RICARDO REUTER RUAS EFEITO DO MÉTODO DE DESCONGELAMENTO SOBRE A TAXA DE CONCEPÇÃO DE FÊMEAS BOVINAS DE CORTE INSEMINADAS ARTIFICIALMENTE

RICARDO REUTER RUAS EFEITO DO MÉTODO DE DESCONGELAMENTO SOBRE A TAXA DE CONCEPÇÃO DE FÊMEAS BOVINAS DE CORTE INSEMINADAS ARTIFICIALMENTE Dissertação apresentada a UFMG, como requisito parcial para obtenção do grau de Mestre em Zootecnia- Produção Animal. Colaboradores: Dr. Armando Leal do Norte e funcionários da Fazenda Lagoa Grande, Dr. Paulo Fernando de Azevedo Porto e funcionários da Fazenda Kaylua BELO HORIZONTE UFMG-EV Agosto - 4

Dedico este trabalho a Deus, que oferece vida, oportunidades, entendimento, tempo, estímulos, alegria, felicidade. Nos oferece oportunidades de superar e crescer com as dificuldades. A vida que incentiva a busca, busca que prosseguimos com entendimento, conquistado por cada um a seu tempo. Valoriza nossos esforços com estímulos, agradece nos dando alegria. Retribui com felicidade. A minha esposa Myrian, minhas filhas Flávia e Gabriela, que com paciência e desprendimento compreenderam e esperaram meu isolamento diário, incentivaram a superação dos obstáculos, acreditaram todo o tempo no cumprimento deste objetivo. A grande diferença entre os homens é a capacidade de percepção do mesmo fato por diversas perspectivas. Leonardo Da Vinci.

Agradecimentos: A meu pai, minha mãe, meus irmãos e toda minha família, Aos amigos. Ao Professor Orientador Venício José de Andrade Ao Professor Rômulo Cerqueira Leite Ao Professor Ronaldo Braga Reis Ao Professor Ivan Barbosa Machado Sampaio À Professora Ângela Maria Quintão Lana À Professora Monique de A. Lagares Ao Prof. José Monteiro da Silva Filho Ao Prof. Nelson Ao Prof. Mark Roger Jean Marie Henry Ao Professor Helton Mattana Saturnino, Ao Prof. Pedro Lúcio Lithg Pereira À Fazenda Lagoa Grande na pessoa do Dr. Armando Leal do Norte, aos inseminadores Leonardo, Gilson, João, Antônio, e aos demais amigos. À Fazenda Kaylua, e ao Dr. Paulo Fernando de Azevedo Porto aos inseminadores, Sr. Tião, Petronilho, Ramiro, Rôxo, Dunga e Jailton, e aos demais amigos. A todos os professores e funcionários que direta ou indiretamente contribuíram para a execução deste trabalho. 3

SUMÁRIO: LISTA DE TABELAS...... LISTA DE GRÁFICOS......... RESUMO...... ABSTRACT....... INTRODUÇÃO....... REVISÃO DA LITERATURA... Alguns fatores que afetam a eficiência da reprodução por Inseminação Artificial.... Inseminador............. Sêmen................3 Manejo do sêmen....4 Descongelamento.......5 Incubação.......6 Ambiente da inseminação.......7 O ato da Inseminação artificial....8 Reabsorção embrionária... 3 OBJETIVO...... 4 HIPÓTESES...... 4. Incubação...... 4. Descongelamento...... 5 7 8 8 9 9 5 5. 5. 5.. MATERIAL E MÉTODOS... Fazendas... Tratamentos...... Aplicação dos tratamentos... 4

5.3 5.4 5.5 Animais...... Inseminações...... Sêmen...... 5.6 Touros...... 5.7 5.8 Inseminadores Análises estatísticas... 3 3 4 4 6 6. 6. 6.3 6.4 6.5 6.6 RESULTADOS E DISCUSSÃO Tabela -Número de animais, inseminações e taxas de concepção por tratamentos e categorias na Fazenda Tabela Número de inseminações e taxas de concepção por tratamentos e ordem de serviço, na Fazenda Tabela 3 Número de inseminações e taxas de concepção por tratamentos e períodos na Fazenda Tabela 4 Número de animais, inseminações e taxas de concepção por tratamentos e categorias na Fazenda Tabela 5 Número de inseminações e taxas de concepção por tratamentos e ordem de serviço na Fazenda Tabela 6 Número total de animais, inseminações e taxas de concepção por tratamentos e categorias nas duas Fazendas 5 7 CONCLUSÕES...... 8 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS... 9 ANEXOS...... 9. Tabelas... 9.. Fazenda Setor 7 7 9... Tabela 7 Número de animais, inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento no Setor da Fazenda, por categorias... 5

9... 9...3 9...4 9...5 9..3 9..3. 9..3. 9..3.3 9..3.4 9..3.5 9..3.6 9..3.7 9..3.8 9..3.9 9..3. Tabela 8 Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas por dois inseminadores do setor da Fazenda, de acordo com os tratamentos Tabela 9 Número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço e soma do segundo e terceiro serviços, realizados de acordo com os tratamentos no setor da fazenda. Tabela Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados em cada período, de acordo com os tratamentos no setor da fazenda. Tabela Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados de acordo com os touros e tratamentos no setor da fazenda Fazenda Setor Tabela Número de animais, inseminações e médias das taxas de concepção obtidas nas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos no setor da Fazenda. Tabela 3 Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas por dois inseminadores do setor da Fazenda, de acordo com os tratamentos. Tabela 4 Número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço e soma do segundo e terceiro serviços, realizados de acordo com os tratamentos no setor da fazenda. Tabela 5 Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados em cada período, de acordo com os tratamentos no setor da fazenda. Tabela 6 Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados de acordo com os touros e tratamentos no setor da fazenda Tabela 7 Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas pelas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos, no Setor da Fazenda. Tabela 8 Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas por quatro inseminadores do setor da Fazenda, de acordo com os tratamentos Tabela 9 Número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço e soma do segundo e terceiro serviços, realizados de acordo com os tratamentos no setor da fazenda. Tabela Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados em cada período, de acordo com os tratamentos no setor da fazenda Tabela Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados com os quatro touros que apresentaram maior número de informações, de acordo com os tratamentos no setor da fazenda 3 9..3. 9..3. Fazenda Setor Tabela Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas nas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos. Fazenda setor Tabela 3 Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas por dois inseminadores do setor da Fazenda, de acordo com os tratamentos Tabela 4 Número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço e soma do segundo e terceiro serviços, realizados de acordo com os tratamentos no setor da fazenda 6

9..3. 3 9..3. 4 9..3. 5 9..3. 6 9..3. 7 9..3. 8 Tabela 5 Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados em cada período, de acordo com os tratamentos no setor da fazenda Tabela 6 Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados com três partidas de sêmen do mesmo touro, de acordo com os tratamentos no setor da fazenda. Fazenda Setor 3 Tabela 7 Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas nas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos no setor 3 da Fazenda. Tabela 8 Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas por quatro inseminadores do setor 3 da Fazenda, de acordo com os tratamentos. Tabela 9 Número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço e soma do segundo e terceiro serviços, realizados de acordo com os tratamentos no setor 3 da fazenda. Tabela 3 Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados em cada período, de acordo com os tratamentos no setor 3 da fazenda. Tabela 3 Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados com dois touros, de acordo com os tratamentos no setor 3 da fazenda. 4 5 9..3. 9 9..3. 9. 9.. 9.. 9..3 9..4 9..5 9..6 9..7 Gráficos Anexos Gráfico mostra o número de animais, de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas pelas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos, na Fazenda. Dados da Tabela Gráfico Número de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, por ordem de serviço. Gráfico 3 Número de animais, inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, por categorias. Dados da Tabela 4 Gráfico 4. Número de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, por ordem de serviço. Dados da Tabela 5 Gráfico 5. Número total de animais das duas Fazendas, de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento, por categorias. Dados da Tabela 6 Gráfico 6. Inseminadores e Tratamentos. Dados de 475 informações em T e 574 em T, nas duas fazendas. 6 7 8 7

Gráfico 7 Touros e Tratamentos. Dados de 5 informações em T e 637 em T, nas duas fazendas. 9 Resumo: Um total de 57 inseminações realizadas em 78 fêmeas bovinas de corte (9 nulíparas, 58 primíparas e 63 multíparas) das raças Tabapuã, ½ Zebu/Red Angus, ¼ Zebu ¼ Red Angus ½ Santa Gertrudes (RedNorte), /8 Zebu /8 Red Angus /4 Santa Gertrudis ½ Senepol (RedNorte), pertencentes às Fazendas (fazenda ) e (fazenda ), que também utiliza a raça Limousin como formação do ½ sangue zebu, localizadas respectivamente nos municípios de Medeiros Neto e Lagedão, ambas no extremo sul do estado da Bahia, foram utilizadas para se verificar o efeito de dois métodos de descongelamento do sêmen (T = descongelamento em água à temperatura ambiente) e T (descongelamento em equipamento eletro-eletrônico com temperatura da água controlada em 35 C ±,5 C) sobre a taxa de concepção. No T as palhetas foram retiradas do botijão, descongeladas e utilizadas conforme o protocolo de procedimentos da inseminação artificial da fazenda. No T as doses de sêmen foram retiradas do botijão e descongeladas simultaneamente no equipamento eletro-eletrônico, sendo utilizadas posteriormente de acordo com os mesmos protocolos observados em T. As análises estatísticas foram feitas através do método do Qui-quadrado. Possíveis interações foram observadas entre Tratamentos X Períodos e Tratamentos X Categorias. Os dados foram analisados por categoria, juntos e separados por fazenda e as taxas de concepção observadas foram 8,9 ±,7 para T e 86,5 ±,3 para T, registrando-se diferença de 5,6% favorável ao T (P<,) no total de inseminações realizadas. Enquanto T apresentou índice de serviço de,4 o T apresentou o gasto de,6 dose por prenhez. Concluiu-se que a utilização do descongelador eletrônico de sêmen mostrou-se vantajosa, resultando em altas taxas de concepção tanto no primeiro quanto nos serviços subseqüentes em ambas as fazendas. Palavras chave : Descongelador de sêmen, descongelamento de sêmen, inseminação artificial, Red Norte, taxa de concepção, índice de serviço. Abstract: A total of 57 insemination services, from 78 beef cattle females (Tabapuã and RedNorte, and crossings), of different animal category groups were used to verify the effect of different semen thawing methods (T- water in environment temperature and T - semen thawing in an electronic device with thawing temperature of 35±,5 C) on conception rate. In T the straws were used according to the usual IA farm protocol. In T, the straws were thawing at the same time and used as in T. When comparing the conception rate it was registered 8,9 ±,7 for T, and 86,5 ±,3 for T, a difference of 5,6 % (P<.) in total of services in both farms, service rate of,4 and,6 for T and T respectivally. It was concluded that the electronic device was beneficial in the process of semen thawing, resulting in greater conception rates in the first and subsequent insemination services in both farms. Keywords: Artificial insemination, conception rate, Red Norte breed, semen defroster, semen thawing, service rate.. 8

- Introdução Diversos fatores interagem para a consecução dos melhores índices de fertilidade em um rebanho, e podem ser descritos como inerentes à vaca, ao homem, ao touro quando em monta natural ou ao sêmen, quando usada a inseminação artificial. A dificuldade de se manejar adequadamente todo o rebanho (carga animal, ambiente, sêmen utilizado e mão-de-obra) faz com que os lotes de fêmeas dentro do mesmo rebanho apresentem diferentes taxas de concepção e os resultados reprodutivos da propriedade sejam afetados pela ação e interação desses fatores. Ao longo da história da Inseminação Artificial (I.A.) no Brasil e no mundo, o descongelamento das doses de sêmen foi recomendado de diversas maneiras, tais como descongelamento no gelo, no bolso da camisa, na água à temperatura ambiente, durante o manuseio (conhecido como descongelamento na vaca ) e finalmente à temperatura entre 35 e 37ºC conseguida por meio da mistura de água fria com água quente, com o monitoramento da mesma através de um termômetro. Estes métodos ainda são aceitos por grande parte dos técnicos e inseminadores; no entanto, o tratamento térmico dado à palheta de sêmen se revela como um importante fator na determinação do sucesso da I.A., assim como inseminadores, touros, partidas de sêmen, categoria, condição fisiológica da fêmea e interações desses fatores, e às vezes pode fazer a diferença entre lucro e prejuízo na atividade. - Revisão de literatura A eficiência reprodutiva pode ser considerada como uma das mais importantes características econômicas, pois é um dos fatores que determina a taxa de desfrute de um rebanho. Essa característica é muito complexa e envolve fatores multidisciplinares, destacando-se, entre eles, os de naturezas genética, sanitária, de manejo e nutricional. Os resultados da I.A. vão depender basicamente do manejo existente na fazenda, da qualidade do sêmen utilizado e da eficiência do inseminador (Faria, 999). Os problemas com a inseminação artificial são decorrentes principalmente de uma falha de manejo na aplicação do sêmen e na falta de efetivação de controle da qualidade do sêmen. O comprometimento da qualidade da IA não deve recair somente sobre a indústria, seja esta nacional ou estrangeira, mas poderá ser decorrente de problemas de conservação, transporte e manipulação indevida (Neves, 999). Alguns fatores que afetam a eficiência da reprodução por Inseminação Artificial. -. Inseminador Deve ser treinado e hábil com a técnica, por isso deve ser avaliado e anualmente reciclado em novos treinamentos, antes do início da estação de monta (Silva, 993). O autor encontrou diferença no índice de serviço de até 4% entre eles. Diferença de % no índice de serviço foi encontrada por Fernandes Junior,, quando comparou inseminadores práticos com inseminadores treinados e reciclados. -. Sêmen Nenhum método de laboratório tem permitido com certeza avaliar o poder fecundante dos espermatozóides, sendo a motilidade ainda um dos melhores critérios utilizados com este objetivo (Jondet, Rabadeux,976; Linford et al.,976; Shannon,978; Casagrande et al., 979). A elevação da concentração espermática por dose inseminante resulta em sensível acréscimo na fertilidade segundo Jondet, 97. Trabalhando com concentrações de 5,5; 8,4 e,4 milhões de espermatozóides/dose, Alquimist, 974, observou correlação positiva (p<,) entre o aumento da concentração espermática na dose inseminante e aumento de fertilidade. Resultados similares foram registrados por Casagrande et al., 98, tendo observado que, com patologia espermática mais elevada, o acréscimo do número de espermatozóides na dose inseminante, determinou acentuado aumento na fertilidade. Woods et al., 986, utilizaram diferentes avaliações de sêmen e verificaram que a patologia espermática e a motilidade associadas ao número de espermatozóides da dose inseminante, podem predizer a fertilidade. Os autores concluíram que não existe correlação entre características morfológicas do sêmen e fertilidade, quando a concentração espermática for suficiente para compensar o efeito atribuído aos espermatozóides anormais.

Usando sêmen de 5 milhões de espermatozóides por dose, Söderquist et al., 99, não encontraram correlação entre motilidade pós-descongelamento e fertilidade quando as amostras de sêmen apresentavam alta motilidade pós-descongelamento e citaram que a relação entre motilidade e fertilidade poderia ser mascarada pela concentração. O sêmen de cada touro reage de maneira diferente quando processado (Shannon; Vishavanath,995). O número ótimo de espermatozóides por dose inseminante depende de cada touro em função da sua fertilidade inerente. Ejaculados de reprodutores de alta fertilidade podem ser expostos a maiores taxas de diluição sem haver comprometimento da eficiência reprodutiva (Komminsrud et al., 996; Seidel et al., 996; Denn Daas et al., 998.) Deve estar dentro das normas do CBRA (998). -3 Manejo do sêmen Segundo Horn et al., 997, o sêmen vai perdendo qualidade à medida que vai sendo manipulado, pois de acordo com Barth, 993, os danos causados por repetidas exposições a temperatura ambiente causam redução da viabilidade do espermatozóide. As recomendações de manejo do sêmen variam entre as centrais de I.A.. Isso resulta em confusão entre os inseminadores e leva a pensar que quase todos os métodos são adequados. No entanto, essa atitude acontece por indiferença, ignorância ou confusão, e o resultado pode ser baixa taxa de concepção (O Connor, ). -4 Descongelamento De acordo com as conclusões de Casagrande et al., 977, a maior percentagem de espermatozóides reativados em sêmen envasado em mini tubos foi conseguido quando descongelado em água com temperatura entre 36 e 4º C. A integridade de acrossomas foi positivamente correlacionada com a elevação da temperatura de descongelamento, sendo semelhante nos descongelamentos a 95 e 75 ºC, que apresentaram melhores resultados que o descongelamento a 35ºC, que, por sua vez, manteve maior porcentagem de acrossomas intactos que o descongelamento a 5ºC (Wiggin, Almquist,975). Avaliando o efeito do descongelamento em grupos de palhetas em água morna sobre a motilidade e manutenção do acrossoma, Brown et al., 99; 99, concluíram que a incubação a 36ºC por até quatro horas não foi prejudicial à viabilidade do sêmen. A taxa de descongelamento do sêmen na palheta é rápida, devido principalmente à sua alta relação superfície/volume e, em conseqüência, a uma alta sensibilidade a mudanças térmicas. Dessa forma, o descongelamento em temperaturas próximas a 35ºC resulta em um maior número de espermatozóides vivos. Taxa de descongelamento e ambiente pósdescongelamento relacionam-se com injúrias às células espermáticas. O descongelamento rápido (35ºC por um minuto) é mais eficiente na manutenção de acrossomas intactos e motilidade espermática após exposição por três minutos a temperaturas de e 37 ºC (Senger, 976). Em seu trabalho, DeJarnette,, comparando diferentes temperaturas de descongelamento de palhetas de,5 ml, observou diferenças significativas quanto à porcentagem de acrossomas intactos, sendo que a temperatura de 37ºC revelou maior porcentagem que a temperatura de ºC, que, por sua vez, apresentou maior porcentagem de acrossomas intactos que o descongelamento a 5ºC, que revelou porcentagem ainda maior que o descongelamento na vaca. Existem evidências de que injúrias são provocadas durante o descongelamento, pela reorganização de microscópicos cristais de gelo formados durante o congelamento, em cristais maiores, já reconhecidos como danosos ao espermatozóide. O descongelamento rápido limita o tempo de recristalização e aumenta o número de células recuperadas (Mazur, 984). A temperatura e a taxa de descongelamento do sêmen determinam mudanças na permeabilidade da membrana lipídica, resultando na formação de protuberância na crista acrossomal (Bamba e Cram 988 a, b). Como resultado de uma série de estudos, é reconhecido que o descongelamento a 35ºC resulta em aumento de espermatozóides recuperados, se comparado aos outros métodos de descongelamento. O aumento de temperatura do espermatozóide é rápido o bastante para não permitir a reorganização dos cristais de gelo em seu interior, o que ocorre com o descongelamento em temperaturas mais baixas (O Connor, ). Nos trabalhos de Pessoa, ; Murta,, foram comparadas as taxas de concepção obtidas com os

descongelamentos em água ambiente, na vaca e em equipamento eletro-eletrônico de temperatura de 35 ±,5 C, ambos concluíram não ter havido diferença (p>,5) entre os três tratamentos..5 Incubação Em 37.447 inseminações Jondet; Rabadeux 98 não observaram efeito do tempo de incubação a 35ºC sobre a fertilidade do sêmen apenas descongelado por segundos ou descongelado e incubado por uma hora. No entanto, verificaram tendência de aumento na fertilidade devido à incubação, encontrando 65,6% de fertilidade para as amostras incubadas e 64,3% para as demais. A redução da viabilidade do espermatozóide descongelado devido ao prolongamento da incubação, é causada em parte, pela manifestação de uma lesão celular latente, ocorrida durante o processo de congelamento e descongelamento (Pace et al., 98). Foi observado que uma parcela dos espermatozóides classificados como viáveis, quando avaliados logo após o descongelamento, na realidade não apresentava poder de fertilizar. Assim, a queda na motilidade e na porcentagem de acrossomas intactos, após a incubação, seria conseqüência da eliminação destes espermatozóides menos viáveis. Segundo o autor, esta redução na viabilidade deve ser atribuída aos eventos físicos do congelamento e descongelamento (Saacke, 983). Usando sêmen diluído em leite desnatado-frutose, descongelado e incubado entre 35-38ºC, por seis, 36, 66 e 96 minutos, Morkholm; Filset, 988 não encontraram diferença (p>,5), entre a duração da incubação e a taxa de não retorno aos 6 dias entre os tempos de incubação. Porém observaram que houve tendência ao aumento da taxa de não retorno com o tempo de incubação de 66 minutos. Estudando o descongelamento de grupos de, 5,, 5 e palhetas de,5 ml, simultaneamente, num descongelador de sêmen com temperatura constante de 36ºC, Brown, et al., 99 recomendaram descongelar dez palhetas simultaneamente. Avaliando o efeito do descongelamento em grupos de palhetas em água morna sobre a motilidade e manutenção do acrossoma, Brown et al., 99 concluíram que a incubação a 36ºC por até quatro horas não foi prejudicial à viabilidade do sêmen. A taxa de descongelamento do sêmen na palheta é rápida, devido principalmente à sua alta relação superfície/volume e, em conseqüência, a uma alta sensibilidade a mudanças térmicas. Dessa forma, o descongelamento em temperaturas próximas a 35ºC resulta na preservação de maior número de espermatozóides aptos à fecundação. Diniz, 99, estudando o efeito do descongelamento e incubação a 35ºC, por, 45 e 9 minutos, sobre a taxa de prenhez, usando 7 doses de sêmen de um único ejaculado, observou que não houve diferença (P>,5) entre os tratamentos, concordando com os trabalhos de Hurst; Kelly, 958, Jondet; Rabadeux, 98 e Morkholm; Filset, 988. No entanto, registrou aumento de 3,5% na taxa de prenhez para o tempo de incubação de 45 minutos, em relação aos demais. Também não houve diferença (p>,5) entre os tratamentos quanto ao padrão do sêmen; no entanto, houve aumento da fertilidade, vigor, motilidade e número de espermatozóides viáveis, quando incubado por 45 minutos..6 Ambiente da inseminação Os fatores taxa de descongelamento e ambiente pós-descongelamento relacionam-se com injúrias às células espermáticas. O descongelamento rápido (35ºC por um minuto) é mais eficiente na manutenção de acrossomas intactos e motilidade espermática após exposição por três minutos a temperaturas de e 37 ºC (Senger, 976)..7 O ato da Inseminação artificial Segundo O Connor,, o ato da inseminação artificial requer uma série de cuidados, para que se obtenha o máximo benefício dessa biotecnologia. Dentre eles, devem ser destacados: Manter o equipamento da inseminação limpo e seco todo o tempo. Checar a confiabilidade do termômetro periodicamente. Não descongelar o sêmen a temperaturas acima de 35ºC. Enxugar cada palheta de sêmen suave e completamente. Anotar a identificação do touro e partida do sêmen de cada palheta. Deslocar a bolha de ar da parte central para a extremidade lacrada da palheta. Cortar a palheta em cima da bolha de ar. Evitar improvisos ao manusear o sêmen e ao se proceder à inseminação artificial propriamente dita.

Prestar atenção a todos os detalhes. O autor afirma ainda que diversos fatores interferem diminuindo a fertilidade do sêmen congelado; dentre eles: Prolongada permanência das palhetas no gargalo do botijão quando da retirada das doses e suas re-imersões no nitrogênio. Contato com os dedos do inseminador, quando não se usa pinça durante o manuseio. Descongelamento inadequado. Contaminações (poeira, esterco, sujeira, água, etc). Falhas na montagem do aplicador. Erro no local e velocidade de deposição do sêmen. Falhas na higiene da vaca e equipamentos. Inadequado manejo da fêmea. Segundo o mesmo autor, a fertilidade pode cair de 7% para 7-9% se um ou vários desses fatores forem negligenciados. Chama ainda a atenção para fato de que os detalhes são a chave do sucesso na inseminação artificial, enfatizando que o sêmen é um produto frágil e perecível..8 Reabsorção embrionária Através de estudo com transferência de embriões, Mc. Millan; Dinnison, 999, concluíram que é significativo o percentual de vacas que apresentam retorno ao cio após 5 dias da transferência, demonstrando reconhecimento e não manutenção da gestação. 3- OBJETIVO Este experimento teve como objetivo verificar diferenças nas taxas de concepção obtidas pelo descongelamento de palhetas de sêmen de forma convencional nesta região geográfica (na água de torneira), e pelo uso de um equipamento que mantém por controle eletrônico a temperatura da água de descongelamento em torno de 35 C. 4- Hipóteses 4- O descongelamento simultâneo de até dez doses de sêmen em temperatura estável de 35 C não prejudica a fertilidade das mesmas se forem utilizadas em até 9 minutos após o descongelamento, o que está de acordo com Jondet; Rabadeux 98; Morkholm; Filset, 988; Brown, 99 e Diniz, 99. 4- O descongelamento feito em água a 35 C promove maior fecundidade às doses de sêmen em relação ao descongelamento feito em temperaturas mais baixas, o que está de acordo com Wiggin, Almquist,975; Senger, 976; Mazur, 984; Bamba e Cram 988 a, b; Brown, 99; 99; DeJarnette, e O Connor,. 5- MATERIAL E MÉTODOS 5-. Fazendas Este trabalho foi realizado nas fazendas, município de Medeiros Neto, período de 3-- a -3- e fazenda, município de Lagedão, no período de 7-- a 5-3-, ambas no extremo sul do estado da Bahia. A fazenda é formada com pastagens de Brachiaria brizanta (7%) e Brachiaria decumbens (3%). A fazenda é formada de Brachiaria brizanta (6%), Brachiaria decumbens (%) e Brachiaria Humidicula (%), divididas em módulos de pastejo rotacionado sem adubação. 5-. Tratamentos Foram utilizados dois tratamentos: T = descongelamento do sêmen em água de torneira à temperatura ambiente colhida em recipiente plástico de ± 4 ml e T = descongelamento do sêmen em água mantida à temperatura de 35 ±,5 C, através de aparelho eletro-eletrônico da marca Fertilize, com capacidade para 4 ml. No setor 3 da Fazenda foi utilizado o equipamento modelo V ligado em bateria de automóvel. Nos demais foram utilizados modelos V conectados à rede elétrica. Na Fazenda as temperaturas registradas para a água ambiente foram: 6,7 ±,3 C de manhã e 7,5 ±, C de tarde no setor ;,3 ±, C de manhã e,5 ±,6 C de tarde no setor. Na fazenda foram registradas para a água ambiente temperaturas de 5,8 ±,4 C de manhã e 5, ±,7 C de tarde no setor ; 5,9 ±,4 C de manhã e 5,8 ±,4 C de tarde no setor ; 4, ±,3 C de manhã e 6,9 ±,4 C de tarde no setor 3. A comparação entre estes tratamentos se justifica, pois estas fazendas utilizam tradicionalmente o T (temperatura ambiente) como método de descongelamento, conseguindo com este procedimento já elevadas taxas de concepção ao longo dos últimos anos, enquanto o T padroniza o descongelamento em temperatura estável e desejável conforme revisão da literatura referenciada. De acordo com as conclusões de Pessoa, e Murta,, estes dois tratamentos foram iguais em seus trabalhos (p>,5).

5-. Aplicação dos tratamentos Na fazenda, a estação de monta começou em - -, a aplicação dos tratamentos iniciou-se em 7-- no setor e em 7-- no setor, aplicados alternadamente: no período da tarde e manhã seguinte, aplicou-se um tratamento; a seguir o outro, e assim sucessivamente até o final do período experimental em -3-, de forma que em cada dia ocorressem os dois tratamentos. Na fazenda, a estação de monta começou em - - e os tratamentos foram aplicados alternadamente como na fazenda, no setor de 7-- a 5-3- (final da estação de monta), nos setores e 3, de 3-- a 3-3- (final da estação de monta). 5-3 Animais Na fazenda, foram utilizadas um total de 4 fêmeas bovinas de corte em regime de pasto, com suplementação mineral de formulação diferenciada para primíparas, multíparas e nulíparas, ad libitum. Categorias com os graus de sangue ½ Zebu /Red Angus, ¼ Zebu ¼ Red Angus ½ Santa Gertrudes (RedNorte), /8 Zebu /8 Red Angus /4 Santa Gertrudis ½ Senepol (RedNorte) e também animais ½ Zebu ½ Limousin, sendo que as informações analisadas são provenientes de 7 nulíparas, 66 primíparas e multíparas inseminadas no setor ; 7 nulíparas e 37 multíparas inseminadas no setor. A fazenda, além de apresentar animais com as mesmas características raciais descritas para os da fazenda, possui também animais ½ Zebu/ ½ Limousin como base do composto RedNorte. Na fazenda, foram consideradas as informações de 583 fêmeas da raça RedNorte e cruzamentos de sua formação, sendo que 48 nulíparas, 33 primíparas e 68 multíparas foram inseminadas no setor ; 39 nulíparas, 5 primíparas e 44 multíparas no setor e, quatro nulíparas, oito primíparas e 6 multíparas da raça Tabapuã no setor 3. Em ambas as fazendas os animais se apresentaram em boas condições corporais, com poucos animais se apresentando em condição inferior a 3 (numa escala de a 5). 5.4. Inseminações As fêmeas utilizadas receberam, individualmente, o máximo de três inseminações. Aquelas que apresentaram todas as suas inseminações negativas tiveram suas informações desprezadas para a comparação entre tratamentos, sendo estas 6 multíparas, uma primípara e três nulíparas, que geraram um total de 8 serviços realizados com o T e 5 serviços com o T na fazenda e 8 multíparas, 6 primíparas e nove nulíparas que geraram um total de 3 serviços com o T e 38 serviços com o T na fazenda. Foi apreciado um total de 474 serviços na fazenda e 783 serviços na fazenda, num total de 57 inseminações. O esquema de inseminações foi realizado de acordo com as recomendações propostas por Trimberger, 94, segundo as quais as fêmeas observadas em cio pela manhã foram inseminadas na tarde do mesmo dia, e aquelas observadas em cio no período da tarde foram inseminadas na manhã do dia seguinte. Em ambas as fazendas o cio foi observado entre 8: e :h pela manhã e entre 7: e 9: pela tarde. 5-5. Sêmen O sêmen utilizado no presente experimento foi previamente examinado, sendo considerado dentro dos padrões recomendados. Durante o período experimental foram feitas por amostragem análises de algumas doses, aproveitando-se a última gota da palheta utilizada para a verificação do vigor e motilidade, sendo observado que todas as análises mostraram resultados dentro dos padrões e estão expressos na tabela 3 em anexo, página 5. Durante o período experimental, foram reservadas a última palheta da parte superior e a última da parte inferior da última rack do caneco, para verificação de possíveis variações na motilidade, vigor e número de espermatozóides viáveis após o manuseio do botijão, sendo verificado que o sêmen das 5 amostras da parte superior e 4 amostras da parte inferior das racks, 8 amostras da Fazenda e amostras da Fazenda, permanecia dentro dos padrões recomendados pela CBRA, 998, conforme mostra a tabela 33 em anexo, página 6. 5-6. Touros Na fazenda três touros foram os mais usados no setor, um da raça Senepol, um da raça Santa Gertrudis e outro da raça RedNorte, sendo o mesmo touro Senepol o único utilizado no setor desta fazenda. Na fazenda foram usados três touros da raça Santa Gertrudis e um da raça Senepol no setor, no setor um único touro da raça Senepol (o mesmo 3

utilizado na fazenda ), e dois touros da raça Tabapuã no setor 3. 5.7. Inseminadores Fazenda, setor Inseminador Cargo: Gerente Aprendizado em curso há 5 anos, última reciclagem há anos, cerca de 975 inseminações realizadas. Inseminador Cargo: auxiliar Aprendizado em curso há anos, última reciclagem há anos, cerca de 65 inseminações realizadas. Fazenda, setor Inseminador 3: Cargo: Gerente Aprendizado em curso há 4 anos, última reciclagem há anos, cerca de.6 inseminações realizadas. Inseminador 4: Cargo: auxiliar Aprendizado em curso há oito anos, sem reciclagem, cerca de 8 inseminações realizadas. 3 anos de idade, aprendizado em curso há dez anos, última reciclagem há três anos, cerca de.7 inseminações realizadas. Fazenda, setor 3 Inseminador : Cargo: Gerente 45 anos de idade, aprendizado em curso há anos, última reciclagem há três anos, cerca de 8. inseminações realizadas. Inseminador : Cargo: auxiliar 8 anos de idade, aprendizado em curso há dez anos, última reciclagem há três anos, cerca de. inseminações realizadas. Análises estatísticas As análises estatísticas foram realizadas por estudo de dispersão de frequëncia testadas pelo método do Qui-quadrado, utilizando-se os recursos computacionais dos programas Microsoft Windows 998 e SAEG versão 8. (), considerando-se, além do tratamento, efeito de inseminadores, touros, ordem de serviços, categorias e períodos; e suas interações. Fazenda, setor Inseminador 5: Cargo: Gerente 47 anos de idade, aprendizado prático há 8 anos, última reciclagem há 3 anos, cerca de. inseminações realizadas. Inseminador 6: Cargo: auxiliar imediato 9 anos de idade, aprendizado em curso de inseminação há quatro anos, última reciclagem há três anos, cerca de 6 inseminações realizadas. Inseminador 7: auxiliar Sem dados Inseminador 8: auxiliar Sem dados Fazenda, setor Inseminador 9: Cargo: Gerente 38 anos de idade, aprendizado prático há anos, última reciclagem há três anos, cerca de 6 inseminações realizadas. Inseminador : Cargo: auxiliar 4

6. RESULTADOS E DISCUSSÃO Fazenda A tabela mostra o número de animais, de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas pelas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos, na Fazenda. TABELA - Número de animais, de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas pelas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos, na Fazenda. Inseminações em T Inseminações em T Categorias Número de Animais Nulíparas 99 45 8. 58 84.5 Primíparas 66 7 64.7 6 85.3 Multíparas 57 79. ± 4. b 9 88. ±.3 a Total 4 63 77.9 ± 3. b 3 86.8 ±.9 a P<.5 em multíparas e para o total de informações da fazenda. TABELA A tabela mostra o número de inseminações e taxas de concepção obtidos em cada tratamento na Fazenda, por ordem de serviço. Tabela. Número de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, por ordem de serviço. Serviços T T Primeiro 8 7. ± 4.3 b 4 86. ±. a Serviços +3 55 89. 7 87.8 Total 63 77.9 ± 3. b 3 86.8 ±.6 a P<. para o primeiro serviço e p<.5 para o total de serviços. A Tabela 3 mostra o número de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, em cada período. Tabela 3. Número de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, em cada período. Períodos T T Manhã 5 79.6 97 88.5 Tarde 8 76.8 ± 4. b 8 85.7±.4 a Total 6 77.5 ± 3.3 b 35 86.6 ±. a A Tabela 4 mostra o número de animais, número de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento nas três categorias animais da Fazenda. Tabela 4. Número de animais, inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, por categorias. Categorias Número de Animais Inseminações em T Inseminações em T Nulíparas 9 5 7. ± 6.5 b 7 78.6 Primíparas 9 8 86.4 ± 3. a 6 87.7 Multíparas 373 97 83. ±.7 a 4 87.6 Total 656 365 8.5 48 86. P<.5 dentro da coluna T. Observa-se que as categorias foram diferentes quando usado o T e iguais quando usado T. 5

A tabela 5 mostra o número de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, por ordem de serviço. Tabela 5. Número de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento na Fazenda, por ordem de serviço. Serviços T T Primeiro 77 83. 9 83.8 Serviços +3 88 8.7 ± 4. b 7 9.4 ±.5 a Total 365 8.5 48 86. P<.5 entre tratamentos para os serviços +3 A Tabela 6 mostra o número total de animais das duas Fazendas, de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento, por categorias. Tabela 6. Número total de animais das duas Fazendas, de inseminações e taxas de concepção obtidas em cada tratamento, por categorias. Inseminações em T Inseminações em T Categorias Número de Animais Nulíparas 9 95 74.7 8 8. Primíparas 58 35 83.7 67 86.8 Multíparas 63 98 8.9 ±. b 434 87.6 ±.6 a Total 78 58 8. ±.7 b 79 86.4 ±.3 a P<.5 em multíparas e p<. no total de informações. 6

Segundo Watson (995), a criopreservação provoca injúrias na célula espermática causando danos nas membranas plasmática, do acrossoma e da mitocôndria, bem como danos nos microtubos do axonema. A formação de cristais de gelo no plasma extracelular modifica a pressão osmótica do meio, promovendo desidratação da célula espermática cuja intensidade é determinada pela taxa de descongelamento, permeabilidade da membrana e sua ativação de energia. Os danos causados na mitocôndria respondem por menor produção de energia, e aqueles causados nos microtubos da cauda respondem por menor eficiência de deslocamento. Em temperatura de descongelamento inadequada, ocorrem também lesões de acrossoma, observadas como protuberâncias na crista acrossomal, resultando em ausência ou baixa capacidade de reação com a zona pelúcida do óvulo, diminuindo assim o poder fecundante da dose inseminante. A diferença favorável ao T está de acordo com o relatado na literatura pertinente (Senger,976; Mazur, 984; Brown, 99; 99 DeJarnette,; O Connor, ), concordando que, quando o descongelamento é feito à temperatura em torno de 35 C o aumento de temperatura do espermatozóide é rápido o bastante para impedir a reorganização dos cristais de gelo em seu interior, o que ocorre com o descongelamento em temperaturas mais baixas. Maiores taxas de concepção significam, além da economia de sêmen, menor intervalo de parto e, conseqüentemente, maior produção/ano. Em gado de corte, as fêmeas que começam a ciclar na segunda metade da estação de monta têm menos tempo para ficarem gestantes e, nesse caso, falhas nas inseminações significam fêmeas saindo vazias da estação de monta, o que se reflete em menor índice de fertilidade, levando, em alguns casos, ao descarte de animais com alto potencial genético e reprodutivo. Falhas na inseminação aumentam o intervalo de partos, com conseqüente atraso das concepções durante a estação de monta, o que acarreta menores chances de concepção, devido ao curto espaço de tempo entre o parto e a estação de monta subseqüente. fêmea e de suas interações, o descongelamento do sêmen pode fazer a diferença entre fracasso e sucesso na prática da inseminação artificial. A adoção dessa tecnologia, que automatiza um processo até então manual, determinando uma constante onde outrora havia uma variável, ajuda a promover o sucesso da Inseminação Artificial, e se adotada em todas as fazendas que utilizam a I.A. no Brasil, teríamos certamente aumento de produtividade e conseqüentemente maior produção de leite e carne, com seus produtos e serviços derivados, por ano. 7. CONCLUSÕES Foram confirmadas as hipóteses: - A retirada e o descongelamento simultâneo das doses de sêmen a serem utilizadas, principalmente quando um grande número de fêmeas se apresenta em cio no mesmo horário, facilita o trabalho com menor manuseio do botijão. Padroniza em boa qualidade a taxa de descongelamento e o tempo mínimo do descongelamento de cada uma das palhetas a serem utilizadas, o que está de acordo com os trabalhos de Jondet; Rabadeux 98; Morkholm; Filset, 988; Brown, 99 e Diniz, 99. - - O uso do descongelador eletrônico de sêmen elevou as taxas de concepção obtendo-se desta forma maior eficiência de serviço, o que está de acordo com Wiggin, Almquist,975; Senger, 976; Mazur, 984; Bamba e Cram 988 a, b; Brown, 99; 99; DeJarnette, e O Connor,. Mesmo em rebanhos com um adequado nível de manejo e já elevadas taxas de concepção, o descongelamento pode alterar os resultados esperados, e o uso do Descongelador eletrônico de sêmen se mostrou vantajoso diminuindo o gasto de doses e aumentando a eficiência do serviço. Novos trabalhos devem ser desenvolvidos para o estudo de possíveis interações entre Tratamentos X Categorias; Tratamentos X Períodos, e entre Tratamentos X Ordem de serviço, conforme o observado neste experimento. Aliado ao anteriormente discutido, se for considerado que, em determinadas circunstâncias, podem ocorrer deficiências relacionadas à qualidade funcional do sêmen, do inseminador, da 7

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Tabelas anexas Fazenda - Setor A tabela 7 mostra o número de animais, número de inseminações e respectivas taxas de concepção obtidas pelas diferentes categorias animais de acordo com os tratamentos no setor da Fazenda. TABELA 7 - Número de animais, de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas pelas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos, no setor da Fazenda. Inseminações em T Inseminações em T Categorias Número de Animais Nulíparas 7 7 85.7 86.4 Primíparas 66 7 64.7 6 85.3 Multíparas 3 7. ± 8. b 94 89.4 ± 3. a Total 3 55 7.9 ± 6. b 77 87. ±.5 a P<.5 entre tratamentos para multíparas. P<. entre tratamentos no total das informações. A tabela 8 mostra o número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas pelos dois inseminadores de acordo com os tratamentos, no Setor da Fazenda. TABELA 8- Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas por dois inseminadores de acordo com os tratamentos, no Setor da Fazenda. Inseminadores T T 6 5. 4 9.5 7 74. 78 85.9 Total 33 69.7 ± 8. b 8 88. ± 3. a P<,5 entre tratamentos. A tabela 9 mostra o número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço, para a soma dos serviços e 3 e para o total de serviços realizados, de acordo com os tratamentos no Setor da Fazenda. Foi registrada diferença de,8% (P<,) nas taxas de concepção ao primeiro serviço e 6,% (p<,) no total dos três serviços, favorável ao T (descongelamento no equipamento eletro-eletrônico). TABELA 9. Número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço, para a soma dos serviços e 3 e para o total de serviços realizados, de acordo com os tratamentos no Setor da Fazenda. Serviços T T Primeiro 34 67.6 ± 8. b 88.4 ±.9 a Serviços +3 76. 56 85.7 Total 55 7.9 ± 6. b 77 87.±.5 a P<, para o primeiro e para o total de serviços. A tabela mostra o número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados em cada período, de acordo com os tratamentos no Setor da Fazenda. Enquanto o T manteve-se em 35 ±,3 C nos dois períodos, em T no período da manhã foi registrada temperatura da água ambiente de 6,7 ±,3 C e no período da tarde 7,5 ±, C. Estes dados estão de acordo com Senger, 976. TABELA. Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados em cada período, de acordo com os tratamentos no Setor da Fazenda. Períodos T T Manhã 4 68. 58 89.3 Tarde 3 74. 9 86. Total 55 7.7 77 87.

A tabela mostra o número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados com os três touros que apresentaram maior número de informações de acordo com os tratamentos no Setor da Fazenda. TABELA. Número de inseminações e taxas de concepção para o total dos três serviços realizados com os três touros que apresentaram maior número de informações de acordo com os tratamentos no Setor da Fazenda. Touros T T 5 73.3 33 87.9 5 8 7. 5 84.3 6 6 66.7 34 88. 3 9 66.7 4 5 8. 7. Demais touros 63.6 33 9. Total 55 7.9 77 87.8 Fazenda - Setor A tabela mostra o número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas pelas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos, no Setor da Fazenda. TABELA - Número de inseminações e médias das taxas de concepção pelas diferentes categorias animais, de acordo com os tratamentos, no Setor da Fazenda. Inseminações em T Inseminações em T Categorias Número de Animais Nulíparas 7 38 79. 36 83.3 Multíparas 37 7 8.9 98 86.7 Total 9 8 8.5 34 85.8 A tabela 3 mostra o número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas pelos dois inseminadores no Setor da Fazenda, de acordo com os tratamentos. Muito embora existam poucas informações do inseminador nesta etapa, observa-se que para o inseminador houve elevação de,6 pontos percentuais na taxa de concepção quando o mesmo descongelou as palhetas no T. TABELA 3- Número de inseminações e médias das taxas de concepção obtidas por dois inseminadores no Setor da Fazenda, de acordo com os tratamentos. Inseminadores T T 3 76 69.7 68 8.3 4 9 77.8 65, Total 85 7.6 88 78.4 A tabela 4 mostra o número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço, soma dos serviços e 3 e para o total de serviços realizados, de acordo com os tratamentos no Setor da Fazenda. TABELA 4. Número de inseminações e taxas de concepção ao primeiro serviço, soma dos serviços e 3 e para o total de serviços realizados, de acordo com os tratamentos no Setor da Fazenda. Serviços T T Primeiro 74 74.3 83 83. Serviços +3 34 97. 5 9. Total 8 8.5 34 85.8