ABX Pentra Lactic Acid
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- Aníbal Wagner de Oliveira
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1 2015/09/09 A93A01294BPT A11A ml 10 x 10 ml Pentra C400 Reagente de diagnóstico para a determinação quantitativa in-vitro de Ácido Láctico no plasma por colorimetria. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Instruções do teste Plasma: Lact 1.xx Utilização O reagente de diagnóstico destina-se à determinação quantitativa in vitro de ácido láctico no plasma por colorimetria. As medições de ácido láctico que avaliam o estado ácido-base são utilizadas no diagnóstico e tratamento da acidose láctica (acidez anormalmente elevada do sangue). Interesse clínico (1) O ácido lático é o produto final da glicólise anaeróbia e representa a principal fonte de energia em determinados tecidos. É considerado o melhor marcador do estado da oxigenação nos tecidos. É principalmente utilizado para a reanimação no tratamento de estados de choque, seja hipovolémico, toxi-infeccioso ou cardiogénico, bem como para o tratamento de acidoses respiratórias neonatais. Esta determinação também é utilizada na medicina desportiva para melhorar o desempenho dos atletas. Método (2, 3, 4) Método enzimático colorimétrico. Método de Trinder O lactato é um metabolito intermédio de glicólise envolvido na manutenção do valor de ph do sangue. A lactato oxidase aciona a libertação de peróxido de hidrogénio, que reage com a 4-aminoantipirina e ESPAS, formando um complexo colorido na presença de peroxidase. A intensidade da coloração é proporcional à quantidade de lactato presente na amostra. Lactato oxidase Lactato + O 2 Piruvato + H 2 O 2 Peroxidase 2H 2 O 2 + 4AAP + ESPAS Quinoneimina + 4H 2 O (4 AAP = 4-aminoantipirina, ESPAS = N-etil-N-sulfopropilm-anisidina) Reagentes é liofilizado. Reagente 1: Tampão de fosfato ph 7,50 ESPAS 100 mmol/l 1 mmol/l Azida sódica 0,05% Hidróxido de sódio 0,0009% Reagente 2: Lactato oxidase Peroxidase 4-aminoantipirina 450 U/L Albumina de bovino 0,3% 2000 U/L 0,40 mmol/l deve ser utilizado de acordo com a nota informativa deste reagente. O fabricante não se responsabiliza pelo seu desempenho caso seja utilizado de outro modo. 1 / 5
2 Preparação no tabuleiro 1. Dissolva o reagente 2 em 10 ml de reagente 1, conforme indicado no frasco do reagente Volte a tapar o frasco e obtenha uma mistura homogênea, invertendo o frasco suavemente. A solução estará pronta a utilizar após 15 minutos. 3. Entorne o volume da solução necessário para um dia de actividade num frasco de reagente de 15 ou 10 ml. 4. Coloque o frasco numa posição disponível do tabuleiro. Reagente 5. Em caso de formação de espuma, retire-a com uma pipeta de plástico. 6. Coloque o suporte de reagentes no compartimento de refrigeração de reagentes Pentra C400. Preparação na cassete 6. Coloque a cassete no compartimento de refrigeração do reagente Pentra C400. Calibrador Para calibrar, utilize: Multical, Ref. A11A01652 (não incluído) 10 x 3 ml (liofilizado) Controlo Para controlo de qualidade interno, utilize: N Control, Ref. A11A01653 (não incluído) 10 x 5 ml (liofilizado) P Control, Ref. A11A01654 (não incluído) 10 x 5 ml (liofilizado) Cada controlo deve ser analisado diariamente e/ou após a calibração. A frequência dos controlos e os intervalos de confiança devem estar de acordo com as normas laboratoriais e com as diretivas específicas de cada país. Deve cumprir as diretrizes federais, estaduais e locais relativamente ao teste de controlo de qualidade dos materiais. Os resultados devem ficar dentro do intervalo dos limites de confiança definidos. Cada laboratório deve estabelecer o procedimento a seguir se os resultados excederem esses limites de confiança. 1. Dissolva o reagente 2 em 10 ml de reagente 1, conforme indicado no frasco do reagente Volte a tapar o frasco e obtenha uma mistura homogênea, invertendo o frasco suavemente. A solução estará pronta a utilizar após 15 minutos. 3. Identifique a cassete, usando os adesivos de cada reagente, com código de barras (604). 4. Transfira o reagente necessário para um dia de atividade para o compartimento 1 (capacidade de 30 ml) da cassete 30/10 fornecida (ver o diagrama que se segue). O compartimento 2 da cassete não será utilizado. Materiais necessários mas não fornecidos Analisador automático de química clínica: Pentra C400 Calibrador: Multical, Ref.A11A01652 Controlos: N Control, Ref.A11A01653, e P Control, Ref. A11A01654 Equipamento standard de laboratório. Amostra (5) Plasma em heparina de lítio. Os anticoagulantes que não estão presentes na lista não foram testados pela HORIBA Medical e, portanto, não são recomendados para utilização com este ensaio. 5. Em caso de formação de espuma, retire-a com uma pipeta de plástico. 2 / 5
3 Estabilidade: A C: 3 dias A 4-8 C: 3 dias A -20 C: 3 dias Intervalo de referência (6) Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios intervalos de referência. Os valores aqui fornecidos são utilizados apenas como linhas de orientação. 0,50-2,20 mmol/l (4,5-20 mg/dl). Armazenamento e Estabilidade Os reagentes, nos frascos por abrir, mantêm-se estáveis até à data de validade indicada no rótulo se forem armazenados entre 2-8 C. Uma vez reconstituído, o permanece estável por: 8 horas a C 7 dias a 2-8 C Os frascos de reagente são descartáveis e devem ser eliminados de acordo com os requisitos da legislação local. Consulte a MSDS (folha de dados de segurança do material) relacionada com o reagente. Não utilizar o produto se houver evidência visível de deterioração biológica, química ou física. É da responsabilidade do utilizador verificar se este documento se aplica ao reagente utilizado. Desempenho do Pentra C400 Os dados de desempenho enunciados em seguida representam o desempenho nos sistemas HORIBA Medical. Número de testes: aproximadamente 260 testes Volume da amostra: 3,0 µl/teste Limite de deteção: O limite de detecção é determinado de acordo com o protocolo Valtec (7) e equivale a 0,03 mmol/l (0,3 mg/dl). Exatidão e Precisão: Repetibilidade (precisão no mesmo ciclo) Gestão de resíduos É favor consultar os requisitos da legislação local. Este reagente contém menos de 0,1% de azida sódica como conservante. A azida sódica pode reagir com o chumbo e o cobre, formando azidas de metal explosivas. Precauções gerais a Este reagente destina-se apenas a diagnóstico in vitro profissional. Sujeito a prescrição. Este reagente é classificado como não perigoso de acordo com a regulamentação (EC) N.1272/2008. Evite qualquer contato entre o reagente e a pele, para poder evitar a contaminação pelo lactato presente no suor. Não engolir. Evitar o contacto com a pele e com as membranas mucosas. Cumpra as normas preventivas de laboratório relativas à utilização. 3 amostras de concentrações baixa, média e alta e 2 controlos são testados 20 vezes de acordo com as recomendações especificadas no protocolo Valtec (7). controlo 1 controlo 2 mmol/l Valor médio CV % mg/dl 1,62 14,6 0,6 3,24 29,2 0,7 Amostra 1 1,05 9,5 0,8 Amostra 2 3,47 31,2 0,4 Amostra 3 7,56 68,1 0,5 Reprodutibilidade (precisão total) 2 amostras (níveis médio e elevado) e 2 controlos são testados em duplicado durante 20 dias (2 séries por dia) a Modificação: modificação das precauções gerais. 3 / 5
4 de acordo com as recomendações incluídas no protocolo CLSI (NCCLS), EP5-A (8). controlo 1 controlo 2 mmol/l Valor médio CV % mg/dl 1,67 15,1 1,16 3,31 29,8 1,16 Amostra 1 3,48 31,4 1,29 Amostra 2 7,41 66,8 1,65 Intervalo de medição: O ensaio confirmou uma gama de medição de 0,03 a 13,3 mmol/l (0,3 a 120 mg/dl), com pós-diluição automática de até 39,9 mmol/l (360 mg/dl). A linearidade do reagente foi avaliada para até 13,3 mmol/l (120 mg/dl), de acordo com as recomendações incluídas no protocolo CLSI (NCCLS), EP6-A (9). Correlação: 100 amostras de pacientes (plasma) estão correlacionadas com um reagente já comercializado tomado como referência de acordo com as recomendações incluídas no protocolo CLSI (NCCLS), EP9-A2 (10). A equação da linha alométrica obtida por meio do procedimento de regressão Passing-Bablock (11) é: Y = 1,04 X + 0,04 (mmol/l) Y = 1,04 X + 0,36 (mg/dl) com um coeficiente de correlação r 2 = 0,9986. Interferências b : Hemoglobina: Não se observa influência significativa até 290 µmol/l (500 mg/dl). Triglicéridos: Não se observa influência significativa até uma concentração de Intralipid (representativa de lipémia) de 7 mmol/l (612,5 mg/dl). Bilirrubina total: Não se observa influência significativa até 615 µmol/l (36,0 mg/dl). Bilirrubina directa: Não se observa influência significativa até 513 µmol/l (30,0 mg/dl). N-Acetilcisteina (NAC): Nos pacientes tratados com N-Acetilcisteina (NAC) para overdose de Paracetamol pode ser gerado um resultado baixo falso. Outros limites são fornecidos por Young através de uma lista de medicamentos e variáveis pré-analíticas conhecidas que afectam esta metodologia (12, 13). Estabilidade de calibração: O reagente é calibrado no Dia 0. A estabilidade de calibração é verificada testando 2 amostras de controlo. A estabilidade da calibração é de 1 semana. Nota: Recomenda-se uma recalibração quando os lotes de reagente mudam e quando os resultados do controlo de qualidade ficam fora do intervalo de valores estabelecido. Instruções do teste: 1.xx Fator de conversão: mmol/l x 9,01 = mg/dl Bibliografia 1. Thomas L. Lactate. In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, (1998): Trinder P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative oxygen acceptor. Ann. Clin. Biochem. (1969) 6: Barhan D, Trinder P. An improved colour reagent for the determination of blood glucose by the oxidase system. Analyst (1972) 97: Olson GF, Optimal Conditions for the Enzymatic Determination of L-, Clin. Chem. (1962) Feb, 8: Guder WG, Zawta B. The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the Patient to the Laboratory. 1 st Ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B. (WHILEY-VCH, Darmstadt, Germany) (2001): Toffaletti J, Hammes ME, Gray R, Lineberry B, Abrams B. Lactate measured in diluted and undiluted whole blood and plasma: comparison of methods and effect on hematocrit. Clin. Chem. (1992) 38: b Modificação: alteração de interferências. 4 / 5
5 7. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 9. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 10. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 11. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: / 5
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