TESTES SOROLÓGICOS ANTI-PGL-1 NO MONITORAMENTO DO TRATAMENTO DA HANSENÍASE

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1 CONVÊNIOS CNPq/UFU & FAPEMIG Universidade Federal de Ube Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Gra DIRETORIA DE PES COMISSÃO INSTITUCIONAL DE INICIAÇÃO CIEN 28 UFU 3 TESTES SOROLÓGICOS ANTI-PGL-1 NO MONITORAMENTO DO TRATAMENTO DA HANSENÍASE Mariana Pena Costa 1 Universidade Federal de Uberlândia. Avenida Amazonas s/n, Bloco 6T, sala 5. Cep: mariana.penacosta@gmail.com. Isabela Maria Bernardes Goulart 2 Universidade Federal de Uberlândia. Avenida Pará, Bloco 2H. isagoulart@centershop.com.br. Resumo: Testes laboratoriais são imprescindíveis no monitoramento do tratamento da hanseníase, pois evitam a transmissão contínua do bacilo. O objetivo deste estudo foi avaliar os testes ELISA e ML-Flow para detecção de IgM anti-pgl-1 visando o monitoramento da poliquimioterapia (PQT) de pacientes com hanseníase. Observou-se que ambos correlacionaram-se com forma clínica e baciloscopia. O ELISA apresentou maior positividade geral que o ML-Flow. Após o tratamento os resultados das sorologias e do índice baciloscópico (IB) apresentaram declínio, o qual foi mais significativo no ELISA e IB (p<,5). A negativação foi maior no ELISA. No teste Mitsuda, observou-se que a resposta celular é revigorada na alta, exceto no pólo V. Houve uma relação inversa entre o teste Mitsuda e as sorologias. O ELISA anti-pgl-1 é uma ferramenta eficaz no monitoramento do tratamento da PQT e essencial em Centros de Referência que desenvolvem a assistência da alta complexidade, ensino e pesquisa em hanseníase. Palavras-chave: hanseníase, PGL-1, sorologia. 1. INTRODUÇÃO A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, um parasita intracelular obrigatório, com predileção pela célula de Schwann e pele (ARAÚJO, 23). A infecção pelo M. leprae pode variar de uma doença paucibacilar (PB), na qual poucos bacilos estão presentes, a uma doença multibacilar (MB), na qual uma grande carga bacilar está presente no indivíduo (GOULART et al., 22). A hanseníase é uma doença polimorfa com uma ampla apresentação clínica classificada por Ridley e Jopling (1966). De acordo com o espectro, os pacientes de hanseníase são classificados apresentando dois pólos estáveis, tuberculóide (T) e virchowiano (V), e entre as formas polares encontramse as formas instáveis classificadas como dimorfas, sendo estas, dimorfa-tuberculóide (DT), dimorfa-dimorfa (DD) e dimorfa-virchowiana (DV) (RIDLEY; JOPLING, 1966). Vários estudos demonstram que no pólo V da doença, os pacientes apresentam altos títulos de anticorpos específicos (CHO et al. 21; ANANIAS et al. 22). No entanto, estes mesmos pacientes possuem fracas ou até mesmo uma anergia às respostas mediadas por células aos antígenos deste parasita. Ao contrário disso, os pacientes do pólo T apresentam 1 Acadêmica do Curso Ciências Biológicas. 2 Professora e Orientadora da Faculdade de Medicina. Coordenadora do Centro de Referência Nacional em Hanseníase/Dermatologia Sanitária, Hospital das Clínicas, UFU. 1

2 uma forte imunidade mediada por células, porém baixos níveis de anticorpos específicos contra o M. leprae (MAEDA et al., 23). Dos vários testes laboratoriais realizados para o auxílio no diagnóstico da hanseníase, dois testes imunológicos são feitos: o teste quantitativo ELISA e o semi-quantitativo ML- Flow (teste de fluxo lateral do M.leprae). São realizados para determinar a detecção de anticorpos contra o antígeno específico PGL-I do M. leprae. (CALADO et al., 25). Pesquisas anteriores comprovaram que os anticorpos IgM específicos contra o antígeno PGL-1 são encontrados em cerca de 9 a 1% dos pacientes virchowianos e em cerca de % dos pacientes paucibacilares, sendo que esses níveis de anticorpos presentes nos pacientes podem declinar cerca de 5% até o fim do tratamento (BRITTON e LOCKWOOD, 2; CALADO et al, 25). Observa-se também, correlação entre a forma clínica dos pacientes, os resultados da baciloscopia e os testes de detecção de anticorpos anti-pgl-1, sendo que, a maioria dos paucibacilares é considerada soronegativa e, a maioria dos multibacilares é considerada soropositiva (TOMIMORI-YAMASHITA et al., 1999; CHO et al., 21; BUHRER- SÉKULA et al., 21; CALADO et al., 25; SHURING et al., 26). Além disso, verifica-se alta correlação entre os resultados dos testes ELISA anti-pgl-1 e ML-Flow (BUHRER- SÉKULA et al. 23). Por outro lado, há estudos que demonstram a existência de correlação inversa significativa entre os níveis de anticorpos anti-pgl-1 e o teste Mitsuda (ANANIAS et al., 22; MAEDA et al., 23, GOULART et al., 28). De acordo com WHO (26), a hanseníase é curável e o tratamento recomendado é a poliquimioterapia (PQT). Este esquema terapêutico, estabelece períodos fixos de tratamento muito questionados devido à baciloscopia positiva na alta, a qual poderia estar envolvida na ocorrência de recidivas após terapêutica (OLIVEIRA, 1997). As recidivas são ocorrências de sinais de atividade clínica após a alta. O seguimento de pacientes após a alta revela taxas de recidiva que variam de,77% nos MB a 1,9% nos PB. Estes pacientes podem estar auxiliando na manutenção na endemia hansênica (ALI et al., 25). Como não há uma vacina específica ou exame laboratorial decisivo para o diagnóstico da hanseníase, torna-se essencial que se intensifiquem as buscas por um teste laboratorial padronizado que possa auxiliar no diagnóstico e monitoramento do tratamento da doença e que possa ser adotado pela rede SUS em todos os níveis de complexidade (BRASIL/MS, 28). O presente estudo teve como objetivo aplicar dois testes sorológicos: o quantitativo ELISA e o semi-quantitativo ML-Flow, como ferramentas de detecção de anticorpos IgM anti-pgl-1 em pacientes com hanseníase, virgens de tratamento (diagnóstico) e após o tratamento (alta), verificando a relação dos mesmos com a carga bacilar e a resposta celular ao teste de Mitsuda, visando o monitoramento do tratamento. 2. METODOLOGIA 2.1. Casuística Foram convidados a participar do estudo, pacientes com diagnóstico de hanseníase, todos virgens de tratamento, provenientes do Centro de Referência Nacional em Hanseníase/ Dermatologia Sanitária, do Hospital de Clínicas (HC), da Faculdade de Medicina, da Universidade Federal de Uberlândia (UFU).Para o monitoramento da resposta imune humoral, foram selecionados 91 pacientes (12 T, 19 DT-PB, 22 DT-MB, 13 DD, 12 DV e 13 V), dos quais, 7,2% (3/91) eram do sexo masculino e 52,8% (8/91) do sexo feminino. As idades observadas variaram de 3 a 88 anos, resultando numa idade média de 9,3 anos. Para o monitoramento da resposta imune celular, foram selecionados 9 pacientes (15 T, 16 DT-PB, 25 DT-MB, 1 DD, 9 DV e 11 V), dos quais, 56,7% (51/9) eram do sexo masculino e 3,3% (39/9) do sexo feminino. As idades observadas variaram de 8 a 91 anos, resultando numa idade média de 53 anos. 2

3 O projeto foi submetido ao Comitê de Ética da Universidade Federal de Uberlândia (UFU) que emitiu parecer favorável ao seu desenvolvimento (Parecer n o 99/23) Métodos Teste de Mitsuda Foi aplicada no antebraço direito dos pacientes,1 ml de uma suspensão mortos, produzidos e cedidos pela Dra. Maria Esther Salles, do Instituto Lauro de Souza Lima-Bauru, SP. A leitura é feita na a semana, sendo considerado como resultado, a medida do diâmetro da induração local em milímetros (mm). A reação de Mitsuda é: negativa - nada a observar e/ou sentir, mm; duvidoso - pápula entre a 3 mm; fracamente positivo - pápula com a 7 cm sem ulceração; positivo forte - pápula com 8 a 1 mm sem ulceração; fortemente positivo - nódulo maior que 1 mm ou de qualquer tamanho, com ulceração (JOPLING & MCDOUGALL, 1991) Índice Baciloscópico (IB) O IB foi realizado em esfregaços cutâneos de no mínimo 7 locais: o lóbulo das orelhas, dos cotovelos, joelhos e de 1 lesão ativa (Brasil, 199). A coloração usada para o M. leprae foi de Ziehl-Neelsen. O resultado foi registrado de acordo com a Escala Logarítmica de Ridley (199), sendo que, IB = nenhum bacilo em 1 campos de imersão; IB = 1 1 a 1 bacilos, em média em 1 campos; IB = 2 1 a 1 bacilos, em média em 1 campos; IB = 3 1 a 1 bacilos, em 1 campo médio; IB = 1 a 1 bacilos em 1 campo médio; IB = 5 1 a 1. bacilos, em um campo médio; IB = 6 acima de 1. bacilos, em um campo médio Protocolos para Aplicação dos Testes sorológicos de Fluxo Lateral do Mycobacterium leprae (ML-Flow) e Ensaio Imunoenzimático (ELISA) para Detecção de Anticorpos Anti-PGL-1 As reações do ML-Flow foram realizadas através dos testes produzidos pela KIT Biomedical Research, Amsterdam, Holanda, cedidos pela Organização Não-Governamental Netherlands Leprosy Relief (NLR), utilizando o antígeno NT-P-BSA. Foi realizada a coleta de 5µL de sangue do dedo indicador esquerdo. Coloca-se o sangue na zona teste com o tampão, aguarda-se 5 minutos para o resultado. O resultado é negativo quando há ausência de uma linha na zona de teste e a presença de uma linha controle; o resultado positivo foi indicado pela presença de uma linha, a qual varia de +1 a +, na zona de teste e por uma linha na zona de controle. A leitura do resultado é subjetiva e realizada por 3 profissionais diferentes. O método ELISA indireto utilizou como alvo de anticorpos, o antígeno nativo PGL-1, doado pelo Dr. John S. Spencer do Departamento de Microbiologia, Imunologia e Patologia do Colégio de Medicina Veterinária e Ciências Biomédicas da Universidade do Estado do Colorado dos Estados Unidos. Este ensaio imunoenzimático foi realizado de acordo com Fujiwara et al. (198) com modificações. 2.3 Análise estatística O teste estatístico t de Student foi aplicado para verificar o nível de significância da diferença entre médias e o teste de Pearson foi realizado para verificar a correlação entre as variáveis estudadas, assumindo o nível de significância de p<,5. 3 RESULTADOS Os pacientes foram classificados de acordo com os critérios de Ridley e Jopling (1966) considerando-se o IB e Mitsuda. Foi observada uma correlação inversa entre ambos. No pólo T verifica-se um pico de resposta celular e ausência de bacilos, em contrapartida, no pólo V verifica-se alta carga bacilar e ausência de resposta celular (Figura 1). 3

4 12 IB Médias IB e Mitsuda T DT-PB DT-MB DD DV V Formas Clinicas Figura 1. Análise da relação entre as médias do índice baciloscópico e do teste intradérmico de Mitsuda de acordo com as formas clínicas da hanseníase Monitoramento da resposta imune humoral de pacientes com hanseníase Analisando-se os resultados, verificou-se que o ELISA apresentou uma positividade geral de 7% no diagnóstico, enquanto que o ML-Flow foi de 62%. A positividade apresentada pelo teste ML-Flow variou de (/12) nos T a 1% (13/13) nos pacientes V. No ELISA, a positividade variou de 25% (3/12) nos T a 1% (13/13) nos V (figura 2). ELISA ML-Flow Positividade(%) ,3 92,3 91,7 81,8 72, ,3 5,2 T DT-PB DT-MB DD DV V Formas Clínicas Figura 2. Análise da positividade (%) dos testes ML-Flow e ELISA por meio da detecção de anticorpos IgM anti-pgl-1 dos pacientes com hanseníase no diagnóstico. Relasionando os testes com a Forma Clínica, foi possível observar que à medida que a doença atinge graus mais severos, observa-se um aumento dos níveis de IgM anti-pgl-1 e da carga bacilar. A relação mais significativa com a forma clínica se deu entre ELISA (R=,98; p<,5), seguido pelo IB e ML-Flow (R=,97; p<,5). A média dos resultados do ML-Flow foi calculada por forma clínica no diagnóstico e na alta de cada paciente. Observou se que a média aumentou em direção ao pólo anérgico da doença (o pólo V) à medida que declina a imunidade celular. No entanto, foi possível observar, também, uma diminuição da média dos resultados na alta em relação às médias do diagnóstico, diminuição esta, que se mostrou significativa (p<,5) apenas nos pólos instáveis dimorfos MB da doença. (figura 3A). A média dos resultados do IE também foi calculada por forma clínica no diagnóstico e na alta. As médias também aumentaram em direção ao pólo anérgico V. No entanto, houve uma queda significativa (p<,5) nos resultados de alta em relação aos de diagnóstico a partir da forma DT-MB e que se seguiu até a forma V (figura 3B).

5 Médias ML-Flow A) ML-Flow Diag. ML-Flow alta B),5 3,5 3 2,5 2 1,5 1,5,5 1,95,5,86 2,85 1,3 3,25 2,17 T DT-PB DT-MB DD DV V Formas Clínicas 3,7 Médias IE ,7,6,5 IE Diag.,3,91 1, 1,35 8,1 3,2 T DT-PB DT-MB DD DV V Formas Clínicas IE alta 1,2 6,3 P>.5 P>.5 P<.5 P<.5 P<.5 P>.5 P>.5 P>.5 P<.5 P<.5 P<.5 P<.5 Figura 3. A) Média da resposta humoral em cruzes do teste ML-Flow de pacientes virgens de tratamento e após o tratamento, de acordo com as formas clínicas. B) Média da resposta humoral em índice ELISA de pacientes virgens de tratamento e após o tratamento, de acordo com as formas clínicas da hanseníase. As probabilidades apresentadas abaixo das formas clínicas representam a significância para as diferenças entre as médias do ensaio sorológico no diagnóstico (azul) e na alta (rosa), conforme o teste t de Student no nível siginificância menor que,5. As probabilidades significativas estão em negrito. Também foram analisadas as médias do índice baciloscópico de raspado dérmico dos pacientes, no diagnóstico e na alta. Dados demonstram que houve um declínio do IB dos pacientes após o tratamento, o qual foi significativo (p<,5) a partir dos DT-MB (Figura ). IB Diag. IB Alta 6 Médias IB ,2, ,9 1,2,9,7 T DT-PB DT-MB DD DV V Formas Clínicas P>.5 P>.5 P<.5 P<.5 P<.5 P<.5 Figura. Médias do índice baciloscópico de esfregaço dérmico de pacientes nas diferentes formas clínicas da hanseníase. Médias do IB no início da tratamento (linha azul) e final do tratamento (linha rosa) da PQT. As probabilidades apresentadas abaixo das formas clínicas representam a significância para as diferenças entre as médias do IB no diagnóstico (azul) e na alta (rosa), conforme o teste t pareado de Student no nível siginificância menor que,5. As probabilidades significativas estão em negrito. Os resultados das sorologias e do IB declinaram após o tratamento. O ELISA detectou declínio de anticorpos anti-pgl-1 em todas as formas clínicas, sendo que a maior diminuição foi encontrada nos pacientes dimorfos, enquanto que nos pólos estáveis T e V, o declínio foi menor. Os PB tiveram uma queda de 31% após o tratamento, já os MB tiveram uma queda de 58,7% (média geral de 5%) dos níveis de anticorpos no fim da PQT. O declínio de anticorpos detectado pelo ML-Flow ocorreu somente nos pacientes MB, tendo picos de queda nos DT-MB e DD. A média de diminuição de anticorpos anti-pgl-1 deste teste após o tratamento nos MB foi de cerca de 37,7%. O IB também apresentou declínio após a PQT com 5

6 picos de queda nos DT-MB e DD, sendo que a média de declínio registrada foi de cerca de 3,7% nos MB Monitoramento da resposta imune celular de pacientes com hanseníase O teste de Mitsuda relacionou-se inversamente à forma clínica dos pacientes, ou seja, à medida que há uma diminuição da resposta imune celular, a doença se agrava, (figura 5A). Foram analisados, também, os resultados da reação de Mitsuda após a alta da PQT, e verificou-se que a resposta imune celular dos pacientes foi levemente revigorada, exceto no pólo estável V, onde há uma grande quantidade de antígenos, como mostra a figura 5B. A) B) Figura 5. A) Análise da relação entre a resposta imune celular medida pelo teste de Mitsuda e a forma clínica dos pacientes com hanseníase no diagnóstico. B)Média (mm) dos resultados do teste Mitsuda de pacientes nas diferentes formas clínicas da hanseníase no diagnóstico e alta da PQT. As sorologias ML-Flow e ELISA também foram analisadas no diagnóstico e na alta, e relacionadas com os resultados do teste Mitsuda. Observou-se que as sorologias relacionamse de maneira inversa, sendo que os valores de anticorpos IgM anti-pgl-1 aumentam em direção ao pólo anérgico da hanseníase, enquanto que o Mitsuda diminui. Tal relação permanece semelhante após a PQT.. DISCUSSÃO O presente estudo apresentou resultados similares aos demais trabalhos publicados utilizando o antígeno PGL-1, em sua forma nativa (ELISA) ou em sua forma sintética (ML- Flow), demonstrando que a positividade é semelhante entre os dois testes, provavelmente pela similaridade dos antígenos (BUHRER-SÉKULA et al., 23), e tem correlação com o espectro da doença e a carga bacilar, sendo que os maiores títulos se encontram nos MB (TOMIMORI-YAMASHITA et al., 1996; BARROS e OLIVEIRA, 2; CHO et al., 21; ANANIAS et al. 22; SHURING et al., 26). Além disso, o ELISA apresentou maior detecção de anticorpos IgM anti-pgl-1 nas formas clínicas PB da doença, contrastante com o ocorrido no ML-Flow (TOMIMORI-YAMASHITA et al., 1999), que apresentou positividade no diagnóstico apenas a partir dos DT-PB. O ML-Flow mostrou ser inviável para utilização de sangue humano com baixos níveis de anticorpos anti-pgl-1. Estudos como os de Tomimori-Yamashita (1999) demonstram que a detecção de anticorpos é menor em testes que utilizam sangue total (ML-Flow comparada a testes que utilizam soro (ELISA). Isto pode ocorrer devido à presença de substâncias no sangue total que são inibitórias da interação antígeno-anticorpo (BÜHRER-SEKULA et al., 1998). Outro questionamento com referência ao uso de teste de fluxo lateral em serviços de saúde de países endêmicos é o problema de umidade atmosférica sobre as membranas, que 6

7 são extremamente higroscópicas, ou seja, absorvem fortemente a umidade em poucos segundos para entrar em equilíbrio com as condições do ambiente. Como conseqüência, resultados falsos positivos ou negativos podem ser produzidos (MURSHED, 26). Os resultados da análise da presença de anticorpos IgM anti-pgl-1 no diagnóstico e na alta, demonstraram um declínio desses anticorpos nos testes ELISA e ML-Flow após o tratamento. No ML-Flow, o declínio apresentado ocorreu com significância nas formas clínicas dimorfas, no entanto, na forma polar V não se observa declínio significativo, provavelmente devido a pequena amplitude do teste (BÜHRER-SÉKULA et al., 23). No ELISA, o declínio foi significativo nos dimorfos MB e, também nos V, mostrando que o teste quantitativo apresentou maior sensibilidade quanto à diminuição dos títulos de anticorpos. Os resultados encontrados no monitoramento corroboram os dados de estudos anteriores (REPKA et al., 2; CHO et al., 21; ANANIAS et al., 22), que demonstram uma queda gradual dos anticorpos IgM anti-pgl-1 nos pacientes a partir do início da PQT. Os maiores declínios foram detectados pelo ELISA: 31% nos PB e 58,7% nos MB (5% em média); em seguida, pelo ML-Flow com 37,7% de declínio nos MB. Segundo Oskam e colaboradores (23), no momento em que se inicia o tratamento com a PQT, observa-se um declínio dos níveis destes anticorpos, sendo este declínio geralmente de 25 a 5% por ano. A presença de anticorpos da classe IgM durante longo período em doença crônica é decorrente da permanência do antígeno no organismo. Essa persistência do antígeno, na hanseníase, pode ser explicada pela hidrofobicidade do PGL-1 ou pela incapacidade do macrófago em eliminar o antígeno (BARROS e OLIVEIRA, 2). Dados da literatura mostram alta correlação entre o IB do paciente e seus níveis de anti-pgl-1 (TOMIMORI-YAMASHITA et al., 1999; CHO et al., 21; BUHRER-SÉKULA et al., 21; CALADO et al., 25; SHURING et al., 26). Como o IB representa a concentração total dos bacilos e indica se estão íntegros, fragmentados ou em globias, a concentração dos bacilos viáveis sofrerá rápida diminuição, porém o IB continuará representando os bacilos fragmentados e não diminuirá drasticamente, pois dependerá da capacidade do organismo de realizar o clearance destes bacilos, período que pode durar até 11 anos nos pacientes multibacilares (GALLO et al., 2). Sendo assim, como ainda haverá a presença de bacilos inviáveis no corpo do paciente, ainda haverá antígenos PGL-1 circulantes, e por isso, também anticorpos anti-pgl-1. De acordo com Cho et al. (21), os níveis de anticorpos decrescem durante a PQT, mas 5% da redução ocorre após 2 anos de tratamento. A análise do IB dos pacientes selecionados, no diagnóstico e na alta, apresentou declínio significativo nas formas dimorfas MB e no pólo V. A queda do IB se dá devido à inviabilização dos bacilos causada por potentes antibióticos como a Rifampicina e posterior clearance destes bacilos pelo organismo (GALLO et al., 2). Além disso, o declínio da resposta humoral observado no teste ELISA mostrou estar correlacionado com a queda da carga bacilar dos pacientes, resultado coincidente com dados da literatura e que demonstram que tal teste pode ser uma eficaz para monitorar o tratamento da hanseníase por ser capaz de refletir a carga bacilar dos pacientes (TOMIMORI-YAMASHITA et al., 1999; CHO et al., 21; BUHRER-SÉKULA et al., 21; CALADO et al., 25; SHURING et al., 26). O teste de Mitsuda é utilizado como uma importante ferramenta no prognóstico de pacientes com hanseníase. Os resultados das correlações entre as sorologias ELISA e ML- FLOW com o teste Mitsuda corroboram os dados da literatura como os de Ananias (22) que mostram existir significativa correlação inversa entre a presença de anticorpos IgM anti-pgl- 1 e a resposta celular provocada pelo teste Mitsuda. 5. CONCLUSÃO O monitoramento de pacientes é uma estratégia fundamental para o controle da hanseníase. O ML-Flow, apesar da praticidade, é um teste mais grosseiro que reconhece o 7

8 declínio de anticorpos após a alta apenas nos pacientes dimorfos. Por discriminar apenas entre os grupos PB e MB, pode ser uma boa ferramenta para auxiliar na aplicação do tratamento correto em serviços de campo e de atenção básica. O ELISA é mais sensível, capaz de detectar anticorpos nos PB e MB de acordo com as formas clínicas, e o declínio destes anticorpos após a alta, sendo essencial em Centros de Referência que desenvolvem a assistência da alta complexidade, ensino e pesquisa e que prezam pela melhor qualidade de tratamento. Desta maneira, sugere-se que o teste ELISA seja importante para monitorar o tratamento do paciente, evitando que ele venha a apresentar recidiva no futuro. 6. AGRADECIMENTOS: À toda equipe CREDESH pelo enorme esforço e auxílio na realização deste trabalho. Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Tecnológico (CNPq) e à Universidade Federal de Uberlândia (UFU), pelo apoio a pesquisa, essencial ao desenvolvimento do país. 7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS: 1. ALI, M.K.; THORAT, D.M.; SUBRAMANIAN, M.; PARTHASARATHY, G.; SELVARAJ, U.; PRABHAKAR V. A study on trend of relapse in leprosy and factors influencing relapse. Indian Journal of Leprosy, v.77, n.2, p , abr./jun ANANIAS, M.T.P.; ARAUJO, M.G.; GONTIJO, E.D.; GUEDES, A.C.M. Estudo do anti- PGL-1 em pacientes hansenianos utilizando a técnica de ultramicroelisa. Anais Brasileiros de Dermatologia, v.77, n., p.25-33, jul./ago ARAUJO,M.G. Hanseníase no Brasil. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, v.36, n.3, p , mai./jun BARROS, R.P.C.; OLIVEIRA, M.L.W.R. Detecção de anticorpos específicos para o antígeno glicolípide fenólico-1 do M. leprae (anti PGL-1IgM): aplicações e limitações. Anais Brasileiros de Dermatologia, v.75, n.6, p , nov./dez BRASIL. Ministério da Saúde. Centro Nacional de Epidemiologia, Coordenação Nacional de Dermatologia Sanitária. Relatório de Avaliação Nacional do Controle da Hanseníase. Brasília, BRASIL. Ministério da Saúde. Secretaria de Políticas de Saúde. Departamento de Atenção Básica. Guia para o controle da hanseníase. Brasília, 1ªed., 22. BRASIL. Ministério da Saúde. Programa Nacional de Controle da Hanseníase. Relatório Executivo do PNCH. Brasília, maio 27 a junho BUËHRER-SÉKULA,S.; CUNHA,M.G.S.; FERREIRA, W.A.; KLATSER, P.R. The use of whole blood in a dipstick assay for detection of antibodies to Mycobacterium leprae: a field evaluation. Immunology and Medical Microbiology, v.21, p , mai BUËHRER-SÉKULA,S.; CUNHA,M.G.S.; FOSS,N.T.; OSKAM,L.; FABER,W.R.; KLATSER,P.R. Dipstick assay to identify leprosy patients who have an increased risk of relapse. Tropical Medicine & International Health, v.6, n., p , abr BUËHRER-SÉKULA,S.; SMITS,H.L.; GUSSENHOVEN, G.C.; LEEUWEN,J.V.; AMADOR,S.; FUJIWARA,T.; KLATSER,P.R.; OSKAM,L. Simple and Fast Lateral Flow Test for Classification of Leprosy Patients and Identification of Contacts with High Risk of Developing Leprosy. Journal of Clinical Microbiology, v.1, n.5, p , mai BRITTON, W.J.; LOCKWOOD, D.N.J. Leprosy. The Lancet, v.363, n.916, p , abr CALADO,K.L.S.; VIEIRA,A.G.; DURÃES,S.; SÉKULA,S.B.; OLIVEIRA,M.L.W. Positividade sorológica antipgl-i em contatos domiciliares e peridomiciliares de hanseníase em área urbana. Anais Brasileiros de Dermatologia, v.8, n.3, p.31-36, CHO,S.;CELLONA,R.V.;VILLAHERMOSA,L.G. FAJARDO,T.; BALAGON,M.V.F.; ABALOS,R.M.; TAN,E.V.; WALSH,G.P.; KIM,J.; BRENNAN,P.J. Detection of Phenolic 8

9 Glycolipid I of Mycobacterium leprae in Sera from Leprosy Patients before and after Start of Multidrug Therapy. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, v.8, n.1, p , jan FOSS, N.T. Aspectos imunológicos da Hanseníase. Hanseníase, V.75, n.6, p , nov./dez FOSS, N.T. Episódios Reacionais na Hanseníase. Urgências e Emergências Dermatológicas e Toxicológicas, V.36, p.53-59, abr./dez FOSS, N.T.; SOUZA, C.S.; GOULART, I.M.B.; GONÇALVES, H.S.; VIRMOND, M. Hanseníase: Episódios Reacionais. Projeto Diretrizes, Jul FUJIWARA,T.; HUNTER,S.W.; CHO,S.; ASPINALL,G.O.; BRENNAN,P.J. Chemical synthesis and serology of disaccharides and trisaccharides of phenolic glycolipid antigens from the leprosy bacillus and preparation of a disaccharide protein conjugate for serodiagnosis of leprosy. Infection and Imunity, v.3, n.1, p , jan GALLO, M.E.N.; NERY, J.A.C.; ALBUQUERQUE, E.C.A.; SIGNORELLI, M.; FILHO, V.F.S. Hanseníase multibacilar: índices baciloscópicos e viabilidade do M. leprae após 2 doses da PQT/OMS. Anais Brasileiros de Dermatologia, v.75, n.3, p , mai./jun GOULART,I.M.B.; PENNA,G.O.; CUNHA,G. Imunopatologia da hanseníase: a complexidade dos mecanismos da resposta imune do hospedeiro ao Mycobacterium leprae. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, v.35, n., p , jul./ago GOULART, I.M.B.; SOUZA, D.O.B.; MARQUES, C.R.; PIMENTA, V.L.; GONÇALVES, M.A.; GOULART, L.R. Risk and Protective Factors for Leprosy Development Determined by Epidemiological Surveillance of Household Contacts. Clinical and Vaccine Immunology, v.15, n.1, p.11-15, jan JOPLING, W.H.; MCDOUGALL, A.C. Manual de hanseníase, Ed. Atheneu, a edição, São Paulo, p LOBATO, J.; COSTA, M.P.; GOULART, L.R.; GONÇALVES, M.A.; SOUZA, D.O.B.; REIS, E.M., GOULART, I.M.B. Teste elisa anti-pgl-1 no monitoramento do tratamento da hanseníase. In: Simpósio Internacional em Imunologia das Doenças Tropicais, 27, Bauru-SP. Anais do Simpósio Internacional em Imunologia das Doenças Tropicais, MAEDA, S.M.; ROTTA, O.; MICHALANY, N.S.; CAMARGO, Z.P.; SUNDERKÖTTER, C.; TOMIMORI-YAMASHITA, J.Comparison between anti-pgl-1 serology and Mitsuda reaction: clinical reading, microscopic findings and immunohistochemical analysis. Leprosy Review, v.7, p , mai MOHANTY, K.K. Leprosy Reactions: Humoral and Cellular Immune Responses to M. leprae, 65kDa, 28kDa, and 18 kda Antigens1. International Journal of Leprosy and Other Mycobacterial Diseases, Jun,2. 2. MURSHED AB-DELQADER M. Lateral Flow test device providing improved test result validity. World Intelectual Propriety Organization, PCT. Nº WO/26/5861, NOORDEEN S.K. The epidemiology of leprosy. In: Hastings RC. Leprosy: Medicine in the tropics. New York: Churchill Livingstone; p OLIVEIRA, M.L.W. A cura da Hanseníase x Magnitude das Recidivas. Anais Brasileiro de Dermatologia, v.72, n.1, p.63-69, jan./fev OSKAM, L.; SLIM, E., BÜHRER-SÉKULA, S. Serology: recent developments, strengths, limitations and prospects: a state of the art overview. Leprosy Review, v.7, n.3, p , set REPKA, J.C.D.; SKARE, T.L.; JUNIOR, G.S.; PAUL, G.M. Anticorpo anticardiolipina em pacientes com mal de Hansen. Revista Brasileira de reumatologia, v.1, n.1, jan./fev

10 28. RIDLEY, D.S.; JOPLING, W.H. Classification of leprosy according to imunity: afive group system. International Journal of Leprosy, v.3, p , RIDLEY, D.S. Skin biopsy in leprosy. Documenta Geigy 3 rd ed. Basle: CIBAGEIGY, 199, 63p. 3. SHURING,R.P.; MOET,F.J.; PAHAN,D.; RICHARDUS,J.H.; OSKAM, L. Association between anti-pgl-i IgM and clinical and demographic parameters in leprosy. Leprosy Review, v.77, p , dez SILVA, D.A..O; SILVIA, N.M.; MINEO, T.W.P.; PAJUABA NETO, A.A.; FERRO, A.V.; MINEO, J.R. Heterologous antibodies to evoluate the kinetics of the humoral imune response in dos experimentally infected with Toxopladma gondii RH strain. Veterinary Parasitology, v.17.; p , TOMIMORI-YAMASHITA,J.; MAEDA, S.M.; JABUR, R.; ROTTA, O. Hanseníase: novos métodos e recursos diagnósticos. Anais Brasileiro de Dermatologia, v.71, n., p.33-39, jul./ago TOMIMORI-YAMASHITA,J.; NGUYEN,T.H.; MAEDA, S.M.; FLAGEUL, B. ROTTA,O.; CRUAUD,P. Anti-phenolic Glycolipid-I (PGL-I) determination using blood collection on filter paper in leprosy patients. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, São Paulo, v.1, n., p , jul./ago WALKER, S.L.; LOCKWOOD, D.N.J. The Clinical and Immunological Features of Leprosy. British Medical Bulletin, p.1-19, nov WHO - World Health Organization. Leprosy: the treatment. Last update: dec.26. Disponível em < 57_ htm > Acesso em: 16 abril 27. ANTI-PGL-1 SEROLOGICAL TESTS IN THE ASSESSMENT OF LEPROSY TREATMENT Mariana Pena Costa 3 Federal University of Uberlândia. Amazonas Avenue n/n, building 6T, room 5. Cep: mariana.penacosta@gmail.com. Isabela Maria Bernardes Goulart Federal University of Uberlândia. Pará Avenue, building 2H. isagoulart@centershop.com.br. Abstract: Laboratory tests are essential in monitoring the leprosy treatment because they can avoid continuous transmission of the bacillus. The purpose of this study was to evaluate the ELISA and ML-Flow tests to detect IgM anti-pgl-1 aiming the assessment of multidrugtherapy (MDT) of leprosy patients. It was observed that both shown positive correlation with clinical form and bacilloscopic index. The ELISA showed a higher general positivity compared to ML-Flow. After the treatment, the serology an bacilloscopy index (BI) results showed a decrease, which was more significant in ELISA and BI (p<,5). The ELISA had more results that became negative after the treatment. In Mitsuda test, it was observed that cellular response is reinvigorated after treatment, except in L pole. There was an inverse relationship between Mitsuda and serology tests. The ELISA anti-pgl-1 is an effective tool in monitoring the MDT treatment and essential in Reference Centers that develop high complexity assistance, teaching and research in leprosy. Keywords: Leprosy, PGL-1, serology. 3 Student of Biological Sciences. Teacher and Advisor of Medicine School. Coordinator of the National Reference Center in Sanitary Leprosy/Dermatology, Clinics Hospital, UFU. 1