1 EFEITO DO TIPO DE SISTEMAS DE CULTIVO NO DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS ISOLADOS EFFECT OF TYPE OF CULTURE SYSTEM ON THE IN VITRO DEVELOPMENT OF ISOLATED CAPRINE PREANTRAL FOLLICLES RODRIGO TENÓRIO PADILHA 1 ; DEBORAH DE MELO MAGALHÃES PADILHA 1 ; JOSÉ RICARDO DE FIGUEIREDO 2 1 Universidade Potiguar (UNP) 2 Universidade Estadual do Ceará (UECE) Resumo O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos dos sistemas bi e tridimensional (2D e 3D) no desenvolvimento in vitro de folículos préantrais caprinos. A integridade morfológica, taxa de formação da cavidade antral e diâmetro folicular foram avaliadas. Não houve diferença estatística entre os sistemas de cultivo em nenhum parâmetro avaliado. Em conclusão, os sistemas de cultivo bi e tridimensional podem ser usados com sucesso para o cultivo in vitro de folículos préantrais caprinos. Palavras-chave: Sistemas de cultivo; cabra; folículos pré-antrais Abstract The aims of this study were evaluate the effects of the bi and three dimensional (2D and 3D) culture systems on the in vitro development of caprine preantral follicles. The morphological integrity, antral cavity formation rates and follicular diameter were evaluated. There were no diferences between both culture systems. The bi and three dimensional 0871
2 culture systems can be used with sucess for in vitro culture of caprine preantral follicles. Keywords: Culture system; goat; preantral follicles Introdução O cultivo in vitro de folículos pré-antrais é uma biotécnica que vem ganhando uma atenção especial devido a população de folículos préantrais corresponder a 90% da população ovariana total (Figueiredo et al., 2011). Neste sentido, diversos autores tem testado hormônios e fatores de crescimento para uma tentativa de melhores taxas de desenvolvimento folicular (Magalhães-Padilha et al., 2011; Magalhães et al., 2009). Um importante fator no cultivo folicular in vitro é o sistema na qual os folículos são cultivados, que pode ser in situ ou isolados. Para folículos isolados, ainda existem as formas bi e tridimensional. Alguns autores relatam resultados promissores com o cultivo bi-dimensional (Magalhães-Padilha et al., 2011). Já outros autores falam das vantagens de um cultivo tridimensional para o bom desenvolvimento dos folículos (Tagler et al., 2012; Xu et al., 2009). Entretanto, estudos que comparem esses 2 tipos de cultivo ainda são escassos. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi comparar os sistemas bi e tridimensional na sobrevivência e desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro. Material e Métodos Foram utilizados 40 folículos pré-antrais isolados para cada tratamento. Para o cultivo 2D, os folículos foram cultivados individualmente em gotas de 100 μl sob óleo mineral. Já para o cultivo tridimensional, os folículos secundários foram inclusos, individualmente, 0872
3 em matriz de alginato e transferidos para poços da placa de 48 poços contendo 300 μl de meio. O meio de cultivo consistiu no α-mem suplementado com 3 mg/ml de albumina sérica bovina, 2 mm de glutamina, 10 ng/ml de insulina, 5.5 mg/ml de transferrina, 5 ng/ml de selenio, 50 μg/ml de ácido ascórbico, 50 ng/ml of GH e 100 ng/ml de FSH. Em ambos os tratamentos, a troca parcial do meio foi realizada a cada 2 dias. O período de cultivo foi de 30 dias. Para este experimento, a morfologia dos folículos foi avaliada a cada 6 dias para determinar o número de folículos normais ou degenerados, o percentual de formação de antro, bem como o diâmetro folicular. A morfologia e formação de antro foram avaliadas pelo teste de qui-quadrado e os resultados expressos em percentual. Já o diâmetro folicular foi avaliado pelo teste de Tukey, utilizando o programa estatístico SAS. Diferença foram consideradas significativas quando p < 0,05. Resultados Com relação a todos os parâmetros avaliados (integridade morfológica, formação de antro e diâmetro folicular), não houve diferença estatística entre os sistemas bi e tridimensional. Entretanto, vale ressaltar que em ambos os tratamentos houve uma diminuição (p < 0,05) na integridade folicular do Dia 12 para o Dia 18 de cultivo, bem como do dia 18 para 24. Além disso, também houve um aumento (p < 0,05) do diâmetro folicular em ambos os tratamentos com o decorrer do cultivo. Discussão 0873
4 Esse estudo demonstrou que tanto o cultivo bi quanto o tridimensional são eficazes no desenvolvimento folicular in vitro de folículos pré-antrais caprinos durante 30 dias. No sistema de cultivo 3D, o folículo é cultivado dentro de um substrato, mantendo dessa forma a arquitetura folicular. Magalhães et al (2011) relatou a produção de um embrião a partir do cultivo de folículos pré-antrais caprino na presença do hormônio de crescimento (GH). Já o cultivo 3D mostrou ser eficiente no desenvolvimento de folículos e oócitos em camundongos e primatas não-humano (Tagler et al., 2012; Xu et al., 2009). Os resultados encontrados no presente experimento não estão de acordo com aqueles encontrados por Pessoa et al (2014) que observaram que o cultivo 3D apresentou uma maior taxa de integridade morfológica e maior diâmetro folicular quando comparado ao cultivo 2D. Isso pode ser explicado pelas diferenças experimentais, como diferenças no tempo de cultivo (30 vs 36 dias) e no meio de base utilizado. Conclusão Folículos pré-antrais caprinos podem ser cultivados com sucesso tanto em sistemas bi como tridimensional, não sendo observado altas taxas de degeneração, além de alcançarem excelentes taxas de desenvolvimento folicular. Referências FIGUEIREDO, J.R.; CELESTINO, J.J.H.; FAUSTINO, L. R. et al. In vitro culture of caprine preantral follicles: advances, limitations and prospects. Small Ruminat Research, v.98, n. 1, p.192-195, 2011. MAGALHÃES, D.M.; DUARTE, A.B.G.; ARAÚJO, V.R.; et al. In vitro production of a caprine embryo from a preantral follicle cultured in media 0874
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