REVISTA ELETRÔNICA ESTÁCIO SAÚDE - ISSN (on line)

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1 ESTUDO COMPARATIVO ENTRE O MÉTODO DE FAUST E O MÉTODO IMUNOCROMATOGRÁFICO PARA DETECÇÃO QUALITATIVA DE GIARDIA LAMBLIA EM AMOSTRAS DE FEZES ESTUDIO COMPARATIVO DE LA FORMA DE FAUSTO Y EL MÉTODO DE DETECCIÓN INMUNOENSAYO CUALITATIVO PARA GIARDIA LAMBLIA EN MUESTRAS DE HECES COMPARATIVE STUDY OF THE METHOD OF FAUST AND THE METHOD OF QUALITATIVE DETECTION IMMUNOASSAY FOR GIARDIA LAMBLIA IN STOOL SAMPLES ROSILENE LINHARES DUTRA 1 ; ADOLFO HARUO KOGA 2 ; MÁRCIO FRITZEN 3 ; CRISTIANE MANFÉ 4 1. Doutorado em Química pela Universidade Federal de Santa Catarina. Docente do Centro Universitário Estácio de Sá de Santa Catarina, Brasil. 2. Mestrado em Biotecnologia pela Universidade Federal de Santa Catarina. Docente do Centro Universitário Estácio de Sá de Santa Catarina, Brasil. 3. Doutorado em Ciências Biológicas (Biologia Molecular) pela Universidade Federal de São Paulo. Docente e Coordenador do Curso de Farmácia do Centro Universitário Estácio de Sá de Santa Catarina, Brasil. 4. Acadêmica do Curso de Farmácia do Centro Universitário Estácio de Sá de Santa Catarina, Brasil. RESUMO As doenças parasitárias ainda são consideradas de alta prevalência, principalmente em países com níveis de desenvolvimento e condições de vida precária. Neste contexto verifica-se uma grande quantidade de crianças que são acometidas, principalmente pelas enfermidades gastrointestinais. O objetivo dessa pesquisa foi realizar um estudo comparativo entre o Método de Faust e o Método Imunocromatográfico usando o Kit RIDA Quick Giardia R-Biopharm para detecção qualitativa de Giárdia lamblia em 8 (oito) amostras de fezes selecionadas aleatoriamente e cedidas por um laboratório situado no município de São José SC. Foram selecionadas aleatoriamente 8 (oito) amostras de fezes positivas para enteroparasitoses e negativas, gentilmente cedidas por um laboratório de Análises Clínicas localizados no município de São José SC. A pesquisa de parasitas intestinais foi feita pelos métodos de Hoffmann, Pons e Janer (sedimentação espontânea), método de Faust (Centrifugo-flutuação) e o método imunocromatográfico de detecção qualitativa de antígeno específico de Giárdia lamblia em fezes. Todos os enteroparasitas encontrados nas amostras foram confirmadas pelo método de Faust e apenas a amostras 4 (quatro) foi detectado qualitativamente o antígeno específico de Giárdia lamblia em fezes por método imunocromatográfico, onde foi. observado tarja vermelha teste positivo para Giárdia lamblia. RESUMEM Las enfermedades parasitarias todavía se consideran alta prevalencia, especialmente en países con niveles de desarrollo y las condiciones de vida precarias. En este contexto, hay una gran cantidad de niños que se ven afectados principalmente por enfermedades gastrointestinales. El objetivo de esta investigación fue realizar un estudio comparativo entre el método de Faust y el método de inmunoensayo utilizando el kit RIDA Giardia Rápida - R-Biopharm para la detección cualitativa de Giardia lamblia en ocho (8) muestras de heces seleccionada al azar y distribuidos por un laboratorio ubicada en São José - SC. SC - al azar de ocho (8) se seleccionaron muestras de heces para parásitos intestinales positivos y negativos, amablemente proporcionados por un laboratorio clínico ubicado en São José. Un estudio de los parásitos intestinales se realizó por los métodos de Hoffmann, Pons y Janer (sedimentación), método de Faust (flotación) y el método inmunocromatográfico específico para la detección cualitativa del antígeno Giardia lamblia en heces. Los parásitos intestinales se encuentran en todas las muestras fue confirmada por el método de muestras Faust y sólo cuatro (4) se detectó cualitativamente Giardia lamblia antígeno específico en las heces por el método 35

2 inmunocromatográfico, que se observó prueba raya roja positivo para Giardia lamblia. ABSCTRACT Parasitic diseases are still considered high prevalence, especially in countries with levels of development and precarious living conditions. In this context there is a lot of children who are affected mainly by gastrointestinal diseases. The objective of this research was to conduct a comparative study between the method of Faust and the immunoassay method using the kit RIDA Quick Giardia - R-Biopharm for qualitative detection of Giardia lamblia in eight (8) stool samples randomly selected and assigned by a laboratory located in São José - SC. SC - randomly eight (8) samples of feces for intestinal parasites positive and negative, kindly provided by a Clinical Laboratory located in São José were selected. A survey of intestinal parasites was made by the methods of Hoffmann, Pons and Janer (sedimentation), Faust method (flotation) and specific immunochromatographic method for qualitative detection of Giardia lamblia antigen in stool. Intestinal parasites found in all samples was confirmed by the method of Faust samples and only four (4) was qualitatively detected Giardia lamblia specific antigen in the stool by immunochromatographic method, which was observed red stripe test positive for Giardia lamblia. DESCRITORES: Enteroparasitoses intestinais. Giárdia lamblia. Fezes. DESCRIPTORES: Enteroparasitosis intestinal. Giardia lamblia; Heces. DESCRIPTORS: Intestinal Enteroparasitosis. Giardia lamblia. Feces. INTRODUÇÃO 36 No Brasil, O parasita intestinal ainda representa um sério problema de saúde pública. Em comunidades das periferias dos centros urbanos, em torno de 50% dos parasitológicos de fezes são positivos para um ou vários parasitas, contrastando com pacientes de classe média de áreas urbanas bem saneadas, onde o percentual cai de 1 a Revista Eletrônica Estácio Saúde - Volume 3, Número 2, % 1. Conforme a Organização Pan-Americana de Saúde, as geohelmintoses são altamente freqüentes na América Latina, com prevalência estimada de 30%, mas alcançando 50% em comunidades vulneráveis e até 95% em algumas tribos indígenas 2-5. O censo realizado em 2010 no Brasil identificou um grave problema, foi observado que a coleta de resíduos e a cobertura dos serviços de abastecimento público de água atendiam três quartos da população brasileira. No entanto, a cobertura dos serviços de rede geral de esgotamento sanitário, supria aproximadamente a metade dessas populações 6-7. Portanto a má disposição dos dejetos e a indisponibilidade de água de boa qualidade e também o inadequado destino do lixo e em conseqüência um ambiente poluído, são alguns dos importantes fatores que contribuem para a incidência elevada de doenças parasitárias. A biodiversidade de enteroparasitoses em escolares é um indicador da falta de informação da população sobre os hábitos e condições propícias para a transmissão destes parasitas 8. Além disso, tomando a escola como centralizadora dos estudos de saúde e educação, podem-se relatar os aspectos epidemiológicos das comunidades ao redor das mesmas, observando os possíveis fatores de risco. A escola também poderá ser um centro de debates e de informação para a população periférica, envolvendo as crianças como agentes multiplicadores de saúde 9. Uma das principais entereroparasitoses em crianças é causada pela A Giárdia lamblia que é um parasita flagelado, que após a ingestão de cistos

3 causam uma infecção no intestino delgado humano. Devido à sua grande presença mundial, a Giárdia lamblia é uma importante causa de doenças diarréicas, especialmente em questões da medicina de viagem e em crianças. A giardíase é uma infecção intestinal causada pelo protozoário Giárdia lamblia e a transmissão é fecal-oral, podendo ocorrer surtos de infecção em populações infantis. Este parasito é mais freqüente em crianças e em doentes com síndrome imunodeficiência adquirida, fibrose cística e imunodeficiências humorais e déficit seletivo de IgA 10. A doença pode se comportar de maneira assintomática ou nas formas agudas por dor abdominal ou diarreia e crônicas podendo levar a anorexia, distensão abdominal e má-absorção 10. Por sua vez, a má-absorção é causa de anemia ferropriva, devido a dificuldade da ingestão de ferro e das perdas de hemácias pelas fezes 11. O diagnóstico de giardíase faz-se pela detecção de trofozoítos ou cistos de Giárdia nas fezes pelo método de Faust que consiste no centrífugo-flutuação em sulfato de zinco, ou pela pesquisa de antígenos de Giárdia por ELISA (enzyme-linked immunoassay) 12. Andrade et al. 13 constatou em seus estudos que diante das elevadas taxas de parasitismo observadas, ficou evidenciada a importância de se desencadear medidas de prevenção e controle específicas. Observou a importância dos responsáveis pelas crianças receberam informações sobre as principais formas de transmissão das parasitoses intestinais por meio de palestras realizadas no centro de educação infantil estudado. No caso das crianças deveriam ser desenvolvidas. atividades lúdicas com o intuito de incentivar lavagem das mãos e das frutas, corte das unhas, cabelo, escovação dos dentes entre outras. Sugere-se que as educadoras promovam brincadeiras instrutivas com o intuito de despertar a educação sanitária nas crianças e os mesmos levarem seus conhecimentos para casa. O presente trabalho de pesquisa teve como objetivo fazer um estudo comparativo entre o método de Faust e o método imunocromatográfico para detecção qualitativa de Giárdia lamblia em oito amostras de fezes selecionadas aleatoriamente e cedidas por um laboratório situado no município de São José SC. METODOLOGIA A presente pesquisa de natureza básica por método experimental teve por objetivo comparar duas metodologias utilizadas para detecção qualitativa de enteroparasitoses causadas por Giárdia lamblia em amostras de fezes. Para isso foram selecionadas aleatoriamente oito amostras de fezes onde quatro eram positivas e quatro eram negativas para enteroparasitoses, gentilmente cedidas por um laboratório de análises clínicas localizados no município de São José SC. A pesquisa microscópica de parasitas intestinais foi feita pelos métodos de Hoffmann, Pons e Janer (sedimentação espontânea) 14 e o método de Faust 14. Para o estudo comparativo foi utilizado o método de detecção qualitativa de antígeno específico de Giárdia lamblia em fezes por imunocromatografia, onde a tira do Kit RIDA 37

4 Quick Giardia R-Biopharm contem anticorpos específicos dispostos contra Giardia lamblia acopladas a partículas vermelhas. No caso positivo o antígeno se liga, e se une às tiras de captação específicas. Dependendo do antígeno disponível na amostra é então visível uma tarja azul e/ou vermelha, como pode ser observado na Ilustração 1. Ilustração 1: Teste detecção qualitativa de antígeno específico de giárdia lamblia em fezes por método imunocromatográfico (a), diluição da amostra e (b) tarja vermelha teste positivo para Giárdia lamblia (a) A pesquisa foi realizada no laboratório didático de Análises Clínicas do Centro Universitário Estácio de Sá de Santa Catarina (Laboratório 2). Foram utilizadas 3 metodologias. 1. Sedimentação espontânea 14 - para pesquisas de ovos. 2. Método de Faust 14 para cistos e trofozoítos. 3. Método imunocromatográfico específico para antígeno de Giárdia lamblia Os resultados estão mostrados na Tabela 1 (ANEXO). Conforme mostra a Tabela 1, todos os resultados obtidos no Laboratório 2 conferem com os encontrados no Laboratório 1. Todos os enteroparasitas encontrados nas amostras foram confirmadas pelo método de Faust e apenas a amostra quatro foi detectado qualitativamente o antígeno específico de Giárdia lamblia em fezes por método imunocromatográfico, nesta amostra foi observado tarja vermelha que confere o teste positivo para giárdia lamblia. O resultado está mostrado na Ilustração 2. (b) Fonte: Dados primários (2014). Ilustração 2: Resultado positivo para detecção qualitativamente do antígeno específico de Giárdia lamblia na amostra 4 (quatro) pelo método imunocromatográfico ANALISE DOS DADOS Foi realizado um estudo comparativo com oito amostras aleatórias de fezes gentilmente cedidas pelo Laboratório Santa Luzia de São Jose SC (Laboratório 1). Fonte: Dados primários (2014). 38 Revista Eletrônica Estácio Saúde - Volume 3, Número 2, 2014.

5 O método utilizado para diagnosticar a giardíase mais usada é a comprovação microscópica de cistos nas fezes, sendo para isso necessário utilizar pessoal experiente, e este método exige um período de tempo mais longo para que o laudo seja liberado. Um método alternativo importante ao método microscópico para a comprovação de Giárdia lamblia é o teste rápido imunocromatográfico, que na sua sensibilidade e especificidade através da tilização de anticorpos monoclonais, é igual aos exames microscópicos. A execução é fácil e rápida e não é necessário utilizar pessoal com formação microbiológica. CONCLUSÃO O método imunocromatográfico para detecção qualitativa de antígeno específico de giárdia lamblia em fezes mostrou-se eficiente, rápido e simples. É um teste Rápido que, na sua sensibilidade, e não depende dos organismos intactos (cistos ou trofozoitos) nas amostras de fezes. REFERENCIAS 1. Ferreira MU, Ferreira CS, Monteiro CA. Tendência secular das parasitoses intestinais na infância na cidade de São Paulo ( ). Rev Saude Publica. 34(6):73-82, Morrone FB, Carneiro JA, dos Reis C, Cardozo CM, Ubal C, de Carli GA. Study of enteroparasites infection frequency and chemotherapeutic agents used in pediatric patients in a community living in Porto Alegre, RS, Brazil. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 46:77-80, Carvalho-Costa FA, Gonçalves AQ, Lassance SL, Silva Neto LM, Salmazo CA, Bóia MN. Giardia lamblia and other intestinal parasitic infections and their relationships with nutritional status in children in Brazilian Amazon. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 49:147-53, Korkes F, Kumagai FU, Belfort RN, Szejnfeld D, Abud TG, Kleinman A, et al. Relationship between intestinal parasitic infection in children and soil contamination in an urban slum. J Trop Pediatr. 55:42-5, Peréz Cordón G, Cordova Paz Soldan O, Vargas Vásquez F, Velasco Soto JR, Sempere Bordes L, Sánchez Moreno M, et al. Prevalence of enteroparasites and genotyping of Giardia lamblia in Peruvian children. Parasitol Res. 103:459-65, Brasil, Ministério da Saúde Secretaria de Vigilância da Saúde. Saúde Brasil 2004 Uma Análise da Situação de Saúde. Brasília, Ferreira H; Lala ERP; Monteiro MC; et al. Estudo Epidemiológico Localizado da Freqüência e Fatores de Risco Para Enteroparasitoses e sua Correlação com o Estado Nutricional de Crianças em Idade Pré - escolar. Rev. UEPG Ci. Biol. Saúde, Ponta Grossa. 12(4): 33-40, Armendoeira MRR et al. Estudo das enteroparasitoses em escolares da Rede Pública de Cascadura Rio de Janeiro. Revista Souza Marques. 1, Senna Nunes MS et al. Ações educativas para a prevenção de parasitoses aplicadas em escolas no município de Nova Iguaçu, RJ.,Brasil. XV Congresso Latino-americano de Parasitologia, São Paulo, out., Feldman M, Friedman LS, Brandt LJ. Sleisenger and Fordtran s gastrointestinal and iver disease: pathophysiology/diagnosis/management. 9th ed. Philadelphia: Saunders-Elsevier , Fauci AS, Braunwald E, Kasper DL, Hauser SL, Longo DL, Jameson JL. Harrison s principles of internal medicine. 17th ed. New York: McGraw Hill , Mandell GL, Bennett JE, Dolin R. Mandell. Douglas and Bennett s principles and practice of infectious diseases. 7th ed. Philadelphia: ChurchillLivingstone; Andrade F. de et al. Parasitoses intestinais em um centro de educação infantil público do município de Blumenau (SC), Brasil, com ênfase em Cryptosporidium spp e outros protozoários. Revista de Pato-logia Tropical, Blumenau. 37( 4): , NeveS DP. Parasitologia Humana. 10.ed. São Paulo:Atheneu,

6 ANEXO Tabela 1: Resultados obtidos das amostras aleatórias de fezes analisadas Amostras Resultados Resultados Laboratório 2 Laboratório Método de Sedimentação Imunocromatografico 1 Faust espontânea 1 Endolimax Endolimax nana Endolimax nana negativo nana 2 Negativo Negativo Negativo negativo 3 Negativo Negativo Negativo negativo 4 Giárdia lamblia Giárdia lamblia Giárdia lamblia positivo 5 Endolimax Endolimax nana Negativo negativo nana 6 Negativo Negativo Negativo negativo 7 Entamoeba Entamoeba coli Entamoeba coli negativo coli 8 Entamoeba histolytica Entamoeba histolytica Entamoeba histolytica Negativo Fonte: Dados primários (2014). 40 Revista Eletrônica Estácio Saúde - Volume 3, Número 2, 2014.