidro. Estratificação irregular. Embeber placas em um detergente de laboratório forte; lavar bem com água destilada. Manusear com luvas somente. Use a mesma quantidade de cobertura em todos os géis de separação. Adicionar a sobreposição tão rapidamente quanto possível. Aplique uma fina camada de Gel Seal para a junta de cada vez que o aparelho é utilizado. Verifique a junta de espuma para nicks ou desgaste e substitua se necessário. Remover as placas de enchimento ou sanduíches de gel até que o topo da pilha é apenas abaixo do nível da parede do rodízio. Verter a solução de monómero em uma sanduíche e permitir que a ranhura na ficha para distribuir uniformemente a solução. Certifique-se que a ranhura na ficha triangular é limpo e livre de material. Espere um minuto antes da sobreposição dos géis. Adicionar a mesma quantidade de sobreposição para cada sanduíche. Remover bolsas de ar antes de inserir pentes. Deslize pente em solução em ângulo. Se pente deve ser removida, adicione mais solução de monômero antes de reinserir o pente. Permitir que o gel para definir para um mínimo de 1 hora. Lentamente, retire o pente em um pequeno ângulo para evitar danos ao gel. Degas empilhamento solução de gel. Aumentar catalisadores até 0,1% v/v TEMED, 0,1% v/v APS. Coloque papel de cera entre sanduíches na pilha. Adicionar sacarose ou glicerol para a solução de monómero pesado. Adicionar uma pequena quantidade de azul de bromofenol para a solução pesado para controlar a formação de gradiente. Diminuir a taxa de bomba. p18

22 sintoma causa possível ação recomendada 8. N polimerização de SDS-gel (ou polimerização incompleta.) 9. Gel muito mole. 10. Gel é quebradiço. 11. Gel é branco. 12. Gel contém redemoinhos, artefatos de polimerização. 13. Bandas são difusas ou alargada. 14. Mobilidades de proteínas não consistente. 15. Fundo pesado durante a coloração de prata. APS insuficiente ou TEMED. Pilha APS está molhado. O 2 em solução de gel. Soluções a baixa temperatura. TEMED é antiga. Não é o suficiente reticulador. Too muito bis. Too muito bis. Catalisador demais: gel polimerizado em <10 min. Não catalisador suficiente: gel polimerizado em >50 min. Soluções não misturado. Amostra não contém mesmo tampão como um empilhamento de gel. Demasiada Temed ou APS. Tampão SDS ou amostra é antiga. Interface de pobre entre o gel de separação e de gel de empilhamento. Polimerização incomp. Géis envelhecidos ou acrilamida. Gás em gel. Acrilamida ou bis contêm ácido acrílico. A água é impura. Aumentar a APS e Temed por 30-50%. Solução APS é antiga. Maquiagem APS fresco todos os dias. APS é higroscópico. Abra uma nova garrafa. Degas pelo menos 10 minutos. Assegure-se todas as soluções são, à temperatura ambiente (20-30 C). Use o novo TEMED. Reticulador deve ser C 2,6% para géis de SDSpadrão onde g bis %C = 100 (g monomer + g bis) Veja # 9 acima. Verificar as concentrações de soluções. Veja # 9 acima. Reduzir tanto a APS e Temed em 25%. Aumentar a APS e Temed em 50%. Também veja o item 8. Misturar bem após a adição de Temed. Use o mesmo tampão para a amostra, tal como para o gel de empilhamento. Reduzir as concentrações de 25%. Utilizar soluções frescas. Remover todo o líquido a partir da superfície do gel de separação antes de adicionar as soluções de gel de empilhamento. Veja # 8. Não guarde acrilamida líquido de mais de 3 meses. Use géis dentro de 1-2 semanas de casting. Use géis com empilhadores imediatamente. Degas gel soluções, pelo menos, 10 minutos. Use reagentes especificados como pureza eletroforese. Use apenas água bidestilada. p19

23 Cuidados e manutenção Não autoclave ou aquecer qualquer parte acima de 45 C. Não exponha o rodízio ou suas partes a solventes orgânicos. Limpeza Lavar o rodízio, do painel de plugs de silicone e folhas de policarbonato em detergente diluído e enxágüe com água destilada. Deixe o aparelho secar ao ar completamente. p20

24 Apêndice A: números de identificação Gel Para a identificação positiva de géis, etiquetar cada laje através da incorporação de uma pequena etiqueta impressa em papel de filtro fino no canto inferior do gel. Use uma máquina de escrever fita de carbono, fotocopiadora ou impressora a laser para fazer esses rótulos, pois muitos líquidos são tintas à base de eletroforese off papel durante uma corrida de eletroforese SDS. Uma variedade de sistemas de numeração são possíveis. Na nossa experiência o mais fácil utiliza três partes, como se segue: Uma carta maiúsculas para identificar o investigador ou um gel série estendida. A dois ou três dígitos do número de série para identificar o lote gel laje. Uma carta minúsculas para identificar um gel no lote. Uma vez que um máximo de 14 géis podem ser feitos por um lote, utilizar as letras A-N. Os números resultantes, no formato A63a, A63b, etc, fornecer um sistema útil para o acompanhamento ea indexação cruzada experimentos e produção de gel. Apêndice B: Referências Laemmli, U.K Nature (London) 227: SDS-PAGE and IEF Handbook. p21

25 Informações sobre pedidos produto quantidade código SE615 Kit Caster múltipla Gel, 10 géis 1 SE615 Inclui, 20 placas de vidro, o espaço-saver placa, 5 folhas de preenchimento, 100 folhas de papel de cera, e Spacer-Mate modelo de alinhamento. (Ordem pentes e espaçadores separadamente.) SE675 Kit Caster múltipla Gel, 4 géis 1 SE675 Inclui, 8 placas de vidro, 3 espaço saver-chapas, 5 folhas de preenchimento, 100 folhas de papel de cera, e Spacer-Mate modelo de alinhamento e fichas de preenchimento. (Ordem pentes e espaçadores separadamente.) Junta de espuma do cordão umbilical, 61 cm 4,5 mm 1 SE208 Red entrada de porta 4 XP010 Red grampos de mola 4 SE253 Placas de vidro de cm 2 SE6102 Placas entalhadas divisórias de vidro, cm 1 SE6102D Bloco de acrílico, 11 mm de espessura, cm 1 SE612 Chapas de policarbonato de enchimento 5 SE613 Papel de cera, folhas pré-cortadas, cm 100 SE614 Spacer-Mate modelo para o alinhamento de espaçadores 3 SE6119SM Nylon parafusos 12 SE6003U-2 Silicone bujão de enchimento, SE615 1 SE618 Silicone conjunto do bujão de enchimento, SE675. Inclui 1 ficha grande e 1 pequeno. 1 SE678 Gel Seal, oz ¼. tubo 1 SE6070 Produtos SE 100 PlateMate, máquina de lavar prato e unidade de armazenamento 1 SE100 SG100 Criador Gradiente, 100 ml volume total 1 SG100 SG500 Criador Gradiente, 500 ml volume total 1 SG500 Wonder Wedge 1 SE1514 Espaçadores comprimento (cm) espessura (mm) largura (cm) 16 0, SE ,0 2 2 SE ,5 2 2 SE ,0 1 2 SE ,5 1 2 SE p22

26 Pente número espessura largura de poços (mm) (mm) quantidade código 10 0,75 8,3 1 SE ,00 8,3 1 SE ,50 8,3 1 SE ,75 7,6 1 SE ,00 7,6 1 SE ,50 7,6 1 SE ,75 5,7 1 SE ,00 5,7 1 SE ,50 5,7 1 SE ,75 4,1 1 SE ,00 4,1 1 SE ,50 4,1 1 SE a 0,75 2,7 1 SE a 1,00 2,7 1 SE a 1,50 2,7 1 SE a Pente profundidade de 15 mm; todos os outros 25 mm. Preparativa pentes Estes pentes são de 25 mm de profundidade, ajustável a 10 ou 15 mm. número poços espessura largura (mm) prep/ref (mm) prep/ref quantidade código 1/1 0,75 121/6 1 SE511-R-.75 1/1 1,00 121/6 1 SE511-R-1.0 1/1 1,50 121/6 1 SE511-R-1.5 1/2 0,75 113/6 1 SE511-DR-.75 1/2 1,00 113/6 1 SE511-DR-1.0 1/2 1,50 113/6 1 SE511-DR-1.5 Volta pente ajustável 1 SE511-BKA Necessária para converter qualquer pente 25-mm de profundidade para 10 ou 15 mm de profundidade. p23

27 Hoefer, Inc. 84 October Hill Road Holliston, MA Toll Free: Telefone: Fax: Web: Hoefer é uma marca registrada da Hoefer, Inc Hoefer, Inc. Todos os direitos reservados. Impresso nos USA.