ScanGel Monoclonal ABO/RH Cards Cards
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- Kléber Festas Freire
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1 ScanGel Monoclonal ABO/RH Cards Cards GEL FORMULADO COM REAGENTES MONOCLONAIS DE ORIGEM MURINA OU HUMANA Prova directa ABO. Determinação dos Ag RH1 IVD Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a um sistema de garantia de qualidade, desde a recepção das matérias primas até à comercialização dos produtos acabados. Cada lote de produto acabado é objecto de um controlo de qualidade, sendo comercializado apenas quando em conformidade com os critérios de aceitação. A documentação relativa à produção e ao controlo de cada lote é conservada pelo fabricante. 41
2 I - UTILIZAÇÃO E PRINCÍPIO DO TESTE Esta card é estritamente reservada a uso profissional em diagnóstico in vitro. Para prova directa ABO e a determinação dos antigénios RH1 (D), o teste combina os princípios de aglutinação e filtração em gel. A reacção é obtida e lida após centrifugação de microtubos especialmente concebidos, cheios de gel impregnado do reagente específico do antigénio eritrocitário a determinar. A suspensão de glóbulos vermelhos é depositada no poço de cada microtubo e imediatamente centrifugada. Os glóbulos vermelhos não aglutinados concentram-se no fundo do microtubo, enquanto que os aglutinados são retidos à altura do gel, consoante a sua dimensão. A posição no gel determina a intensidade da reacção II - CARACTERÍSTICAS DOS REAGENTES Os três primeiros microtubos da card ScanGel Monoclonal ABO/RH contêm, cada um, um gel impregnado de um reagente monoclonal de origem murina, respectivamente de especificidade anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) e anti-abo3 (AB). Estes anticorpos são produzidos a partir dos seguintes clones : Anti-ABO1 (A) : 15750F7 Anti-ABO2 (B) : X9 Anti-ABO3 (AB) : AB5-63A5A2/X9 O quarto e o quinto microtubos contêm, cada um, um gel impregnado de um reagente monoclonal de origem humana, respectivamente de especificidade anti-rh1 (D) e anti-rh1, 2, 3 (DCE). Estes anticorpos são produzidos a partir dos seguintes clones : Anti-RH1 (D) : B9A4-B2A6A6A1A1 Anti-RH1, 2, 3 (DCE) : T3D2F6/MS24/MS260 O sexto microtubo contém o gel sem anticorpo e corresponde ao controlo (Ctl). Estes reagentes contêm azida de sódio (< 0,1%) como conservante. O código do produto e o número de cards por embalagem são mencionados no rótulo da embalagem. 42
3 III - CONSERVAÇÃO - VALIDADE A data limite de utilização e as condições de armazenamento são indicados na embalagem. As cards devem ser conservados à temperatura ambiente de +15 C a +25 C. As cards devem ser armazenados verticalmente, ao abrigo de qualquer fonte de calor e num local com reduzida variabilidade de temperatura e higrométria. IV - ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES A fiabilidade dos resultados depende da execução correcta das seguintes Boas Práticas de Laboratório : Não utilizar reagentes que excedam o prazo de validade indicado no rótulo. Não utilizar cards que apresentem sinais de secagem, bolhas ou o selo de vedação danificado. Os reagentes presentes nos microtubos são diferentes, assim é essencial tomar precauções por forma a evitar contaminação entre os microtubos e, particularmente, durante a remoção da tira protectora de alumínio bem como durante as fases de distribuição de reagentes. Utilizar uma ponta de pipeta diferente para cada amostra. Verificar a precisão e o bom funcionamento das pipetas e outros equipamentos. Usar luvas e óculos de protecção durante a manipulação de reagentes e de amostras. Nunca pipetar directamente para a boca. Evitar derramamentos. Em caso de derramamento, lavar por meio de 12 Cl lixívia diluída a 1/10, e limpar com papel absorvente. O material utilizado para limpar deverá ser eliminado num recipiente para resíduos contaminados. Os consumíveis e outros produtos que tenham estado em contacto com amostras ou reagentes contendo material de origem humana, devem ser eliminados depois da sua descontaminação. As fichas de segurança podem ser adquiridas a pedido. V - COLHEITA E TRATAMENTO DAS AMOSTRAS O sangue deve ser assepticamente recolhido num tubo sem ou com anti-coagulante (EDTA, CPD). A análise deve ser realizada o mais brevemente possível após a colheita. As amostras que não puderem ser analisadas rapidamente deverão ser conservadas a uma temperatura entre +2 C e +8 C e submetidas a análise nas 48 horas seguintes. Em nenhum caso deverá ser visível hemólise. Não aquecer as amostras. 43
4 VI - TÉCNICAS Material fornecido Cards ScanGel Monoclonal ABO/RH Outros materiais necessários mas não fornecidos Meio de suspensão de glóbulos vermelhos ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml IH QC : Controlo serológico de grupo sanguíneo IH QC 4 x 6 ml Centrifugadora : ScanGel Centrifuge Pipetas automáticas ou semi-automáticas Pontas de pipeta Tubos descartáveis Recipiente para resíduos de risco biológico Lixívia Luvas de látex Papel absorvente Óculos de protecção Controlos Testemunhos positivo e negativo : glóbulos vermelhos comprovadamente positivos e negativos para o antigénio estudado, testados simultaneamente com os glóbulos vermelhos da amostra a analisar, para validar a actividade própria do reagente. IH QC : Controlo serológico de grupo sanguíneo. Procedimento O procedimento deve ser estritamente seguido. Todos os reagentes devem ser equilibrados à temperatura ambiente antes da utilização. Por centrifugação separar o soro ou o plasma dos glóbulos vermelhos da amostra a analisar. VI.1 - Suspensão em ScanLiss a) Preparação extemporânea de uma suspensão de glóbulos vermelhos 1% em ScanLiss Distribuir 1 ml de ScanLiss num tubo descartável identificado. Adicionar 10 μl de fundo globular. Misturar. A suspensão de glóbulos vermelhos está pronta a ser utilizada. 44
5 b) Técnica 1. Identificar a card pelo nome ou número de amostra correspondente. Retirar cuidadosamente a lingueta de alumínio dos cards para evitar contaminações entre cavidades. Ressuspender as hemácias antes da sua utilização. 2. Distribuir 50 μl de suspensão globular no poço de cada microtubo da card. 3. Centrifugar 10 minutos. 4. Ler as reacções. VI.2 - Suspensão em ScanSol a) Preparação extemporânea de uma suspensão de glóbulos vermelhos 5% em ScanSol Distribuir 0,5 ml de ScanSol num tubo descartável identificado. Adicionar 25 μl de fundo globular. Misturar. A suspensão de glóbulos vermelhos está pronta a ser utilizada. b) Técnica 1. Identificar a card pelo nome ou número de amostra correspondente. Retirar cuidadosamente a lingueta de alumínio dos cards para evitar contaminações entre cavidades. Ressuspenda as hemácias antes da sua utilização. 2. Distribuir 10 μl de suspensão globular no poço de cada microtubo da card. 3. Centrifugue imediatamente 10 minutos na ScanGel Centrífuge. A diferença entre o fim da distribuição e o início da centrifugação não deve exceder 10 minutos. 4. Ler as reacções. VII - RESULTADOS E INTERPRETAÇÃO A presença de aglutinados à superfície ou dispersos no gel corresponde a um resultado positivo, indicador da presença do antigénio eritrocitário correspondente. Um fundo de glóbulos vermelhos concentrados na base do microtubo corresponde a um resultado negativo, indicador de que o antigénio eritrocitário correspondente não foi detectado. Uma reacção positiva em um dos microtubos só pode ser validada se o microtubo Ctl for negativo. Se o microtubo Ctl apresentar uma reacção positiva : Lavar os glóbulos vermelhos em solução salina isotónica (NaCl 0,9%). Repetir o procedimento, tal como descrito em VI.1 ou VI.2. Se o microtubo Ctl for negativo, a interpretação para cada um dos outros microtubos é a seguinte : 45
6 Resultado positivo Resultado positivo fraco Resultado negativo a Se o microtubo de controlo continuar a apresentar uma reacção positiva, realizar de novo o teste segundo uma técnica diferente da filtração por gel. Os resultados são válidos unicamente se os controlos positivo e negativo fornecerem os resultados esperados. a) Interpretação dos microtubos ABO1(A), ABO2 (B) e ABO3(AB) Um grupo ABO completo comporta 2 testes complementares : o teste globular realizado com os reagentes anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) e anti-abo3 (AB), e o teste sérico realizado com os glóbulos vermelhos de teste A1, B, e eventualmente A2 e O. Os perfis das reacções esperadas com os reagentes anti-abo1 (A), anti-abo2 (B), anti-abo3 (AB) e os glóbulos vermelhos de teste A1, A2, B, O, bem como as respectivas interpretações, são apresentados no quadro seguinte : GRUPOS TESTE SÉRICO : GLÓBULOS TESTE GLOBULAR : REAGENTES VERMELHOS TESTE Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A B AB O O teste globular e o teste sérico devem ser concordantes. Qualquer divergência entre os testes globular e sérico deve ser resolvida antes de se confirmar um resultado do grupo ABO. Sempre que se observe uma divergência entre os testes globular e sérico, dever-se-á proceder a testes complementares com os controlos apropriados. b) Interpretação do microtubo RH1 (D) Um resultado positivo no microtubo RH1 (D) indica a presença do antigénio RH1 (D) à superfície dos glóbulos vermelhos testados. Apesar dos seus desempenhos, o anti-rh1(d) da card ScanGel Monoclonal ABO/RH não permite a detecção de todos os antigénios D fracos, nem a detecção do fenotipo RH1 parcial categoria VI (DVI). Se for necessária a detecção destes antigénios em particular, dever-se-á efectuar um teste complementar com o reagente ScanGel Monoclonal Anti-RH1(D)/RHW1, associado à card ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d. 46
7 c) Interpretação do microtubo RH1, 2, 3 (DCE) Um resultado positivo no microtubo RH1, 2, 3 (DCE) indica a presença do antigénio RH1 (D) e/ou RH2 (C) e/ou RH3 (E) à superfície dos glóbulos vermelhos testados. VIII - DESEMPENHOS Os desempenhos do dispositivo ScanGel Monoclonal ABO/RH foram avaliados em painéis de 1641 amostras globais (1150 dadores, 332 doentes e 159 recém-nascidos) completado por um painel de amostras especiais (antigénios fracos ou variante) Cada resultado foi comparado com o obtido através da técnica placa, tubo, microplaca ou filtração por gel. a) Desempenhos específicos dos reagentes anti-abo1(a), anti-abo2 (B) e anti-abo3(ab) As 1641 amostras revelaram resultados conformes com os esperados. Foi testado um painel de 17 amostras especiais (Ax, B3, AxB, Bh, CisAB, A3B, ABf). Todas foram detectadas com uma reactividade de 1+ a 3+. Os antigénios B adquiridos testados não foram detectados com o anti-abo2 (B) da placa ScanGel Monoclonal ABO/RH. Os reagentes anti-abo1(a), anti-abo2 (B) e anti-abo3 (AB) da card ScanGel Monoclonal ABO/RH apresentam boa reprodutibilidade tanto intra como inter-ensaio. b) Desempenhos específicos do reagente anti-rh1(d) As 1641 amostras revelaram resultados conformes com os esperados. Foi testado um painel de 24 amostras particulares (Ag fracas, variantes e fenotipos especiais). Todas as variantes e fenotipos particulares foram detectados, à excepção de uma amostra de um fenotipo RH1 parcial, categoria VI (DVI). O reagente anti-rh1 (D) da card ScanGel Monoclonal ABO/RH apresenta boa reprodutibilidade tanto intra como inter-ensaio. c) Desempenhos específicos do reagente anti-rh1, 2, 3 (DCE) As 1641 amostras revelaram resultados conformes com os esperados. O reagente anti-rh1, 2, 3 (DCE) da card ScanGel Monoclonal ABO/RH apresenta boa reprodutibilidade tanto intra como inter-ensaio. LIMITAÇÕES A obtenção de resultados anómalos pode ser provocada por : Uma contaminação bacteriana ou química do soro, do plasma, dos glóbulos vermelhos ou do material. 47
8 Uma medicação ou um estado patológico do doente, fornecendo uma reacção cruzada. A utilização de um meio de suspensão de glóbulos vermelhos diferente do preconizado. Uma preparação de glóbulos vermelhos diferente da preconizada. A presença de fibrina (imagem de um fundo celular compacto na base de um microtubo, acompanhada de uma fina faixa rosada no cimo do gel, correspondente aos glóbulos vermelhos retidos pelos resíduos de fibrina). Contaminação entre os microtubos. Utilização de outro procedimento para além do descrito em seguida. Sob licença da DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Suíça 48
9 IX - LITERATURE 1. Kankura T., Kurashina S., Nakao M.: A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974; 83: Rouger Ph., Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson Lapierre Y., Rigal D., Adam J. et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Salmon Ch., Cartron J.P., Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme, 2è éd. Masson Agre P.C., Cartron J.P.: Protein blood group antigens of the human red cell. Structure, function and clinical significance. The John Hopkins University Press Third international workshop and symposium on monoclonal antibodies and related antigens. Section Rh TCB 1996;6: Reid M.E., Lomas-Francis C.: the blood group antigen facts book. Academic Press Third international workshop and symposium on monoclonal antibodies and related antigens. Section ABO. TCB 1997;1: Issitt P.D.: Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.
10 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2008 Fax.: Code:
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