Proposta de um sistema integrado de identificação e investigação de micro-organismos no Controle de Qualidade em Indústrias Farmacêuticas
Introdução
Objetivo Propor um sistema integrado de identificação de micro-organismos e de investigação de fontes de contaminação que consiga atender as necessidades particulares do Controle de Qualidade de cada Unidade de Produção. BD Coleção Métodos Identificação e investigação de micro-organismos
Metodologia Elaboração Fluxograma (esquema) Memória: Coleção de culturas (CCMA) e Banco de dados Fotos Identificação: BBL Crystal e Sistema proposto (MALDI- TOF/Morfologia)Fotos Não identificados: MICROSEQ e Construção de BD no MALDI-TOF Fotos Investigação: CCMA, BD e PFGE
Resultados: Investigação Recuperação, a partir da CCMA, de isolados envolvidos no Evento do Desvio P A A1 A B A B B C A A2 B P
Resultados: Identificação (Comparação entre métodos) N=225 Redução no número de isolados não identificados 160 151 Outras vantagens: 140 120 130 1.Independe de Gram 100 80 74 95 MALDI-TOF 2. Identificação de isolados fúngicos 60 BBL Crystal 40 20 0 Nao ID ID
Resultados: Identificação (Comparação entre métodos) Custo por identificação Tempo de identificação 45 40 35 30 25 42 Custo (R$) 38 30 Tempo resultado (min) 1200 1080 1000 800 600 400 20 15 10 200 0 BBL Crystal 30 MALDI-TOF 5 0 BBL Crystal MALDI-TOF MALDI-TOF prox ano
Resultados: Identificação por sequenciamento N=36 (MicroSEQ) Todas as 36 bactérias foram identificadas pelo MicroSEQ e tiveram seus perfis proteômicos inseridos no BD do MALDI-TOF 10 isolados: identificação errada pelo BBL Crystal
Resultados: Construção de BD Oito cepas foram identificadas como Micrococcus, sendo quatro M. luteus. Estes últimos foram utilizados para a construção de um espectro de referência em MALDI-TOF, que foi introduzido no BD in house As culturas (assim como as lâminas de Gram) dos isolados foram fotografadas, tiveram seu perfil bioquímico determinado (VITEK 2) e foram introduzidas na CCMA
Conclusões O espectro de referência criado a partir de cepas autóctones de M. luteus permitiu a ampliação do BD do MALDI-TOF com sucesso e outras cepas não identificadas estão sendo introduzidas, seguindo o mesmo procedimento; A CCMA foi útil na recuperação de cepas envolvidas em desvios da qualidade e permitiu a investigação de sua origem de contaminação pela técnica de PFGE; O sistema proposto se mostrou viável, reduziu custos e apresentou melhorias na identificação de cepas e na investigação de fontes de contaminação.
Agradecimentos Tecendo a Manhã Um galo sozinho não tece uma manhã. Ele precisará sempre de outros galos ( )
Agradecimentos Orientadores Bio-Manguinhos, INCQS, IOC e UMinho CNPq Programa Ciências sem Fronteiras FIOTEC Carta-compromisso com INCQS Gestores anteriores e atuais
Agradecimentos Equipe de Identificação SEPIN (Adriana Frazao, Cristhiane Falavina e Fernanda Ventura) Erica Louro da Fonseca, Luciane Gomes, Lygia Braga e Silvia Ferreira
MUITO OBRIGADA!
Metodologia Identificação Identificação pelo Sistema: Isolamento Morfologia celular (Gram) Morfologia da Colônia Coleção de Culturas de Micro-organismos Autóctones (CCMA) Banco de Dados da CCMA Perfil proteômico (MALDI-TOF) Comparação dos genomas por PFGE Identificação por Sequenciamento de gene conservado Caracterização do isolado: Perfil bioquímico Fotodocumentação (Morfologia celular e de colônia) Investigação Construção de espectro de referência (MALDI-TOF) Metodologia
Introdução Problema
Cepas da CCMA Metodologi
MALDI-TOF/ BBL Crystal Metodologi a
Sequenciamento e Construção BD MALDI-TOF Metodologia