Laboratório IVP Brasil

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Vitorino Pinhal Valgueiro
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1 Laboratório IVP Brasil Proposta de Exames Atualizado em 05 de Julho de 2012

2 Laboratório IVP Brasil Primeiro no Brasil a oferecer sistema integrado de exames. Corpo técnico especializado. Equipamentos de última geração, especializados em exames de qualidade espermática de animais de produção. A empresa IVP Brasil oferece, com a introdução desse laboratório, o primeiro sistema integrado produtos-serviços, que visa ao completo atendimento dos clientes. Parceria em prestação de serviços com grandes empresas: em suíno e avicultura (BRFoods, Ideal Pork, Aurora, Doux) e em bovinocultura (ABS Pecplan, Alta Genetics e CRV Lagoa).

3 Laboratório IVP Brasil Instalações modernas e adequadas ao trabalho, segundo determinações de todos órgãos responsáveis. Laboratório bem equipado, com os mais modernos aparelhos especializados no exame de sêmen animal.

4 Laboratório IVP Brasil HTR Ultimate (IVOS) Guava EasyCyte

HTR IVOS: Parâmetros de Motilidade Espermática Parâmetros de Motilidade (R$ 80,00). Parâmetros de Motilidade: Motilidade Total, Progressividade, Velocidades e Deslocamento.

5 HTR IVOS: Parâmetros de Motilidade Espermática Parâmetros de Motilidade (R$ 80,00). Parâmetros de Motilidade: Motilidade Total, Progressividade, Velocidades e Deslocamento. Testes por meio de fotografias seriadas (30) individuais das células presentes na amostra. A estatística global é feita sobre a média da amostragem capturada. Contagens: Total, Móveis e Progressivos. % Móveis,% Progressivamente móveis. Espermatozóides de movimento Rápido, Médio, Lento e Estáticos. Concentrações: Total, Móveis e Progressivos (milhões / ml). VSL VCL Os valores médios: VAP: velocidade de percurso com suavização (mícrons /seg) VCL: Velocity Track (mícrons / seg) VSL: Straight Velocity Line (mícrons / seg) ALH: Amplitude de deslocamento lateral da cabeça (microns) BCF: a freqüência de batimentos (hertz) LIN: Linearidade (proporção de VSL / VCL) STR: Linearidade (proporção de VSL / VAP) ALH VAP Alongamento: forma da cabeça (razão do menor ao eixo principal da cabeça do espermatozóide) Área: tamanho da cabeça (microns quadrados) Gráfico de Distribuições: VAP, VCL, VSL, Alongamento, ALH, BCF, LIN, STR.

6 Concentração Celular (R$ 120,00) Guava EasyCyte: Fisiologia Espermática Uma vez que um citômetro de fluxo pode adquirir milhares de eventos em vários segundos, a uma taxa fixa de fluxo, esse sistema poderia ser usado para avaliar a concentração de espermatozóides. O total de espermatozóides por ejaculado e total de espermatozóides por palheta são dados muito importantes na prática laboratorial e prática. Além disso, com as empresas de melhoramento almejam a diminuição do número de espermatozóides por palheta, sendo de extrema importância serem capazes de ter a alta precisão quando inferindo quantos espermatozóides são inseminados por dose. No entanto, para determinar com real precisão o número de espermatozóides em um volume de suspensão é difícil, demorado, a menos que a contagem de câmara manual seja feita. A citometria de fluxo por fluorescência aparece como uma boa alternativa para determinar a contagem total de espermatozóides. E, melhor, com a técnica de citometria de fluxo é possível se discriminar entre as células e detritos com agilidade e confiabilidade. Como um grande número de células é a contado com um citômetro de fluxo, a diminuição de variação de contagem é significativa. Por exemplo, resultados semelhantes para contagem total de esperma foram obtidos entre citometria de fluxo e câmaras especiais (Thoma e Neubauer). Neste protocolo, todos os espermatozóides são mortos em água (ou em azoto líquido) e PI é usado para corar todos os espermatozóides. Com efeito, PI actua como um corante específico de células mortas, rotulando em vermelho todos os espermatozóides com membrana plasmática danificada.

7 Viabilidade Celular (R$ 70,00) Guava EasyCyte: Fisiologia Espermática Este teste mede a percentagem de espermatozóides viáveis : as células com uma membrana plasmática intacta sobre a cabeça do esperma. A membrana de esperma está relacionada com as muitas funções do espermatozóide, garantindo a capacidade da célula para manter a homeostase e descrevem a motilidade e a capacidade para interagir com o meio ambiente, incluindo o epitélio de revestimento do trato genital feminino ou o oócito-cumulus complexo celular. Uma membrana plasmática intacta é crucial para as células de esperma, porque eles não têm a capacidade de reparação de danos de membrana. O kit de viabilidade (espermatozóides vivos/mortos) contém Sybr14 e iodeto de propídio (PI). As sondas fluorescentes detectam os espermatozóides viáveis e mortos com cores diferentes. Sybr14 é utilizado como corante célula-permeante, detectando ácidos nucleicos. Isso permite que todas as cabeças de espermatozóides sejam coradas em verde e, conseqüentemente, remove os debris da análise. Quando PI penetra membranas danificadas espermatozóides, ele desloca ou extingue Sybr14 fluorescência. Por conseguinte: - Espermatozóides viáveis com membranas plasmáticas intactas são verdes. - Espermatozóides mortos com membranas rompidas são vermelhos. - Espermatozóides em verde e vermelho, simultaneamente, são considerados moribundos e serão incluídos na categoria mortos.

8 Viabilidade Celular e Acrossomo (R$ 100,00) Guava EasyCyte: Fisiologia Espermática Este teste monitora a integridade do acrossomo e a membrana plasmática simultaneamente. O acrossomo é uma vesícula grande sobre a cabeça de esperma anterior e que contém enzimas necessárias para a penetração do oócito. - A lecitina de amendoim (PNA, Arachis Hypogoea) misturado com FITC (PNA-FITC) rotula os acrossomas rompidos com a cor verde. - O iodeto de propídio (PI) atua como um corante específico de célula morta, identificando espermatozóides com membrana plasmática danificada em vermelho. Quatro populações podem ser identificados: - Espermatozóides vivos (vermelho negativo) com acrossomo intacto (negativo verde). - Espermatozóides vivos (vermelho negativo) com ruptura do acrossoma (positivo verde). - Espermatozóides mortos (vermelho positivo) com acrossomo intacto (negativo verde). - Espermatozóides mortos (vermelho positivo) com ruptura do acrossomo (positivo verde). Os espermatozóides vivos com acrossoma intacto não reagem com o verde e o vermelho, e detritos de gema de ovo, por exemplo, podem ser confundidos com espermatozóides. De fato, os detritos não reagem também com o verde e o vermelho. Por conseguinte, um terceiro corante é adicionado nesse teste: o Syto83 que fluoresce em amarelo. SYTO 83 é utilizado como corante célula-permeante, detectando ácidos nucleicos. Isso, consequentemente, remove os detritos da análise.

9 Estresse Oxidativo (R$ 140,00) Guava EasyCyte: Fisiologia Espermática O estresse oxidativo pode ser definido como um desequilíbrio entre a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e a potencialidade de antoxidantes para os eliminar. Um certo nível de ROS é essencial para funções espermáticas como a capacitação, reação acrossômica, fusão com oócitos e fosforilação de proteínas e tirosina. No entanto, é um motivo de preocupação de que os níveis elevados de ROS têm efeito adverso sobre a funcionalidade de esperma levando a elevada taxa de infertilidade. A partir de estudos de diferentes grupos, verificou-se que altos níveis de ROS dificultam a manutenção da integridade da membrana plasmática e ADN nuclear, levando a ruptura do ADN e de ligação transversal da cromatina. Quando o nível destas interrupções é elevada, isso pode levar a fertilidade reduzida. Imaturos, os espermatozóides morfologicamente anormais e leucócitos seminais são as principais fontes de ROS no ejaculado. A 2 ', 7'-diacetato de dichlorodihydrofluorescein (H2DCFDA) tem sido utilizado como um indicador genérico de ROS intracelular em espermatozóides. H2DCFDA penetra na membrana plasmática, e é mantida depois que esterases intracelulares clivam os grupos acetato e emitem verde fluorescente (504nm) mediante oxidação. Este teste é um combinado com outros dois fluorocromos: - Syto83: é utilizado como corante célula-permeante, detectando ácidos nucleicos. Esse corante identifica as células espermáticas em amarelo e, consequentemente, remove os detritos da análise. - PI: ele age como um corante específico de células mortas, marcando os espermatozóides com membrana plasmática danificada em vermelho e, portanto, permite centrar a análise apenas em espermatozóides vivos.

10 Guava EasyCyte: Fisiologia Espermática Merocianina (R$ 140,00) Uma das fases iniciais de capacitação espermática é a mudança na assimetria dos fosfolípedes da membrana plasmática. Alterações similares também podem ser induzidas pelo processo de criopreservação do esperma. Merocyanine 540 é uma sonda lipofílica. Ela liga-se ao plasmalema, avaliando a estrutura de lípidos da membrana. A fluorescência observada pelo citômetro de fluxo é dependente do grau de desordem de lípidos. Quando a embalagem de fosfolípido da membrana plasmática torna-se desordenada, há aumentos de fluorescência. Estes espermatozóides ainda são viáveis, mas a sua estrutura da membrana alterada os torna mais sensível. É possível infeir-se que eles provavelmente morrerão antes que eles possam chegar ao local da fecundação. Merocyanine 540 é combinado com Sybr14. Sybr14 é utilizado como corante célula-permeante, detectando ácidos nucleicos. Isso permite que todas as cabeças de espermatozóides sejam coradas em verde e, conseqüentemente, remove os debris da análise.

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