Manual do ensaio ADVIA Centaur HBc Total 1 / 14

Manual do ensaio ADVIA Centaur HBc Total 1 / 14 HBc Total (HBcT) Ensaio para a detecção de anticorpos totais para o antígeno central da hepatite B 0088 Resumo do ensaio Conteúdo Tipo de amostra Soro, plasma com EDTA Volume da amostra 50 µl Calibrador HBcT Sensibilidade e limite do ensaio Índice 0,07 8,00 REF Conteúdo 07566733 1 embalagem de reagente primário ReadyPack contendo ADVIA Centaur HBcT Reagente fluorescente, Fase sólida e Reagente caotrópico 1 embalagem auxiliar com reagente auxiliar HBcT ADVIA Centaur Cartão de curva principal HBcT ADVIA Centaur 1 frasco de calibrador baixo HBcT 1 frasco de calibrador alto HBcT Cartão de valor atribuído ao calibrador HBcT ADVIA Centaur Número de testes 200 Aplicação Para a definição dos símbolos utilizados nos rótulos dos produtos, por favor consulte Para entender os símbolos no Anexo D. O ensaio HBc Total ADVIA Centaur é um teste de diagnóstico in vitro para a determinação qualitativa de anticorpos totais para o antígeno central do vírus da hepatite B (HBc Total) no soro humano ou plasma com EDTA através do Sistema ADVIA Centaur. Este ensaio pode ser utilizado como um meio auxiliar para o diagnóstico de indivíduos com o vírus da hepatite B aguda ou crónica (VHB) e na determinação do estado clínico de indivíduos infectados pelo VHB em conjunto com outros marcadores serológicos do VHB associada à infecção pelo VHB. Este ensaio também pode ser utilizado como um meio auxiliar no diagnóstico diferencial em indivíduos que apresentem sinais e sintomas de hepatite cuja etiologia é desconhecida. Materiais necessários mas não fornecidos REF Descrição Conteúdo 07569996 Material de controlo de qualidade do ensaio HBcT ADVIA Centaur Controlo negativo de 2 x 7,0 ml Controlo positivo de 2 x 7,0 ml Cartão do valor previsto 01137199 (112351) Líquido de lavagem 1 ADVIA Centaur 2 x 1500 ml/embalagem 07702998 Rev. F, 2006-05 HBcT

HBc Total 2 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Resumo e explicação do teste O ensaio ADVIA Centaur HBc Total é um imunoensaio quimioluminométrico de micropartículas de ligação cruzada de antígenos utilizado para a detecção de anticorpos para o antígeno central da hepatite B no soro ou plasma humano. O vírus da hepatite B (VHB) é endémico em todo o mundo e é a principal causa de doença no fígado. O VHB transmite-se através do contacto directo com o sangue ou fluídos corporais. As principais formas de transmissão incluem transfusões de sangue, troca de agulhas, contacto directo com ferimentos e exposição perinatal durante o parto. 1,2 O período de incubação médio da infecção provocada pelo VHB é de 6 a 8 semanas (intervalo entre 1 a 6 meses). Os sintomas clínicos comuns incluem mal-estar, febre, gastroenterite e icterícia. A infecção pelo VHB pode resultar em hapatite ictérica típica, hepatite anactérica subclínica, hepatite fulminante ou hepatite crónica ou persistente. Nos adultos, 90 a 95% dos doentes com infecção pelo VHB recuperam completamente da doença aguda e o vírus desaparece. Aproximadamente 5 a 10% dos doentes com VHB tornam-me portadores crónicos. Nos recém-nascidos infectados pelo VHB, aproximadamente 90% desenvolvem hepatite B crónica. Estima-se que mais de 300 milhões de pessoas em todo o mundo sejam portadoras crónicas do vírus. A infecção pelo VHB, especialmente em casos de infecção crónica, está claramente associada ao desenvolvimento do carcinoma hepatocelular. 1,2,3 O antígeno central da hepatite B (HBcAg), encontrado em células hepáticas, não circula no sistema vascular. Contudo, os anticorpos IgM e IgG para o HBcAg podem ser detectados serologicamente em indivíduos infectados pelo VHB. O Anti-HBc IgM é detectável primeiro e permanece detectável durante aproximadamente seis meses. Pouco tempo após a resposta do IgM, o anti-hbc IgG aparece e pode permanecer detectável indefinidamente. A presença do anti-hbc IgM é característica da infecção aguda, enquanto que a presença do anti-hbc IgG é característica de estados crónicos ou de recuperação da infecção pelo VHB. Os ensaios Anti- HBc Total detectam as respostas do IgM e do IgG anti-hbc. Frequentemente os níveis de anti- HBc irão coincidir com os níveis detectáveis de outros marcadores do VHB. Raramente, o anti- HBc pode constituir o único marcador do VHB detectável. Isto pode ocorrer durante um curto período em que o antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) foi eliminado do sistema vascular e por isso os anticorpos para o antígeno de superfície da hepatite B (anti-hbs) tornaram-se detectáveis. Por este motivo, não se recomenda a utilização de ensaios anti-hbc Total para detectar infecções agudas. Os ensaios anti-hbc Total devem ser utilizados em conjunto com outros ensaios de marcadores para avaliar a exposição actual ou anterior ao VHB. 1,2,4,5 Princípio do ensaio O ensaio HBc Total ADVIA Centaur é um imunoensaio do tipo sanduíche com duplo antígeno através do qual os antígenos são ligados pelo anticorpo presente na amostra do doente. A fase sólida contém um complexo pré-formado de micropartículas paramagnéticas revestidas com streptadivina e antígeno HBc recombinante biotinilado e é utilizada para capturar anti-hbc na amostra do doente. O reagente fluorescente contém antígeno HBc recombinante marcado com ester de acridino e é utilizado para detectar anti-hbc na amostra. A fase sólida e o reagente caotrópico são adicionados à amostra, seguidos do reagente auxiliar e do reagente fluorescente. Os complexos anticorpo-antígeno formar-se-ão se os anticorpos anti-hbc (IgM e IgG) estiverem presentes na amostra. O sistema efectua automaticamente os seguintes passos: distribui 50 µl de amostra numa cubeta e incuba durante 6 minutos a 37 C distribui 125 µl de fase sólida e incuba durante 18 minutos a 37 C distribui 30 µl de reagente caotrópico (NOTA: A cor do reagente caotrópico varia entre o incolor e o rosa.) HBcT 07702998 Rev. F, 2006-05

Manual do ensaio ADVIA Centaur HBc Total 3 / 14 lava a cubeta com o líquido de lavagem 1 distribui 100 µl de reagente auxiliar e incuba a mistura durante 5,75 minutos a 37 C distribui 50 µl de reagente fluorescente e incuba a mistura durante 18 minutos a 37 C separa a fase sólida da mistura e aspira o reagente não ligado lava a cubeta com o líquido de lavagem 1 distribui 300 µl de reagente ácido e de reagente básico para iniciar a reacção quimioluminescente comunica os resultados de acordo com a opção seleccionada, conforme descrito nas instruções de funcionamento ou no sistema de ajuda online Existe uma relação directa entre o nível de anticorpos anti-hbc encontrados na amostra do doente e a quantidade de unidades de luz relativa (ULRs) detectada pelo sistema. É determinado um resultado positivo ou negativo de acordo com o nível de índice estabelecido com os calibradores. Consulte Interpretação de Resultados para uma descrição do cálculo do valor de "cutoff". Recolha e manuseamento da amostra O soro ou o plasma com EDTA são os tipos de amostra recomendados para este ensaio. Não utilize amostras com contaminação microbiana óbvia. Os Valores de Índice de amostras reactivas anti-hbc recolhidas em tubos de colheita com barreira de gel de heparina de lítio podem ser reduzidos ou tornarem-se não-reactivos se estes tubos forem invertidos antes da análise. Para evitar resultados erróneos, as amostras devem ser novamente centrifugadas antes da análise. O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras inactivadas por calor, ou outros fluídos corporais para além do soro e do plasma tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluídos pleurais. As recomendações gerais que se seguem para o manuseamento e armazenamento de amostras de sangue são fornecidas pelo Clinical and Laboratory Standards Institute 6 (CLSI) e completadas com estudos adicionais sobre o manuseamento de amostras com a utilização do ensaio ADVIA Centaur HBc Total: Manuseie todas as amostras como potenciais transmissores de doenças. As amostras são processadas através da centrifugação, normalmente seguida por uma separação física do soro ou plasma dos eritrócitos. A etapa de centrifigação pode ocorrer até 24 horas após a colheita. Ao testar 10 amostras nas quais a etapa de centrifugação variou até 24 horas após a colheita, não foram observadas diferenças clínicas significativas. Analise as amostras o mais rapidamente possível após a sua recolha. Armazene as amostras entre 2 a 8 C se não forem imediatamente analisadas. Armazene sempre as amostras vedadas e na vertical entre 2 e 8 C e até um máximo de 7 dias em tubos secundários. Armazene os tubos de amostras primários entre 2 to 8 C até 7 dias. Mantenha sempre as amostras vedadas e na vertical. As amostras do tubo primário incluem soro armazenado coagulado, plasma armazenado em glóbulos vermelhos empacotados e amostras processadas e armazenadas em tubos de recolha de amostras com barreira de gel. Ao testar 10 amostras que permaneceram nestes tubos primários até 7 dias, não foram observadas diferenças clínicas significativas. 07702998 Rev. F, 2006-05 HBcT

HBc Total 4 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Reagentes Para um período de armazenamento mais longo, congele as amostras, destituídas dos eritrócitos, a uma temperatura de -20 C ou inferior. Não guarde as amostras num frigorífico com descongelamento automático. Após terem sido submetidas 10 amostras a 2 ciclos de congelamento/descongelamento, não foram observadas quaisquer diferenças clínicas significativas. Misture bem e centrifugue as amostras descongeladas antes de as utilizar. Embale e coloque as etiquetas nas amostras para envio de acordo com os regulamentos federais e internacionais aplicáveis respeitantes ao transporte de amostras clínicas e agentes etiológicos. As amostras mantidas à temperatura ambiente durante 12 horas ou arrefecidas durante 7 dias não demonstraram diferenças qualitativas. Armazene as amostras vedadas e na vertical entre 2 a 8 C após a sua chegada. Se o período de envio ultrapassar os 7 dias, envie as amostras congeladas. Antes de colocar as amostras no sistema, verifique o seguinte: As amostras não contêm fibrina ou outras partículas. Remova as partículas através da centrifugação. As amostras não contêm bolhas ou espuma. Armazene os reagentes na posição vertical, a uma temperatura entre 2 e 8 C. Agite manualmente todas as embalagens de reagentes primários antes de as colocar no sistema. Inspeccione visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se certificar de que todas as partículas estão dispersas e em suspenção. Para obter informações detalhadas sobre a preparação dos reagentes, consulte o Apêndice C, Manuseamento de Reagentes. Proteja da luz solar Proteja as embalagens dos reagentes de todas as fontes de luz. As embalagens dos reagentes carregados no sistema encontram-se protegidas da luz. Armazene as embalagens de reagentes não utilizadas a 2 e 8 C num local afastado de fontes de luz. Embalagem de reagente Reagente Volume Ingredientes Embalagem de reagentes primários ReadyPack do ADVIA Centaur HBcT Embalagem de reagentes auxiliares ReadyPack do ADVIA Centaur HBcT Reagente fluorescente Fase sólida Reagente caotrópico* Reagente auxiliar 10,0 ml/ embalagem de reagente 25,0 ml/ embalagem de reagente 6,0 ml/ embalagem de reagente 25,0 ml/ embalagem de reagente antígeno central da hepatite B recombinante (~ 0,2 µg/ml) marcado com ester de acridino tamponizado com tensioactivo e conservantes Armazenamento Estabilidade 2 8 C micropartículas paramagnéticas 2 8 C revestidas com streptadivina préformada com HBcAg recombinante biotinilado (~ 0,2 µg/ml) tamponadas com tiocianato de potássio (5,0%), albumina de sangue bovino, surfactante e azida sódica (< 0,1%) tampão com tiocianato de 2 8 C potássio (40%) e tensioactivo tampão com tiocianato de potássio (5,0%) e tensioactivo 2 8 C até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. HBcT 07702998 Rev. F, 2006-05

Manual do ensaio ADVIA Centaur HBc Total 5 / 14 Embalagem de reagente Reagente Volume Ingredientes Frascos do calibrador HBcT qualidade HBcT frascos de material de controlo * A cor do reagente caotrópico varia entre o incolor e o rosa. Consulte Materiais necessários mas não fornecidos NOTA: A azida sódica pode reagir com o cobre e o chumbo existentes nas canalizações, formando azidas metálicas explosivas. Quando eliminar os reagentes, utilize água em abundância, para evitar a acumulação de azidas. Certifique-se primeiro de que a eliminação destes materiais através da rede de esgotos cumpre a legislação em vigor. Para utilizar no diagnóstico In Vitro. Carregar os reagentes Calibradores 2,0 ml/ frasco Controlos ADVIA Centaur 1 Líquido de lavagem 1 R22, R32 S14, S28 R43 S24, S37 7,0 ml/ frasco plasma humano processado 2 8 C positivo para os anticorpos HBc, albumina de soro humano e conservantes plasma humano processado 2 8 C negativo e positivo para o anti-hbc com conservantes salina tamponada de fosfato com azida sódica (< 0,1%) e tensioactivo 1500 ml/ embalagem Armazenamento Estabilidade 2 25 C até à data de validade do frasco ou utilização 8 horas até à data de validade do frasco ou utilização 8 horas até à data de validade do frasco ou utilização 14 dias Nocivo! Nocivo por ingestão. Em contacto com ácidos liberta gases muito tóxicos. Manter afastado de ácidos. Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com sabão e água. Contém: tiocianato de potássio; reagente caotrópico, reagente auxiliar Irritante! Pode causar sensibilização se em contacto com a pele. Evitar o contacto com a pele. Usar luvas adequadas. Contém: 5-cloro-2-metil-2H-isotiazol-3-ona e 2-metil-2H-isotiazol-3-ona; Controlos PRECAUÇÃO! POTENCIAIS RISCOS BIOLÓGICOS: Alguns componentes deste produto contêm material de origem humana. Não existe qualquer método de ensaio conhecido que ofereça a segurança total de que os derivados do sangue humano não transmitam agentes infecciosos. Todos os produtos fabricados a partir de material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos. Manuseie este produto de acordo com as boas práticas de laboratório e com as precauções universais. 7-9 O controlo negativo foi ensaiado através de métodos aprovados pela FDA e considerados não reactivos para o antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg), anticorpo da hepatite C (VHC) e anticorpo do HIV-1/2. O controlo positivo e os calibradores contêm plasma humano que pode ser reactivo para o HBsAg. As unidades foram tratadas com um procedimento de inactivação de beta-propiolactona - raios ultra-violeta, contudo, todos os produtos fabricados com o uso de material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infectantes. Certifique-se de que o sistema contém embalagens suficientes de reagentes primários e auxiliares. Para obter informações mais detalhadas sobre a preparação do sistema, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. Agite manualmente todas as embalagens de reagentes primários antes de as colocar no sistema. Inspeccione visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se certificar de que todas as partículas estão dispersas e em suspensão. Para obter informações detalhadas sobre a preparação dos reagentes, consulte o Apêndice C, Manuseamento de Reagentes. Carregue as embalagens de reagentes primários ReadyPack nos compartimentos dos reagentes primários e utilize as setas das embalagens para as colocar correctamente. O sistema mistura automaticamente as embalagens dos reagentes primários para manter uma suspensão homogénea dos reagentes. Carregue as embalagens dos reagentes auxiliares ReadyPack na entrada do reagente auxiliar. Para informações detalhadas sobre como carregar os reagentes, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. 07702998 Rev. F, 2006-05 HBcT

HBc Total 6 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur NOTA: Os calibradores baixo e alto fornecidos neste kit são combinados com a embalagem de reagentes primários ReadyPack. Não misture lotes de calibradores com lotes diferentes de embalagens de reagentes. NOTA: O reagente auxiliar fornecido neste kit é combinado com a fase sólida e com o reagente fluorescente. Não misture os lotes de reagente auxiliar com lotes diferentes de fase sólida e de reagente fluorescente. Estabilidade de utilização e intervalo de calibração Adicionalmente, o ensaio ADVIA Centaur HBc Total requer uma calibração de dois pontos: ao alterar os números de lote das embalagens dos reagentes primários quando substituir os componentes do sistema quando os resultados do controlo de qualidade se encontram repetidamente fora dos limites NOTA: Elimine as embalagens dos reagentes no final do intervalo de estabilidade de utilização. Não utilize os reagentes para além da data de validade. Calibração da curva principal Calibração Estabilidade de utilização Intervalo de calibração 28 dias 14 dias O ensaio HBc Total ADVIA Centaur requer uma calibração da curva principal ao utilizar um novo número de lote do reagente fluorescente, fase sólida e reagente caotrópico. Para cada novo lote de reagente fluorescente, fase sólida e reagente caotrópico, utilize o leitor de código de barras ou o teclado para introduzir os valores da curva principal no sistema. O cartão da curva principal contém os valores da curva principal. Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores de calibração, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. Para a calibração do ensaio HBc Total ADVIA Centaur, utilize os calibradores HBc Total ADVIA Centaur fornecidos com cada kit. Os calibradores fornecidos com este kit são combinados com a embalagem de reagentes primários ReadyPack. Utilização das etiquetas de código de barras NOTA: As etiquetas de código de barras são específicas do número do lote. Não utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de calibradores com qualquer outro lote de calibradores. Utilize as etiquetas de código de barras dos calibradores HBc Total ADVIA Centaur para identificar os copos das amostras do calibrador baixo e do alto ao executar o ensaio HBc Total ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no copo da amostra de forma a que os caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no copo da amostra. Efectuar uma calibração Cada lote de calibradores contém um cartão de valor atribuído ao calibrador para facilitar a introdução dos valores de calibração no sistema. Introduza os valores utilizando um leitor de código de barras ou o teclado. Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores do calibrador, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. NOTA: Este procedimento utiliza volumes do calibrador suficientes para medir cada calibrador em duplicado. HBcT 07702998 Rev. F, 2006-05

Manual do ensaio ADVIA Centaur HBc Total 7 / 14 1. Introduza os calibradores na lista de trabalho. 2. Coloque etiquetas de código de barras dos calibradores em dois copos de amostra: uma para o baixo e outra para o alto. NOTA: Cada gota do frasco do calibrador tem aproximadamente 50 µl. 3. Misture suavemente os calibradores baixo e alto e distribua pelo menos 4 a 5 gotas nos copos de amostra adequados. 4. Carregue os copos de amostra num rack. 5. Coloque o rack na fila de entrada das amostras. 6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados. 7. Inicie a fila de entrada, se necessário. NOTA: Elimine qualquer quantidade de calibrador que permaneça nos copos das amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os copos das amostras quando o conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua calibradores novos. Controlo de qualidade Para o controlo de qualidade do ensaio HBc Total ADVIA Centaur, utilize os materiais de controlo de qualidade HBc Total ADVIA Centaur. Consulte o cartão de valor previsto para os valores esperados sugeridos, específicos para o número de lote dos controlos positivo e negativo. Utilização das etiquetas de código de barras NOTA: As etiquetas de código de barras dos controlos são específicas do número do lote. Não utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de controlos com qualquer outro lote de controlos. Utilize as etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade HBc Total ADVIA Centaur para identificar os copos das amostras positivas e negativas ao executar o ensaio HBc Total ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no copo da amostra de forma a que os caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no copo da amostra. Efectuar um controlo de qualidade Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores do controlo de qualidade, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. Para monitorizar o desempenho do sistema e as tendências do gráfico, como requisito mínimo, as amostras de controlo de qualidade devem ser ensaiadas em cada turno em que as amostras foram analisadas. As amostras de controlo de qualidade também devem ser ensaiadas ao efectuar uma calibração de dois pontos. Manuseie as amostras de controlo de qualidade da mesma forma que as amostras de doentes. NOTA: Este procedimento utiliza volumes do controlo suficientes para medir cada controlo em duplicado. 1. Introduza as amostras de controlo de qualidade na lista de trabalho. 2. Coloque etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade em dois copos de amostra: uma para o positivo e outra para o negativo. NOTA: Cada gota do frasco do controlo tem aproximadamente 50 µl. 3. Misture suavemente os materiais de controlo de qualidade e distribua pelo menos 5 a 6 gotas nos copos de amostra adequados. 4. Carregue os copos de amostra num rack. 07702998 Rev. F, 2006-05 HBcT

HBc Total 8 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur 5. Coloque o rack na fila de entrada das amostras. 6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados. 7. Inicie a fila de entrada, se necessário. NOTA: Elimine quaisquer materiais de controlo da qualidade que permaneçam nos copos das amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os copos das amostras quando o conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua materiais de controlo de qualidade novos. Efectuar uma acção correctiva Se os resultados do controlo de qualidade não coincidirem com os valores esperados ou com os valores estabelecidos pelo laboratório, faça o seguinte: considere os resultados da amostra inválidos e repita os testes dos controlos que não se encontrem dentro dos limites reveja estas instruções para se certificar de que este ensaio foi efectuado de acordo com os procedimentos recomendados pela Bayer HealthCare verifique se os materiais se encontram dentro da validade verifique se a manutenção necessária foi efectuada se necessário, contacte a Bayer HealthCare para mais assistência Volume da amostra Este ensaio requer 50 µl de amostra para uma única determinação. Este volume não inclui o volume não utilizável no recipiente da amostra ou o volume adicional necessário ao efectuar duplicados ou outros testes na mesma amostra. Para informações detalhadas sobre o volume mínimo necessário, consulte Requisitos do volume da amostra no Manual de referência ADVIA Centaur. Procedimento do ensaio Para informações detalhadas sobre os procedimentos, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. PRECAUÇÃO: Não carregue mais do que um tamanho do recipiente da amostra em cada rack. O indicador do rack deve estar colocado no posicionamento correcto para o tamanho do recipiente da amostra. 1. Prepare o recipiente da amostra para cada amostra e coloque etiquetas de códigos de barras nos recipientes das amostras, como necessário. 2. Carregue cada recipiente da amostra num rack e certifique-se de que as etiquetas do código de barras estão visíveis. 3. Coloque os racks na fila de entrada. 4. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados. 5. Inicie a fila de entrada, se necessário. Notas sobre procedimentos Eliminação A eliminação de material perigoso ou biologicamente contaminado deve ser efectuada de acordo com as práticas da sua instituição. Elimine todos os materiais de uma forma segura e aceitável e em conformidade com todos os regulamentos federais, estatais e locais. HBcT 07702998 Rev. F, 2006-05

Manual do ensaio ADVIA Centaur HBc Total 9 / 14 Interpretação dos resultados Limitações Para obter informações detalhadas sobre a forma como o sistema calcula os resultados, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. O sistema comunica os resultados anti-hbc Total em valores de índice e como sendo reactivos ou não reactivos. As amostras com um valor calculado com um valor de índice inferior a 0,50 são consideradas não reactivas para os anticorpos totais para o antígeno central da hepatite B. As amostras com um valor calculado superior ou igual ao valor de índice 0,50 são consideradas reactivas para os anticorpos totais para o antígeno central da hepatite B. O "cutoff" para o ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi verificado com base nos resultados da curva característica receptor-operador (ROC) 10 e no acordo clínico gerado a partir de estudos clínicos. Os resultados das amostras são inválidos e têm de ser repetidos se os controlos estiverem fora dos limites. O ensaio HBc Total ADVIA Centaur é limitado para a detecção de anticorpos totais para o antígeno central da hepatite B no soro humano ou plasma com EDTA. Os ensaios para a detecção do anti-hbc podem não identificar todas as amostras de doentes que contêm vírus da hepatite B ou unidades de sangue potencialmente infectantes e podem gerar resultados reactivos falsos. As características de desempenho do ensaio não foram estabelecidas quando o ensaio HBc Total ADVIA Centaur é utilizado em conjunto com ensaios de outros fabricantes para os marcadores serológicos específicos do VHB. As características de desempenho do ensaio não foram estabelecidas para a utilização do ensaio HBc Total ADVIA Centaur como um meio auxiliar na determinação da susceptibilidade à infecção pelo VHB antes ou após a vacinação de bebés, crianças ou adolescentes. O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras inactivadas por calor, ou outros fluídos corporais para além do soro e do plasma, tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluídos pleurais. O desempenho do ensaio não foi estabelecido para populações de doentes hospedeiros imunodeprimidos ou imunodeficientes. Não utilize amostras com contaminação microbiana óbvia. Resultados esperados Numa população de 4945 dadores de sangue, o número de amostras consideradas reactivas (Valor de índice 0,50) para o anti-hbc através da utilização do ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi 21 (0,42%). Da mesma forma que para todos os ensaios de diagnóstico in vitro, cada laboratório deve determinar o(s) seu(s) próprio(s) limite(s) de referência para a avaliação diagnóstica dos resultados do doente. 11 07702998 Rev. F, 2006-05 HBcT

HBc Total 10 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Características de desempenho O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi determinado através do teste de um total de 5564 amostras em dois locais. Os resultados do HBc Total ADVIA Centaur foram comparados com resultados de teste de um imunoensaio enzimático automatizado (EIA) anti-hbc Total comercialmente disponível. As amostras incluíram as seguintes populações: amostras positivas para o VHB, dadores de sangue normais e doentes hospitalizados. Foi efectuada uma avaliação posterior com as amostras discordantes através de um ensaio comercialmente disponível para o anti-hbc Total. Especificidade clínica Uma população de 4945 dadores de sangue aleatórios e 217 doentes hospitalizados foi testada através do ensaio HBc Total ADVIA Centaur e um imunoensaio enzimático automatizado anti-hbc Total comercialmente disponível. O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur é mostrado na seguinte tabela: Grupo de doentes Número Não reactivo (%) Reactivo (%) Reactivo confirmado Especificidade Dadores de sangue 4945 4924 (99,57%) 21 (0,42%) 12 99,82% aleatórios Doentes hospitalizados 217 206 (94,93%) 11 (5,1%) 7 98,09% Total 5162 5130 (99,38%) 32 (0,62%) 19 99,75% A especificidade de resolução do ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi de 99,75% (5130/5143) com 95% de intervalo de confiança (CI) de 99,57 a 99,87%. Sensibilidade clínica Uma população de 402 amostras de doentes com VHB anteriormente determinadas como positivas para o HBsAg foi testada com o ensaio HBc Total ADVIA Centaur e um ensaio anti-hbc Total comercialmente disponível. 402 destas amostras de doentes com VHB foram consideradas positivas para o anti-hbc Total através do ensaio comparativo com a mesma aplicação e 402 foram positivas através do ensaio HBc Total ADVIA Centaur. A sensibilidade relativa inicial foi 100% (402/402). Ensaio de referência Anti-HBc Total Ensaio HBc Total ADVIA Centaur Reactivo Não reactivo Total Reactivo 402 0 402 Não reactivo 0 0 0 Total 402 0 402 A especificidade de resolução do ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi de 100% (402/402) com 95% de intervalo de confiança (CI) de 99,09 a 100%. Reactividade cruzada O ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi avaliado para a reactividade cruzada com outros anticorpos virais e amostras de situação de doença. O estado anti-hbc Total de cada amostra foi verificado através da utilização de outro ensaio anti-hbc Total comercialmente disponível. Os seguintes resultados foram obtidos através da utilização do ensaio HBc Total ADVIA Centaur. Número Número de resultados positivos Anti-HBc Total Categoria clínica testado Ensaio ADVIA Centaur Ensaio de referência Infecção por hepatite A (VHA) 9 3 3 Infecção por hepatite C (VHC) 11 5 5 Doença do fígado não-viral 9 0 0 IgG contra o Vírus Epstein-Barr (EBV) 10 2 2 IgM contra o Vírus Epstein-Barr (EBV) 10 3 3 HBcT 07702998 Rev. F, 2006-05

Manual do ensaio ADVIA Centaur HBc Total 11 / 14 Número Número de resultados positivos Anti-HBc Total Categoria clínica testado Ensaio ADVIA Centaur Ensaio de referência IgG contra o Vírus Herpes Simplex (HSV) 10 3 3 IgM contra o Vírus Herpes Simplex (HSV) 10 4 4 IgG contra o Citomegalovírus (CMV) 10 7 7 IgM contra o Citomegalovírus (CMV) 3 1 1 Toxoplasma IgG 10 2 2 Toxoplasma IgM 10 0 0 IgG contra a Sífilis 10 1 1 Vírus da imunodeficiência humana (HIV1/2) 10 2 2 IgG contra o vírus varicela zoster 10 4 4 Multiparidade 10 1 1 IgG contra a rubéola 10 5 4 * Hepatite alcoólica 2 0 0 Artrite reumatóide 10 0 0 Anticorpo anti-nuclear (ANA) 10 1 1 Lúpus eritematoso sistémico (SLE) 10 1 1 HAMA 10 0 0 Frasco da vacina anti-gripe 10 3 3 Total de amostras testadas 204 48 47 * O resultado positivo não confirmado do ADVIA Centaur HBc Total foi positivo para o anti-hbs ADVIA Centaur. Amostras de soro que é... Demonstraram 10% de alterações dos resultados até... hemolizado 500 mg/dl de hemoglobina lipémico 1000 mg/dl de intralípidos ictérico 60 mg/dl de bilirrubina conjugada ictérico 40 mg/dl de bilirrubina não conjugada hiper-proteinémico 12,0 g/dl de proteína hipo-proteinémico 3,5 g/dl de proteína hiper IgG 60 mg/ml de imunoglobina G O ensaio de interferência foi determinado de acordo com o CLSI Document EP7-A2. 12 Painéis de seroconversão O painéis de seroconversão para doentes com VHB comercialmente disponíveis foram testados com o ensaio HBc Total ADVIA Centaur para determinar a sensibilidade de seroconversão do ensaio. O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur nos painéis de seroconversão coincidiram bastante com o desempenho do ensaio comparativo. Foram obtidos os seguintes resultados: Identificação do painel Resultado positivo Anti-HBc Total da data da colheita inicial Ensaio comparativo (Dias) Ensaio ADVIA Centaur (Dias) RP-009 36 36 0 RP-0016 60 57 +1 RP-0017 71 71 0 BCP-62433 41 41 0 Nabi-SB0413 69 69 0 Nabi-SB0411 35 35 0 Serológicos 2263-D 78 63 +3 Ensaio comparativo vs Ensaio ADVIA Centaur Diferença nos números da sangria* * A diferença nos números de sangria é relativa ao ensaio comparativo. Por exemplo, um +1 significa que o ensaio comparativo necessitou de 1 sangria adicional antes da reactividade ser determinada em comparação com o ponto no qual o ensaio ADVIA Centaur foi confirmado como positivo. 07702998 Rev. F, 2006-05 HBcT

HBc Total 12 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Precisão A precisão foi avaliada de acordo com o protocolo Clinical and Laboratory Standards Institute EP5-A2. 13 Um painel de cinco membros e controlos foram ensaiados em duas réplicas, duas vezes por dia, durante 20 dias. Foram obtidos os seguintes resultados através da utilização de 1 lote de reagentes e uma curva de calibração armazenada. * NA = Não aplicável Sensibilidade analítica Normalização Para analisar a sensibilidade analítica do ensaio HBc Total ADVIA Centaur, foi utilizada a amostra de referência do anti-hbc Total do Paul Ehrlich Institute (PEI) para preparar uma série de diluição que foi ensaiada com dois lotes do reagente HBc Total ADVIA Centaur. Foi utilizada a regressão linear para determinar a concentração da amostra de referência do PEI que corresponde ao "cutoff" do ensaio HBc Total ADVIA Centaur (valor de índice = 0,50). A concentração de Unidade Internacional (IU) do PEI no "cutoff" do ensaio foi determinada como sendo 0,22 PEI IU/mL. A rastreabilidade do ensaio HBc Total ADVIA Centaur baseia-se no acordo clínico relativo com os ensaios anti-hbc Total comercialmente disponíveis. Consulte Características de desempenho. Os valores atribuídos para os calibradores e controlos são determináveis para esta normalização. Assistência técnica Referências Média Durante o processamento Processamento-aprocessamento Total Amostra Índice SD CV (%) SD CV (%) SD CV (%) Soro 1 0,06 0,02 NA* 0,01 NA 0,02 NA Soro 2 1,13 0,06 5,1 0,05 4,5 0,09 8,4 Soro 3 1,22 0,04 3,6 0,05 4,2 0,08 6,8 Soro 4 1,35 0,08 5,8 0,05 3,8 0,10 7,1 Soro 5 2,40 0,12 4,9 0,08 3,4 0,19 7,7 Soro 6 4,54 0,20 4,4 0,21 4,7 0,29 6,5 Para serviços de atendimento ao cliente, contacte o seu distribuidor ou fornecedor de assistência técnica. 1. Gitlin N. Hepatitis B: diagnosis, prevention, and treatment. Clinical Chemistry 1997, 43:8(B):1500-1506. 2. Mahoney, FJ. Update on Diagnosis, Management, and Prevention of Hepatitis B Virus Infection. Clinical Microbiology Reviews 1999,12(2):351-366. 3. Juszczyk, J. Clinical course and consequences of Hepatitis B infection. Vaccine 2000, 18:S23-S25. 4. Vivek R. Treatment of hepatitis B. Clin Cornerstone 2001, 3(6):24-36. 5. Koff RS. Hepatitis B today: clinical diagnostic overview. The Pediatric infectious disease journal 1993 May: 12(5): 428-32. 6. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens; Approved Guideline - Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2004. NCCLS Document H18-A3. 7. Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR 1988;37:377-82, 387-8. 8. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2005. NCCLS Document M29-A3. HBcT 07702998 Rev. F, 2006-05

Manual do ensaio ADVIA Centaur HBc Total 13 / 14 9. Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR 1910.1030. 10. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Assessment of the Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic (ROC) Plots; Approved Guideline. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 1995. NCCLS Document GP10-A. 11. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline - Second Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2000. NCCLS Document C28-A2. 12. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline - Second Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2005. NCCLS document EP7-A2. 13. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline - Second Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2004. NCCLS Document EP5-A2. A denominação Bayer, a Cruz Bayer, ADVIA Centaur, e ReadyPack são marcas comerciais da Bayer. 2004 Bayer HealthCare LLC. Todos os direitos reservados. US Pats 4,745,181; 4,918,192; 5,110,932; 5,656,426; 5,609,822; 5,788,928 07702998 Rev. F, 2006-05 HBcT

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