1 PERFIL ENZIMÁTICO DE FRANGOS DE CORTE ACOMETIDOS COM MIOPATIA WOODEN BREAST LAURA MARTINS LORSCHEITTER 1, TAMARA ZINN FERREIRA 2, STELLA DE FARIA VALLE 3, VLADIMIR PINHEIRO DO NASCIMENTO 3, GUIOMAR PEDRO BERGMANN 3, LIRIS KINDLEIN 3 1 Aluno de Graduação de Medicina Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul; 2 Aluno de Pós-Graduação do Programa de Ciências Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul; 3 Professor Associado da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. 4 Professor Associado da Faculdade de Agronomia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul RESUMO Uma recente alteração no músculo peitoral de frangos de corte, referida como Wooden Breast (WB), pode alterar a integridade das células musculares, resultando na liberação de enzimas, como creatina quinase (CK), aspartato aminotransferase (AST) e lactato desidrogenase (LDH). O presente estudo foi realizado com o objetivo de comparar os perfis sorológicos de frangos de corte com WB a fim de obter mais informações sobre as alterações sistêmicas associadas a essa condição. Para tal, foram abatidos, aleatoriamente, 154 frangos de corte aos 35 e 42 dias para realização da avaliação macroscópica de WB e de provas bioquímicas. Estes resultados sugerem que houve uma elevação (P <0,05) dos níveis séricos de AST, LDH e CK nos animais acometidos com WB aos 35 d, entretanto, não houve diferença significativa nos níveis séricos somente para LDH aos 42 d, sugerindo que a presença de WB reflete uma condição patológica em nível sistêmico. Palavras-chaves: atividade enzimática, lesão muscular, wooden breast. 1733
2 PROFILE ENZYMATIC OF BROILER AFFECTED WITH WOODEN BREAST MYOPATHY ABSTRACT One of the consequences of intense genetic selection for growth of poultry is the recent appearance of abnormalities in breast muscles, such as Wooden Breast (WB). This condition could disrupt the integrity of the muscle cells resulting in the leaking of various enzymes such as creatine kinase (CK), aspartate aminotransferase (AST), and lactate dehydrogenase (LDH). The present study was undertaken to compare the serologic profiles of broilers with WB to get more information on the systemic changes associated with the condition. For this, were performed macroscopic classification and biochemical tests of 154 broilers at 35 and 42 days. These results suggest that the birds had elevated (P < 0.05) serum levels of AST, CK LDH between degree of WB at 35 d. Conversely, did not show any differences in serum levels only of LDH at 42 d, suggesting that presence of WB reflects a pathological condition in level systemic. Keywords: enzymatic activity, muscle damage and wooden breast. INTRODUÇÃO As alterações musculares em frangos de corte vem adquirindo maior importância, especialmente as relacionadas ao músculo pectoralis major, como é o caso da miopatia Wooden Breast (WB) - miopatia peitoral que apresenta áreas pálidas extensas de dureza substancial. Estudos científicos tem sugerido que mudanças em enzimas plasmáticas sejam um indicativo de dano no músculo esquelético de 1734
3 frangos de corte, pois estas alterações seriam consequência de uma modificação na permeabilidade da membrana de células musculares (Mitchell e Sandercock, 1995). Este comprometimento na integridade da membrana do músculo esquelético pode afetar as atividades enzimáticas de Aspartato Transferase (AST), Creatina Quinase (CK) e Lactato Desidrogenase (LDH). Desta forma, o objetivo deste trabalho foi relacionar a presença de WB com o aumento da atividade sérica da enzima CK, AST e LDH em frangos de corte em animais abatidos aos 35 e 42 dias de idade. MATERIAIS E MÉTODOS Para tal, frangos de corte, machos, da linhagem Cobb 500, foram abatidos aos 35 d e 42 dias, com um peso médio de 2,8 e 3,2 kg, respectivamente. O abate ocorreu nas instalações do aviário da estação experimental da Faculdade de Agronomia (UFRGS) no período de 01 a 08 de novembro de 2014. Este procedimento está de acordo com Regulamento Técnico de métodos de insensibilização para o abate humanitário de animais de açougue contemplado na Instrução Normativa nº 3, de 17 de janeiro de 2000 (BRASIL, 2000). Para avaliação da atividade enzimática das enzimas AST, CK e LDH, procedeu-se a coleta de sangue das aves na etapa da sangria após a eletronarcose, sendo colhidos 1,5-3 ml de sangue de cada uma das 154 aves. Este material foi armazenado em tubos a vácuo sem anticoagulante e devidamente identificados. Após a retração do coágulo, os tubos foram centrifugados a 1500 rpm por 10 minutos para a obtenção do soro. O soro foi cuidadosamente separado por aspiração e armazenado em alíquotas sob uma temperatura de -18 ºC para posterior realização das análises bioquímicas. Para tal, as amostras foram descongeladas e processadas no Laboratório de Análises 1735
4 Clínicas Veterinárias da UFRGS (LACVet/UFRGS) através de kits comerciais específicos para cada enzima em um espectrofotômetro com calibração automática e leitura de alta performance (Wiener lab ). Após, realizou-se a avaliação macroscópica do músculo pectoralis major para verificar a ausência (grau 0) ou presença de WB (grau 1), sendo as amostras devidamente identificadas (Tabela 1). Tabela 1 Número de animais abatidos de acordo com o grau de miopatia WB. NÚMERO DE ANIMAIS GRAU DE WB 35 d 42 d TOTAL GRAU 0 13 16 29 GRAU 1 22 19 41 TOTAL 35 35 70 A estatística foi realizada utilizando-se análise de variância (ANOVA), no Programa Estatístico SPSS e as diferenças significativas calculadas utilizando-se o teste de Tukey a 5%. RESULTADOS E DISCUSSÃO Verificou-se a relação entre os graus de WS e os marcadores bioquímicos de lesão muscular aos 35 e 42 dias (Tabela 2 e 3, respectivamente). Tabela 2 - Média e desvio padrão da atividade sérica de CK, AST e LDH (U/L) em frangos de corte com WB aos 35 dias de idade (p<0,05). GRAU DE WB ATIVIDADE ENZIMÁTICA AOS 35 DIAS CK AST LDH GRAU 0 8443±2908,07 a 271,73±88,5 a 3036,8±1288,91 a GRAU 1 21891,33±8038,99 b 578,04±202,35 b 6078,21±2633,1 b a,b,c Letras diferentes diferem estatisticamente na mesma linha (p<0,05). 1736
5 Tabela 3 - Média e desvio padrão da atividade sérica de CK, AST e LDH (U/L) em frangos de corte com WB aos 42 dias de idade (p<0,05). ATIVIDADE ENZIMÁTICA AOS 42 DIAS GRAU DE WB CK AST LDH GRAU 0 12551±3179 a 420,79±109,46 a 4690,43±2097,39 a GRAU 1 26163,38±7381 b 739±211,44 b 7191,25±3748,56 a a,b,c Letras diferentes diferem estatisticamente na mesma linha (p<0,05). Entre os graus 0 e 1 aos 35 dias obtive-se diferença significativa (p<0,05) para as enzimas AST (271,73; 578,04), CK (8443; 21891,33), LDH (3036,8; 6078,21), assim como aos 42 dias para as AST (420,79; 739) e CK (12551; 26163,38), respectivamente. Entretanto, não houve diferença significativa para as enzimas LDH (4690,43; 7191,25) aos 42 dias. CONCLUSÃO Com base em todas as considerações anteriores, pode-se supor que a presença de WB tem relação direta com alterações sistêmicas que se manifestam como variações do perfil hematológico. A enzima CK e AST apresentaram os melhores resultados, sendo CK a principal enzima sérica órgão-específica indicadora de lesão muscular. REFERÊNCIAS BRASIL. Regulamento Técnico de métodos de insensibilização para o abate humanitário de animais de açougue. Instrução Normativa N o 3, 2000. MITCHELL, M.A.; SANDERCOCK, D.A. Creatine kinase isoenzyme profiles in the plasma of the domestic fowl (Gallus domesticus): effects of acute heat stress. Research in Veterinary Science, v.59, n.1, p.30-34, 1995. 1737