MORTALIDAE DE LAGARTAS DE Anticarsia gemmatalis (Lepidoptera: Noctuidae) ATRAVÉS DE FUNGO ENTOMOPATOGÊNICO

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1 MORTALIDAE DE LAGARTAS DE Anticarsia gemmatalis (Lepidoptera: Noctuidae) ATRAVÉS DE FUNGO ENTOMOPATOGÊNICO OLIVEIRA, Fábio Rodrigo de 1 ; DEQUECH, Sônia Thereza Bastos 1 ; MACHADO, Daniele Franco Martins; MORAES, Jonas 1 ; SILVA, Antônio Carlos Ferreira da 1 ; AGUIAR, Anderson Rossi 1, GONÇALVES, Carlos Eduardo Prates 1, FORNARI, Rodrigo 1 1 Programa de Pós-Graduação em Agrobiologia Universidade Federal de Santa Maria primeiro autor: fa.biotecnologia@hotmail.com RESUMO A infestação de lagartas em cultivos agrícolas pode ocasionar perdas econômicas severas, quando estas não são controladas de forma eficiente. A lagarta da soja, Anticarsia gemmatalis, é considerada a principal praga dessa cultura, causando desfolhamento e podendo levar a destruição completa da planta, o que refletirá em perdas significativas de produção. Para o seu controle, geralmente são utilizados métodos químicos, com a utilização de inseticidas. Esses produtos, quando utilizados de forma incorreta ou indiscriminada, podem causar danos ao meio ambiente (solos, águas e ar), a outros organismos e a saúde do homem, além de resistência dos insetos-pragas. Nesse sentido, há uma busca constante por métodos de controle menos danosos e mesmo assim eficientes. O controle biológico através de fungos entomopatogênicos é uma alternativa consistente para o controle de lagartas, desde que observadas algumas particularidades com relação a produção dos microrganismos e utilização no campo. A primeira etapa do processo de utilização de fungos entomopatogênicos é a identificação de gêneros que possam causar um bom nível de mortalidade na praga que se procura controlar. Esse trabalho demonstrou a eficiência de determinado gênero de fungos causadores de mortalidade em lagartas da soja, visando posteriormente a utilização desses microrganismos em estratégias de controle biológico. Palavras-chave: controle biológico, entomopatógeno, lagarta da soja

2 1. INTRODUÇÃO A infestação de lagartas em cultivos agrícolas pode ocasionar perdas econômicas severas, quando estas não são controladas de forma eficiente. Em culturas como a soja (Glycine max) e o milho (Zea mays), que se destacam pelo grande potencial econômico no Brasil, as lagartas podem reduzir significativamente a produção e a lucratividade da lavoura, caso alcancem um alto nível de dano. Dentre as principais pragas que atacam a soja, podem se destacar lagartas de Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae), conhecida como lagarta-da-soja e considerada uma praga principal da cultura, e Pseudoplusia includens Walker, 1857 (Lepidoptera: Noctuidae), considerada praga secundária. Já na cultura do milho Spodoptera frugiperda J.E. Smith, 1797 (Lepidoptera: Noctuidae), conhecida por lagarta-do-cartucho, é uma praga principal e de difícil controle. A lagarta-da-soja é considerada a principal praga desfolhadora da soja (Glycine max. L). Mesmo em baixas densidades populacionais, esse inseto causa danos que vão desde o desfolhamento até a destruição completa da planta. Esse desfolhamento compromete o enchimento das vagens, com consequente redução na produção dos grãos (MENDONÇA, 2009). Para o controle da lagarta-da-soja, o mais usual é a utilização de inseticidas químicos. Porém, o uso intensivo de agrotóxicos para o controle de pragas na agricultura tem, reconhecidamente, promovido diversos problemas de ordem ambiental, como as contaminações dos lençóis freáticos, rios, solo, animais, alimentos, intoxicação de agricultores, bem como promoverem o surgimento de raças de organismos resistentes. Outro desequilíbrio que esses produtos podem causar é a eliminação de microorganismos responsáveis pela degradação de matéria orgânica ou de organismos benéficos utilizados em programas de controle biológico, causando diversos problemas no meio ambiente (CANPANHOLA & BETTIOL, 2003). Além disso, o uso contínuo e exclusivo de defensivos agrícolas, por exemplo, tem resultado na ocorrência de insetos e patógenos resistentes a determinados produtos, que nem sempre são diagnosticados (GHINI & KIMATI, 2000). Dentre as alternativas para a redução do uso de agrotóxicos, o controle biológico é um dos mais discutidos, podendo tanto aproveitar o controle natural quanto realizar a introdução de um agente de controle. Nesse sentido, os fungos causadores de doenças em insetos são organismos com grande potencial para o controle de insetos-praga devido à capacidade de supressão de populações desses artrópodes, vasta gama de hospedeiros e possibilidade produção industrial desses agentes (LEITE et. al., 2003).

3 O objetivo do trabalho foi, portanto, isolar fungos entomopatogênicos a partir de lagartas presentes em culturas de soja e de milho na região central do Estado do Rio Grande do Sul e utilizá-los como possíveis agentes de controle microbiano de A. gemmatalis. Com isso, buscou-se encontrar uma gênero que causasse significativa mortalidade à lagarta-da-soja e que estivesse adaptada às condições climáticas da região, podendo ser, no futuro, utilizada como uma importante ferramenta no controle desse inseto-praga e na redução no uso de agroquímicos. 2. METODOLOGIA 2.1. Isolamento dos microrganismos No Laboratório de Interação Microrganismos Ambiente do Programa de Pós- Graduação em Agrobiologia da Universidade Federal de Santa Maria foram isolados diversos fungos a partir de lagartas contaminadas de A. gemmatalis e de Pseudoplusia includens retiradas de lavouras de soja, e de Spodoptera frugiperda em milho. As lagartas foram coletadas aleatoriamente, conforme verificação de contaminação no campo, em lavouras situadas nos municípios de Santa Maria, Restinga Seca, Formigueiro e São Pedro do Sul, localizados na Região Central do Estado do Rio Grande do Sul. Para o isolamento dos microrganismos utilizou-se o meio de cultura BDA (200 g/l de batata, 20 g/l de dextrose e 20 g/l de ágar), raspando-se a superfície das lagartas contaminadas com uma pinça esterilizada e adicionando-se o micélio do fungo no meio de cultura. As placas originadas foram incubadas em câmara climatizada tipo BOD, com temperatura de 25 C e fotoperíodo de 12 horas, e mantidas nessas condições até serem utilizadas no experimento Criação de Anticarsia gemmatalis Lagartas de A. gemmatalis, adquiridas da criação oriunda da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queirós (ESALQ/USP), foram criadas em laboratório utilizando-se dieta artificial. Os adultos, que emergiram a partir dessas lagartas, foram colocados em gaiolas de criação (Figura 1A). A alimentação dos adultos constou de uma suspensão de mel a 10 %. A oviposição foi realizada em papel filtro, fixado nas paredes das gaiolas. As posturas foram transferidas para recipientes (bandejas) plásticos onde permaneceram até a eclosão das

4 larvas. Após eclodirem, as lagartas foram transferidas individualmente para recipientes plásticos de 100 ml contendo dieta que servia como base alimentar até a fase de pupa (Figuras 1). Na Tabela 1 está apresentada a composição da dieta alimentar utilizada para a criação das lagartas. A B Figura 1 - A. Gaiola com adultos de Anticarsia gemmatalis. B. Potes com dieta alimentar, onde eram mantidas as lagartas. Tabela 1 - Composição da dieta alimentar utilizada para a criação de lagartas de Anticarsia gemmatalis. Ingrediente Quantidade Água ml Feijão 250 g Proteína de soja 100 g Levedo de cerveja 125 g Gérmen de trigo 200 g Caseína 75 g Complexo vitamínico 20 g Ácido sórbico 6 g Ácido ascórbico 12 g Formol 12 ml Nipagin 10 ml Ágar Montagem do experimento Em recipientes plásticos de 1 L, previamente lavados com hipoclorito 1% e álcool 70%, foram acondicionadas oito lagartas. Nessas lagartas, foram testados dez fungos isolados das lagartas previamente mencionadas (três de A. gemmatalis, quatro de P. includens e três de S. frugiperda). Além disso, um dos tratamentos consistiu de apenas água destilada e

5 esterilizada, para servir como testemunha, totalizando-se assim, onze tratamentos (Tabela 2). O fundo dos recipientes foi coberto com areia esterilizada, para evitar o excesso de líquido, que pudesse influenciar nos resultados. Foram realizadas cinco repetições, totalizando 40 lagartas por tratamento Foi preparada uma suspensão de esporos dos fungos isolados, em câmara de fluxo laminar (ambiente asséptico), utilizando-se 5 ml de água destilada e esterilizada, adicionados na placa de Petri contendo o fungo. Os esporos dos fungos foram desprendidos do meio utilizando-se alça de Dringalsky. As suspensões foram ajustadas para a concentração de 1x10 8 UFC.mL -1. Foram espalhados 0,5 ml de cada suspensão de esporos, em cada uma das lagartas de A. gemmatalis, todas de quarto instar. Posteriormente, foi adicionado um disco de dieta alimentar, em cada recipiente, para a alimentação das lagartas. Os recipientes foram mantidos em temperatura de 25 C, umidade de 60% e fotoperíodo de 12 horas. Tabela 2 - Descrição dos tratamentos, com a descriminação das espécies das lagartas das quais o fungo foi originário, sendo que Anticarsia gemmatalis e Pseudoplusia includens foram coletadas em cultivos de soja e Spodoptera frugiperda em milho. Tratamento Sigla Especificação T1 SA1 A. gemmatalis T2 SA2 A. gemmatalis T3 SA3 A. gemmatalis T4 SP1 P. includens T5 SP2 P. includens T6 SP3 P. includens T7 SP4 P. includens T8 MS1 S. frugiperda T9 MS2 S. frugiperda T10 MS3 S. frugiperda T11 T Testemunha: água destilada e esterilizada 3. RESULTADOS E DISCUSSÃO As lagartas tratadas com os diferentes isolados fúngicos foram avaliadas após 72 horas, observando-se o surgimento do estágio de mumificação, indicativo da morte dos insetos.

6 Verificou-se que, 95% das lagartas do tratamento T2 (SA2), apresentaram-se em estágio de mumificação. Em função desse ter sido considerado o melhor tratamento, por ter sido o único isolado a causar mortalidade às lagartas de A. gemmatalis em um bom nível, foi realizada a identificação do fungo, até nível de gênero, em microscópio óptico, com aumento de 10 e 40 vezes. Utilizando imagens de livros e de sites especializados, constatou-se que se trata do fungo Aspergillus sp. (Figura 5). Aspergillus ochraceus foi citado para o controle de Atta bisphaerica Forel (Hymenoptera: Formicidae) conhecidas como formigas cortadeiras (RIBEIRO, 2012) e Aspergillus flavus controlando Musca domestica L. (Diptera: Muscidae), conhecida como mosca doméstica (SENNA-NUNES, 2002). Os demais tratamentos não causaram mortalidade significativa às lagartas, pelo menos até 120 horas de avaliação quando, em alguns casos, as lagartas entraram em estágio de pupa. O tratamento T11 (testemunha), também não resultou em mumificação e morte das lagartas, o que demonstra que a mortalidade em T2 foi efetivamente ocasionada pelo fungo entomopatogênico. Tabela 3 - Resultados obtidos com a inoculação dos fungos isolados em lagartas de A. gemmatalis, observando-se estágio de mumificação. Tratamento % Lagartas mumificadas (72 h) % Lagartas mumificadas (120 h) T T T T4 12,5 12,5 T5 12,5 15 T6 0 0 T7 0 0 T ,5 T T T11 0 0

7 A B C Figura 3 - A. B e C. Lagartas de Anticarsia gemmatalis mumificadas, contaminadas por Aspergillus sp. A B C D Figura 5 - A. Esporos de Aspergillus sp.; B. C e D. Estruturas fúngicas (hifas, conidióforos e conídios) de Aspergillus sp.

8 1. CONCLUSÃO Um isolado fúngico do gênero Aspergillus, obtido na Região Central do Estado do Rio Grande do Sul, ocasionou alto nível de mortalidade em lagartas de A. gemmatalis, em laboratório, e pode ser explorado para estratégias de controle biológico dessa praga da soja no campo. 2. REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICAS MENDONÇA, E. G.; OLIVEIRA, M. G. A.; VISÔTTO, L. E.; GUEDES, R. N. C.; RIBEIRO, F. R.; OLIVEIRA, J. A. O. Determinação da atividade enzimática e do número de bactérias associadas ao intestino médio da lagarta da soja, Anticarsia gemmatalis, criada em diferentes dietas. Revista Ceres. N 56. p CAMPANHOLA, C.; BETTIOL, W. Métodos alternativos de controle de fiotopatógenos. Jaguariuna: Embrapa Meio Ambiente, p. GHINI, R. ; KIMATI, H. Resistência de fungos a fungicidas. Jaguariúna: Embrapa Meio Ambiente, p. MELO, I.S. DE. Agentes microbianos de controle de fungos fitopatogêncos. In: Controle biológico. Vol. I. MELO, I.S. DE e AZEVEDO, J.L. DE. (Eds.) Jaguariúna, SP, Embrapa-CNPMA p. LEITE, L. G.; FILHO, A. B.; ALMEIDA, J. E. M.; ALVES, S. B. Produção de fungos entomopatogênicos. 92 p. Ed. Alexandre de Sene Pinto. Ribeirão Preto, NUNES M. S.; COSTA, G.; BITTENCOURT, V. R. E. P.; SOUZA, E. J. Avaliação in vitro dos fungos Aspergillus flavus e Penicillium corylophilum em adultos de Musca domestica (Diptera: Muscidae) Parasitol Latinoam. N 57. p. 9-14, RIBEIRO, M. M. R.; AMARAL, K. D.; SEIDE, V. E. S.; SOUZA, B. M. R.; DELLA LUCIA, T. M. C.; KASUYA, M. C. M; SOUZA, D. J. Diversity of Fungi Associated with Atta bisphaerica (Hymenoptera: Formicidae): The Activity of Aspergillus ochraceus and Beauveria bassiana. Hindawi Publishing Corporation Psyche. V 2012, 6 p