42º Congresso Bras. de Medicina Veterinária e 1º Congresso Sul-Brasileiro da ANCLIVEPA - 31/10 a 02/11 de Curitiba - PR 1

Transcrição

1 1 IDENTIFICAÇÃO DA RESISTÊNCIA AOS BETA-LACTÂMICOS EM LEITE REFRIGERADO DA REGIÃO DE UMUARAMA IDENTIFICATION OF THE BETA-LACTAM RESISTANCE IN REFRIGERATED MILK IN UMUARAMA REGION CHARALO, AMANDA CARMEM 1, PAVAN, ANA CLAUDIA LEMES 1, SFACIOTTE, RICARDO ANTONIO PILEGI 2, VIGNOTO, VANESSA KELLY CAPOIA 3, WOSIACKI, SHEILA REZLER 4, RICKLI, MAX EMERSON 5. 1 Graduação em Medicina Veterinária, UEM Umuarama; 2 Doutorando da UDESC; 3 Laboratório de Microbiologia Animal, UEM Umuarama; 4 Departamento de Medicina Veterinária, UEM Umuarama; 5 Mestre em Zootecnia, UEM Umuarama. RESUMO Um dos mecanismos mais importantes de resistência aos antibióticos é a produção de beta-lactamases. Das 41 amostras, 5 apresentaram o gene blaz pela técnica PCR e através do disco difusão mostraram resistência à penicilina, sendo produtores de beta-lactamase. 23 amostras (56%) apresentaram bactérias gram-negativas, das quais quatro (17,4%) demonstraram ser produtoras de ESBL. Os resultados do presente trabalho demonstram a necessidade do acompanhamento do perfil de resistência bacteriana. Palavras-chaves: ESBL, Staphylococcus, PCR, blaz. ABSTRACT One of the major mechanisms of resistance to antibiotics is the production of beta-lactamase. Of the 41 samples, 5 showed the blaz 0988

2 2 gene by PCR using the disk diffusion and showed resistance to penicillin and beta-lactamase producers. 23 samples (56%) had gram-negative bacteria, four of which (17.4%) proved producing ESBL. The results of this study demonstrate the need for monitoring of bacterial resistance profile. Key-words: ESBL, Staphylococcus, PCR, blaz. INTRODUÇÃO A microbiota psicrotrófica contaminante do leite cru é composta por bactérias Gram-negativas e Gram-positivas (Pinto et al, 2006). Do ponto de vista da qualidade do leite, as bactérias psicrotróficas são o grupo que mais contribui para deterioração do leite (EMBRAPA, 2015). Os antimicrobianos utilizados em animais de produção contribuem em gerar cepas resistentes as quais podem ser transmitidas aos humanos pela ingestão de produtos de origem animal, levando risco à saúde pública (Zanette, 2010). Um dos mecanismos mais importantes de resistência aos antibióticos beta-lactâmicos é a produção de beta-lactamases, enzimas que hidrolisam o anel beta-lactâmico, impossibilitando assim sua atividade antimicrobiana, chamadas de beta lactamase de espectro estendido (ESBL), conferindo resistência à todos os beta-lactâmicos com exceção dos carbapenêmicos e cefamicinas (cefoxitina) (ANVISA, 2015). Os Staphylococcus resistentes à oxacilina (MRS) tornaram-se um importante problema clínico e epidemiológico nas últimas décadas. Como resultado, houve um aumento no uso de glicopeptídeos e finalmente a emergência de cepas com resistência (VRS) (Mimica e Berezin, 2006). 0989

3 3 Devido à importância da resistência bacteriana veiculadas em alimentos de origem animal, o objetivo deste trabalho foi identificar bactérias resistentes encontradas no leite refrigerado. MATERIAL E MÉTODOS Foram coletadas 41 amostras de leite cru de vaca de resfriadores da região de Umuarama. As amostras foram incubadas em caldo BHI (Brain Heart Infusion), sequencialmente inoculadas em ágar Nutriente. A identificação bacteriana foi realizada conforme ANVISA (2012). A detecção fenotípica de cepas multirresistentes de importância em saúde pública foi realizada por disco-difusão utilizando os seguintes antimicrobianos: para MRS, oxacilina, cefoxitina, penicilina e vancomicina; e para ESBL, a presença de halo fantasma entre amoxacilina+clavulonato e aztreonam, ceftazidima, cefotaxima, ceftriaxona e cefepime. Utilizou-se a técnica PCR nas bactérias identificadas como Staphylococcus spp, para detecção dos genes: blaz, meca e mecc. RESULTADOS E DISCUSSÃO Das 41 amostras, dez (24,4%) havia presença de Staphylococcus spp, dos quais três (30%) mostraram-se sensíveis à penicilina e cinco (50%) foram resistentes a penicilina além de apresentarem o gene blaz, sendo consideradas produtoras de beta-lactamase. Segundo Andrade et al (2000) os Sthaphylococcus isolados de leite de vacas com mastite quase sempre apresentam altos índices de resistência à penicilina. Guimarães et al (2012) ao analisarem 60 amostras de Staphylococcus spp. envolvidos em casos de mastite clínica e subclínica de bovinos e bubalinos do Distrito Federal identificaram o gene blaz em seis amostras 0990

4 4 (20%) de búfalas e uma amostra (3,30%) de origem bovina. Não houveram presença dos genes meca e mecc, assim como em Lúcio et al (2013), onde foram analisadas 100 cepas de Staphylococcus spp. procedentes de vacas com mastite clínica ou subclínica provenientes de propriedades da microrregião de Guaranhuns-PE. Enquanto Guimarães et al (2012) identificaram o gene meca em uma (3,30%) das amostras bubalinas e em três (10,00%) das bovinas. Pribul et al (2011) ao pesquisarem o gene meca em amostras de leite bovino procedentes do Rio de Janeiro encontraram 21 (70,00%) amostras positivas. No presente trabalho, 23 amostras (56%) apresentaram bactérias gramnegativas, das quais quatro (17,4%) demonstraram ser produtoras de ESBL, sendo identificadas como: Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Pseudomonas spp., Serratia spp. Cinco amostras (12,2%) houve crescimento de fungos e em três (7,3%) a presença de Streptococcus spp. CONCLUSÕES Os resultados do presente trabalho demonstram a necessidade do acompanhamento do perfil de resistência bacteriana, por essa se modificar ao longo do tempo, sendo de suma importância à saúde humana e animal. REFERÊNCIAS ANDRADE, M.A.; DIAS FILHO, F. C.; MESQUITA, A. J.; ROCHA, P. T. Sensibilidade in vitro de Staphylococcus aureus isolados de amostras de leite de vacas com mastite subclínica. Ciência Animal Brasileira, v.1, n.1, p.53-57, 2000 ANVISA. Antimicrobianos: Base Teóricas e Uso Clínico Disponível em: 0991

5 5 < trole/opas_web/modulo3/gramn_lacta4.htm>. Acesso em: 23 jun BRITO, Maria Aparecida. EMBRAPA, Brasília. Tipos de Microrganismos. Disponível em: < 2_ html>. Acesso em: 22 jun GUIMARÃES, G. et al. Caracterização fenotípica, produção de biofilme e resistência aos antimicrobianos em isolados de Staphylococcus spp. obtidos de casos de mastite em bovinos e bubalinos. Pesquisa Veterinária Brasileira, v.32, n.12, p , LÚCIO, É. C. et al. Pesquisa dos genes meca e blaz em cepas de Staphylococcus spp. isoladas de mastite bovina na microrregião de Garanhuns. In: JORNADA DE ENSINO, PESQUISAE EXTENSÃO, 13., MIMICA, M. J.; BEREZIN, E. N. Staphylococcus aureus resistente à vancomicina: um problema emergente. Arq. Med. Hosp. Fac. Cienc. Med. Santa Casa, São Paulo. 2006; 51(2):52-6. PINTO, C. L. O.; MARTINS, M. L.; VANETTI, M. C. D. Qualidade microbiológica de leite cru refrigerado e isolamento de bactérias psicrotróficas proteolíticas. Ciênc. Tecnol. Aliment., Campinas, p , jul PRIBUL, B.R. et al. Resistência bacteriana e ação das bacteriocinas de Lactobacillus spp em Staphylococcus aureus isolados de mastite bovina. Arquivos Brasileiros de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.63, n.3, p , 2011 ZANETTE, E.; SCAPIN, D.; ROSSI, E. M. Suscetibilidade antimicrobiana de Staphylococcus aureus isolados de amostras de leite de bovinos com 0992

6 6 suspeita de mastite. Unoesc & Ciência Acbs, Joaçaba, v. 1, n. 1, p.65-70, jan