Acompanhamento de ovipostura de uma jabutitinga (Chelonoidis denticulata) Monitoring of yellow-footed tortoise (Chelonoidis denticulata) in ovoposition Maria do Livramento de Barros Oliveira 1*, Laíza de Queiroz Viana Braga 1, Francisco Lúcio Mendes Maia Filho 2, Leandro Rodrigues Ribeiro 2, Ana Carolina Cunha de Oliveira 3, Andressa Rocha Fraga 4. 1- Graduanda no curso de Medicina Veterinária da UECE; 2- Médico Veterinário de Animais Selvagens; 3- Graduanda no curso de Medicina Veterinária da University of Nottingham; 4- Graduanda em Ciências Biológicas pela UECE. *E-mail: mentinhabarros@hotmail.com ABSTRACT The reproductive physiology and biology of testudines are not completely known. There is, however, a large amount of research on reproductive behaviour of the species. In this study we present an adult tortoise which copulated and had delayed ovoposition. Dystocia was suspected and radiography was used as a diagnostic test. There was a lack of clinical signs of retention and dystocia was not observed in the x-ray images. In addition to that, the lack of information about the fecundation and ovoposition periods didn t allow a conclusive diagnosis. 279 days following copulation, the eggs were located in an inadequate ovoposition and morphologically unviable. Key words: testudines, reproduction, ovoposition. Palavras-chave: quelônios, reprodução, ovoposição. INTRODUÇÃO O interesse por estudo de reprodução em répteis vem crescendo no Brasil, devido às necessidades conservacionistas. Os jabutis pertencem à ordem Testudinata, com ocorrência natural no Brasil do gênero Chelonoidis com duas espécies: C. carbonaria (Spix, 1824) e C. denticulata (Linnaeus, 1766) (Bérnils, 2010). Os quelônios são animais ovíparos, com reprodução sazonal e eclosão dos filhotes em condições ambientais favoráveis. Muitos fatores influenciam na reprodução, mas o principal é a temperatura (Denardo, 1996). Os C. denticulata atingem a maturidade sexual entre seis e dez anos, com postura de oito a 18 ovos, tendo um período de incubação de 60 a 90 dias, a uma temperatura ideal de 28 a 31 ºC (Cubas & Baptistotte, 2006). 7
O comportamento de nidificação é estereotipado nas diferentes espécies, ocorrendo cinco etapas básicas: deambulação, abertura da cova, postura dos ovos, fechamento da cova e abandono do ninho (Molina, 1992). Alguns problemas reprodutivos são comuns em animais de cativeiro, como as distocias nas fêmeas e o prolapso peniano nos machos, sendo os mesmos relacionados a erros de manejos ambientais e/ ou alimentares (Matias et al., 2006). O objetivo do trabalho é relatar o tempo decorrido da cópula à ovipostura em um exemplar de C. denticulata. MATERIAL E MÉTODOS Um animal da espécie Chelonoidis denticulata (jabutitinga), fêmea, com sete anos e pesando cinco quilos, foi atendido em domicílio, no mês de maio, na cidade de Fortaleza, Ceará, com relato de cópula por cinco dias, não sendo observada ovipostura em dois meses após este evento. Após análise clínica, foram solicitados exames radiográficos em posição dorsoventral, os quais foram realizados no setor de Radiologia da Faculdade de Veterinária da Universidade Estadual do Ceará (FAVET/UECE), sendo o primeiro exame realizado no dia da consulta, e o segundo 53 dias após o primeiro RESULTADOS E DISCUSSÃO Na primeira radiografia foram observados quatro ovos no oviduto, de formatos e tamanhos diferentes, e pelve com passagem conveniente. Para melhor avaliação, o exame foi repetido após 53 dias, não sendo observada neste intervalo nenhuma mudança comportamental do animal. No novo exame foram observados dez ovos no oviduto, sendo que os seis novos ovos apresentavam-se semelhantes aos antigos. As distocias são comuns em répteis e são acompanhadas de sinais clínicos como apatia, inquietação e comportamento de cavar para fazer ninhos (Cubas & Baptistotte, 2006), não sendo nenhum destes observado na jabota em questão. Sabendo-se que os répteis podem estocar sêmen por cerca de seis meses após a cópula (Denardo, 1996) e não dispondo em literatura do tempo para ovoposição após a fecundação, os dados foram insuficientes para o diagnóstico de distocia. Os tratamentos indicados para distocia não são isentos de riscos à vida do animal, conforme os resultados do trabalho de Matias et al. (2006), portanto, optou-se pelo tratamento conservador, sendo indicado 8
alimentação adequada, fornecimento de local onde a mesma pudesse exercer os hábitos da espécie e acompanhamento comportamental. Segundo relato do proprietário, animal foi observado escavando buracos no mês de setembro, mas não foram depositados ovos. Em dezembro (279 dias após a cópula e 218 dias após o primeiro exame radiográfico), a jabota realizou duas oviposturas com intervalo de 15 dias, no entanto, os ovos apresentavam-se mal-formados e de vários tamanhos, sendo relatado pela proprietária que os mesmos foram deixados expostos no jardim, e que a jabota apresentava o comportamento de proteção dos ovos. O insucesso reprodutivo deste relato de caso pode ser atribuído tanto pela morfologia inadequada dos ovos como pelas condições de ovipostura, visto que o animal não apresentou as fases comportamentais de nidificação conforme descritas por Molina (1992). CONCLUSÕES Devido à falta de informações sobre a fisiologia reprodutiva básica dos testudinatas, como o tempo de formação do ovo e ovipostura dos mesmos, torna-se evidente a necessidade de pesquisas na área para fundamentar os tratamentos clínicos e fornecer subsídios para fins conservacionistas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BÉRNILIS, R. S. 2010. Brazilian reptiles List of species. Accessiblea thttp://www.sbherpetologia.org.br/. Sociedade Brasileira de Herpetologia. Visualizada 30/04/12. CUBAS, P. H; BAPTISTOTTE, C. Chelonia (Tartaruga, Cágado, Jabuti). In CUBAS, Z. S.; SILVA, J. C. R.; CATÃO-DIAS, J. L. Tratado de Animais Selvagens, 2006. p. 86, 119. DENARDO, D. Reproductive biology. In: MADER, D. R. Reptile Medicine and Surgery, Ed.2º, 1996,.p. 376-390. MATIAS, C. A. R.; ROMÃO, M. A. P.; TORTELLY, R.; BRUNO, S. F. Aspectos fisiopatológicos em Jabutipiranga (Geochelonia carbonaria Spix 1824). Ciência Rural. V.36, n 5, p. 1494-1500, 2006. MOLINA, F. B., Comportamento Reprodutivo de Quelônios. Biotemas, 1992. p. 61-70. 9
Aspectos histomorfométricos dos ovários de cutias (Dasyprocta agouti) criadas no semi-árido nordestino do Brasil Histologic and morphometric aspects of the ovaries from agoutis (Dasyprocta agouti) bred under captivity in northeast Brazilian semiarid Erika Aparecida Araújo dos Santos* 1 ; Gabriela Liberalino Lima 1 ; Ana Paula Ribeiro Rodrigues 2 ; Bruno Rodrigo Simão 3 ; Moacir Franco de Oliveira 4 ; Alexandre Rodrigues Silva 1 1 Laboratório de Conservação de Germoplasma Animal (LCGA) UFERSA; 2 Laboratório de manipulação de folículos ovarianos pré-antrais (LAMOFOPA) - UECE; 3 Departamento de Ciência Ambientais e Tecnológicas UFERSA; 4 Departamento de Ciências Animais UFERSA; *email: erikasantos_vet@gmail.com; ABSTRACT The histological and morphometric features of the ovaries from six female agoutis were described. The cell components, as well as the histologic structure of the ovary were very similar as described in other rodent species. The diameters for follicles, oocyte and nuclei, respectively, were: 18.62 ± 3.40µm, 12.28 ± 2.37µm and 6.10 ± 0.93µm for primordial, 23.75 ± 5.70µm, 14.22 ± 3.00µm and 6.70 ± 1.24µm for primary and 88.55 ± 17.61µm, 52.85 ± 17.56µm and 22.33 ± 17.61µm for secondary follicles. Additionally, polyovular follicles were observed in all the animals and they represented 7.51% of the total follicles counted. Key words: Agouti, ovary, preantral follicles Palavras-chave: Cutias, ovário, folículos pré-antrais INTRODUÇÃO A cutia é um importante roedor silvestre da fauna brasileira, cujo interesse pelo comércio de sua carne tem sido crescentemente despertado (Mathias, 2012). Dessa forma, surge a motivação em estudar seus aspectos reprodutivos, no intuito de elucidar eventuais problemas na sua criação, produção e reprodução, bem como, otimizar a construção de um modelo biológico para outras espécies de roedores que estejam em extinção. Este trabalho objetivou descrever as características histológicas e 10
morfométricas dos ovários de cutias, apresentando os diâmetros dos folículos ovarianos pré-antrais nas suas diversas categorias (primordial, primário e secundário). MATERIAL E MÉTODOS Os animais usados neste trabalho são provenientes do Centro da Multiplicação dos Animais Silvestres (CEMAS) - UFERSA. Foram utilizadas seis fêmeas, com idade de 2 a 6 anos, pesando 2,42 ± 0,19 kg. Os animais foram mantidos em baias coletivas e alimentados com frutas e ração balanceada produzida na própria universidade, recebendo água à vontade. A eutanásia dos animais seguiu os preceitos éticos internacionais. Foram coletados seis pares de ovários, os quais foram submetidos ao processamento de histologia clássica e avaliados através de microscópio óptico com aumento de 40x (Carl Zeiss Ótico Inc., Chester, EUA). Os dados foram expressos em média e desvio padrão e analisados pelo ANOVA (P < 0,05). RESULTADOS E DISCUSSÃO Os ovários apresentaram-se como corpos ovoides e simétricos (P < 0,05). A média do comprimento dos ovários esquerdo e direito foram 1,05 ± 0,09 e 1,04 ± 0,07 cm, respectivamente. Na análise histológica, o epitélio germinativo foi caracterizado externamente por uma camada de células cubóides e imediatamente abaixo, uma região formada por tecido denso com poucos vasos sanguíneos. A túnica albugínea foi observada e, abaixo desta, havia uma camada de tecido conjuntivo formando o estroma, o qual continha os folículos. Fibras musculares lisas foram observadas no estroma, circundando os folículos. Essa estrutura (Figura 1) se assemelha ao que foi descrito em outras espécies de roedores (Celestino, et al. 2004). Apesar do diâmetro folicular (Tabela 1) variar de acordo com a espécie (Martins, 2004), os valores obtidos para as cutias assemelham-se àqueles descritos para camundongos e hamsters (Griffin, 2006). Folículos pluriovulares foram observados em todos os animais, sendo mais frequentes em folículos primordiais, representando um total de 7,51% dos folículos contados. 11
Figura 1 Análise histológica do ovário de cutias (Dasyprocta agouti). Epitélio germinativo (seta), túnica albugínea (*), estroma (S) e folículos (setas cheias). (40x) Tabela 1 Diâmetros (µm) dos folículos ovarianos, oócitos e núcleos de cutias (Dasyprocta aguti), distribuídos por categoria (média ± desvio padrão). Categoria Folículo Oócito Núcleo Primordial 18,62 ± 3,40 B 12,28 ± 2,37 C 6,10 ± 0,93 C Primário 23,75 ± 5,70 B 14,22 ± 3,00 B 6,70 ± 1,24 B Secundário 88,55 ± 17,61 A 52,85 ± 17,56 A 22,33 ± 17,61 A A,B,C Letras diferentes na mesma coluna indicam diferenças significativas (P<0,05). CONCLUSÃO Importantes características dos ovários de cutias foram aqui descritas, denotando diversas semelhanças com outras espécies roedoras. Tais informações são importantes para o conhecimento da morfofisiologia reprodutiva das fêmeas desta espécie. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CELESTINO, J. J. H.; FIGUEIREDO, J. R. Morphological and ultrastructural analysis of sheep primordial follicles preserved in 0.9% saline solution and TCM 199 Theriogenology. v. 62. p. 65-80, 2004. GRIFFIN, J.; EMERY, B. R.; HUANG, I.; PETERSON, C. M.; CARRELL, D. T. Comparative analysis of follicle morphology and oocyte diameter in four mammalian species (mousa, hamster, pig and human). Journal of experimental & Clinical Assisted Reproduction. v. 3. p. 9, 2006. MARTINS, F. S. Efeito da solução à base de água de coco e do meio essencial mínimo sobre a ativação e crescimento in vitro de folículos primordiais caprinos. 82f. 2004. 12
Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) Universidade Estadual do Ceará. Faculdade de Veterinária, Fortaleza, 2004. MATHIAS, J. Paca, tatu, cutia sim. Com o hábito de comer grãos, tubérculos, verduras, legumes e frutas, a alimentação na prática pesa pouco no bolso do criador. Acesso em: 16 de abril de 2012. Disponível em: http://revistagloborural.globo.com/globorural/0,6993,eec1172966-4530-1,00.html 13
Ativação partenogenética de oócitos maturados in vitro em macaco de cheiro (Saimiri sciureus) Parthenogenetic activation of oocytes matured in vitro in squirrel monkey (Saimiri sciureus) Julianne Silva de Lima 1,2 ; Sarah Raphaella Rocha de Azevedo Scalercio 1,2 ; Nathália Nogueira da Costa 3 ; Adriel Behn Brito *1,2 ; Elizabete Nikolak 1,2 ; Sheyla Farhayldes Souza Domingues 1,2 1 Laboratório de Biologia e Medicina de Animais da Amazônia, UFPA, Brasil 2 Programa de Pós-graduação em Ciência Animal, UFPA, Brasil 3 Laboratório de Fertilização in vitro, UFPA, Brasil * Email: adrielbehn@yahoo.com.br ABSTRACT The aim this study was develop a protocol of in vitro embryo production (IVEP) in Saimiri sciureus, performing maturation in vitro (IVM) and following parthenogenetic activation (PA). Oocytes was subjected to PA by applying ionomycin combined with 6- DMAP. In total, 89% of oocytes reached metaphase II, observing 85% cleavage rate and 33% of blastocist rate. This study is first to describe PIVE in S. sciureus using oocytes in vitro matured. This study will improve in developing biotechnologies of reproduction in primates. Key words: In vitro embryo production; in vitro maturation; Parthenogenesis. Palavras-chave: Produção in vitro de embrião; Maturação in vitro; Partenogênese. INTRODUÇÃO Entre os primatas neotropicais, a espécie Saimiri sciureus, conhecida popularmente por macaco de cheiro, destaca-se como um importante modelo experimental para pesquisas biomédicas. Apesar desse relato, as biotecnologias da reprodução (BR) ainda são pouco estudadas nessa espécie (Domingues & Caldas- Bussiere, 2006). Um dos fatores limitantes para a eficácia das BR é a obtenção de oócitos viáveis. Diversos trabalhos envolveram protocolos de obtenção oocitária pela indução da ovulação (Kuehl & Dukelow, 1979) e estimulação hormonal ovariana (Asakawa & Dukelow, 1982). No entanto, a obtenção de oócitos imaturos, sem o uso de 14
estimulação hormonal e destinados posteriormente à maturação oocitária in vitro (MIV), ainda não foi descrita. Estudos básicos sobre as BR são indispensáveis para obter a produção in vitro de embriões (PIVE). Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver um protocolo de PIVE em S. sciureus, realizando a MIV, seguida da ativação partenogenética (AP). MATERIAL E MÉTODOS Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal do Instituto Evandro Chagas (CEPAN-0009/2011). Foram utilizadas 3 fêmeas adultas de S. sciureus, pertencentes ao plantel reprodutivo do Centro Nacional de Primatas. Os animais foram contidos com Cloridrato de Ketamina (10mg/PV) e Xilazina (1mg/PV), e para a técnica de laparotomia permaneceram sob anestesia inalatória (Halotano à 2%). Os oócitos puncionados por aspiração folicular foram lavados em meio Hepes-TCM 199 e destinados à MIV, de acordo com o protocolo de Lima et al. (2012) por 44 h, a 37º C, em atmosfera de 5% de CO 2. Após a MIV, os oócitos foram desnudados após sucessivas pipetagens para constatação da maturação nuclear (aparecimento do primeiro corpúsculo polar) e submetidos ao protocolo de AP utilizando 5 µm de ionomicina por 5 minutos em associação com 100 µm de 6-DMAP por 3 h. Os possíveis partenotos foram cultivados em meio SOF à 37º C em atmosfera com 5% de CO 2 por 7 dias. Os dados estão apresentados em M ± DPM. RESULTADOS E DISCUSSÃO Foram obtidos 12 oócitos pela aspiração folicular, sendo 3 encontrados em degeneração e 9 submetidos a MIV. Os oócitos considerados degenerados apresentaram aspecto escuro, retração e/ou divisão desigual do ooplasma. Dessa forma, células com essas características foram retiradas da MIV, pois é sabido que oócitos de boa qualidade, com boas características morfológicas é um dos primeiros requisitos para o sucesso da PIVE (Seneda et al., 2002). Após a MIV, 7 oócitos foram considerados maturados. A taxa de maturação oocitária foi similar à encontrada em outra espécie de primata neotropical (89% versus 87%) após a utilização do mesmo protocolo de cultivo in vitro (Lima et al., 2012). Esses dados ratificam a eficiência da MIV em primatas, podendo desta forma ser utilizada em outras espécies. Após a AP, a avaliação do desenvolvimento embrionário ocorreu pela taxa de clivagem (dia 3) com a observação 15
de 85%; e pela taxa de blastocistos (dia 7), com 33%. Este é o primeiro trabalho a descrever a PIVE em S. sciureus a partir da MIV. A ausência de estimulação hormonal exógena para o crescimento folicular in vivo está sendo frequentemente questionada devido aos danos que o excesso de hormônios pode causar nas fêmeas (Zheng, 2007). A MIV disponibiliza uma oportunidade na sua aplicação devido à redução dos seus elevados custos. Além desta técnica surgir como uma alternativa para mulheres que passaram por tratamentos de quimioterapia, promovendo oportunidades reprodutivas (Zheng, 2007). CONCLUSÕES Este estudo auxiliará no aperfeiçoamento de BR em primatas do gênero Saimiri e melhor compreensão dos aspectos da embriologia desta espécie, além de servir como um modelo experimental para humanos e outros primatas ameaçados de extinção. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ASAKAWA, W.; DUKELOW, R. Chromosomal analyses after in vitro fertilization of squirrel monkey (Saimiri sciureus) oocytes. Biology of Reproduction, v. 26, p. 579-583, 1982. DOMINGUES, S. F. S.; CALDAS-BUSSIERE, M. C. Fisiologia e biotécnicas da reprodução desenvolvidas em fêmeas de Primatas Neotropicais importantes para a pesquisa biomédica. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v. 30, p. 57-71, 2006. KUEHL, T. J.; DUKELOW, W. R. Maturation and in vitro fertilization of follicular oocytes of the squirrel monkey (Saimiri sciureus). Biology of Reproduction, v. 21, p. 545-556, 1979. LIMA, J. S.; LEÃO, D. L.; SAMPAIO, R. V.; BRITO, A. B.; SANTOS, R. R.; MIRANDA, M. S.; OHASHI, O. M.; DOMINGUES, S. F. S. Embryo production by parthenogenetic activation and fertilization of in vitro matured oocytes from Cebus apella. Zygote, Cambridge University Press, p. 1-5, 2012. SENEDA, M. M.; ESPER, C. R.; GARCIA, J. M.; ANDRADE, E. R. Aspectos técnicos e biológicos da obtenção de oócitos bovinos: revisão de literatura. Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 23, n. 1, p. 101-110, 2002. ZHENG, P. Effects of in vitro maturation of monkey oocytes on their developmental capacity. Animal Reproduction Science, v. 98, p. 56-71, 2007. 16
Avaliação do auto-transplante intraperitonial de fragmentos de córtex ovariano de macaco de cheiro Evaluation of intraperitoneal autotransplantation of fragments of ovarian cortex of squirrel monkey Sarah Raphaella Rocha de Azevedo Scalercio 1,2 ; Elizabeth Nikolak 1,2 ;Marcia Cristina Miranda 1,2 ; Adriel Behn Brito* 1, 2 ; Sheyla Farhayldes Souza Domingues 1,2 Regiane Rodrigues dos Santos 1,2,3 1 Laboratório de Biologia e Medicina de Animais da Amazônia, UFPA, Brasil 2 Programa de Pós-graduação em Ciência Animal, UFPA, Brasil 3 Faculty of Veterinary Medicine, Utrecht University, Utrecht, The Netherlands *Email: adrielbehn@yahoo.com.br ABSTRACT The main objective of this study is evaluate the intraperitoneal autotransplantation of fresh ovarian cortex fragments of Saimiri sciureus. Therefore, we used classic histology to evaluate the follicular morfology, after autotransplantation to ensure the quality of tissue cultured in vivo. This preliminary study demonstrates that intraperitoneal autotransplantation is appropriate and can be used as a tool to evaluate the follicular quality of ovarian cortex fragments in the squirrel monkey, and additionally serve as an experimental model to test autotransplantation in humans and other primates threatened with extinction. Key words: Auto-transplantation, ovarian tissue, squirrel monkey. Palavras-chave: Auto-transplante, tecido ovariano, macaco-de-cheiro. INTRODUÇA O O transplante do tecido cortical ovariano é um procedimento utilizado para avaliar a sobrevivência e o desenvolvimento folicular após criopreservação, com importantes aplicações para mulheres submetidas a tratamentos de radio ou quimioterápicos, uma vez que o transplante após a terapia possibilita o retorno das funções ovarianas (Donnez & Dolmans, 2010). Esta também é uma alternativa promissora para a preservação de patrimônios genéticos de animais em perigo de extinção, possibilitando a posterior utilização em programas de reprodução assistida; 17
viabilizando o sucesso de pesquisas com animais que apresentam dificuldades reprodutivas ou aqueles utilizados como modelo de estudos na experimentação (Santos et al., 2010). A espécie Saimiri sciureus, conhecida como macaco de cheiro tem ampla distribuição geográfica na região amazônica e destaca-se como modelo experimental, para pesquisas biomédicas incluindo a reprodução humana (Walker et al., 2009). Apesar de alguns estudos de reprodução com primatas não humanos (PNH), somente Schonfeldt et al (2010), obteve desenvolvimento folicular, utilizando xeno-transplante, de tecido ovariano de Callitrhix jacchus, após congelação lenta. Contudo, informações acerca do transplante de tecido ovariano em PNH neotropicais da Amazônia precisam ser conhecidas, com objetivo de avaliar a utilização destes, como modelo para cultivo in vivo, de tecido ovariano, após criopreservação. Neste contexto, este estudo teve com objetivo avaliar o autotransplante intraperitoneal a fresco de tecido cortical na espécie de S. Sciureus. MATERIAL E ME TODOS Todos os procedimentos experimentais deste estudo foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal do Instituto Evandro Chagas (CEPAN-IEC Nº 0009/2011) e seguiram as orientações do Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal. Foi utilizada uma fêmea adulta (~11 anos) da espécie S. Sciureus, com características fenotípicas normais para a espécie, pertencentes ao plantel reprodutivo do Centro Nacional de Primatas, com histórico reprodutivo e bom estado de saúde comprovado. Para o experimento, o animal foi contido com Cloridrato de Ketamina (10mg/PV) e Xilazina (1mg/PV), permanecendo sob anestesia inalatória (Halotano a 2%) e por meio de laparotomia exploratória, um ovário foi trazidos ao nível da superfície abdominal, para a retirada da biopsia, utilizando uma técnica já descrita (Santana et al., 2012). A biópsia do tecido cortical ovariano teve aproximadamente 3 mm 3. O tecido foi coletado e fragmentado e logo em seguida, coletada a amostra controle (T0) e posteriormente, os fragmentos restantes foram suturados entre si, com fio reabsorvível de Ácido Poliglicólico (número 2.0), utilizando agulha cilíndrica, sem bisel. Após sutura, os fragmentos foram auto-enxertados em uma loja intraperitonial, a 3 cm de distancia a partir da linha alba, e 4 cm a partir da crista do osso ilíaco. Os enxertos foram coletados e avaliado após 6 meses (T1) e sete meses e meio (T2). Todo material foi fixado (formaldeido 10%), desidratado, embebido em parafina, seccionado 18
a 4μm e montado em lâmina, para coloração com hematoxilina-eosina (HE) e PAS (Periodic acid-schiff). Os Folículos Pré-Antrais (FOPA's) foram contados, por secções e classificados, de acordo com Domingues et al. (2003). Ou seja, foram considerados folículos primordiais, aqueles com um oócito rodeado por uma camada de células da pré-granulosa de forma achatada; transição aqueles que apresentavam uma única camada de célula mista (achatada e cúbica); primário com uma única camada composta apenas de células da granulosa de formato cubóide; ou secundário com duas ou mais camadas de células da granulosa de formato cubóide. Em seguida os FOPA's foram fotografados utilizando uma câmera (Canon, USA) acoplada ao microscópio (Leica, Wetzlar, Germany), para captura das imagens (400x). Os folículos foram caracterizados como morfologicamente normais ou degenerados, de acordo com Santos et al. (2006). RESULTADOS E DISCUSSA O Foi observado em T0, FOPA s e numerosos aglomerados de células da granulosa, encapsulado por uma concha de tecido conjuntivo, distribuídos ao longo do tecido analisado, corroborando, com dados de Walker et al. (2009), podendo este, ser um sinal que o animal está iniciando a menopausa. A Tabela 1 resume o número de FOPA s observados e distribuídos pela classe folicular. Destes, a maioria eram folículos primordiais com 33,4% (6/18), primários com 16,6 (3/18) e 27,8% de secundários (5/18). Com relação a morfologia, 55,6% (10/18) do total de folículos estavam com aparência normal, dos quais, folículos primordiais, de transição e secundários apresentaram 30% (3/10) de morfologia normal, seguido dos folículos secundários, com 10% (1/10). Seis meses após o auto-transplante, foi observada uma remodelagem do tecido ovariano enxertado, notória vascularização local, mostrando uma boa irrigação tecidual, onde 12 FOPA s foram identificados, destes, 53,8% (7/13) eram folículos primordiais e 23,1% (3/13) eram primários. Quando avaliada a morfologia, os folículos primordiais se mostraram 85,7% (6/7) normais, seguido de folículos primários, com 14,3% (1/7) normais. Em contra partida, cerca de sete meses e meio depois, foi observado no momento da cirurgia, uma possível absorção do enxerto, uma vez que, pouco material estava visível, com intenso edema local e reação inflamatória aparente no peritônio. Esta resposta imunológica não seria esperada, acredita-se que esta inflamação pode ter sido causada pelo procedimento cirúrgico, no momento da cirurgia de 6 meses, que pode ter provocado uma infecção, ou, simplesmente porque os 19
fragmentos teciduais eram insuficientes para manter um número mínimo de reserva folicular por um longo período de tempo. Tabela. 1: Percentual da população e da morfologia normal de folículos primordiais, primários e secundários, antes (T0) e 6 meses após auto-transplante (T1). População Folicular Morfologia Normal Classe Folicular % Classe % Classe % Total T0 T1 T0 T1 T0 T1 Primordial 33,4 53,8 30 85,7 50 85.7 Transição 22,2 15,4 30 0,0 75 0,0 Primário 16,6 23,1 10 14.3 33.3 33.3 Secundário 27,8 7,7 30 0,0 60 0,0 Total 100 100 100 100 10/18 7/13 CONSIDERAÇÕES FINAIS Foi possível observar FOPA's após 6 meses de autotransplante (T1), sendo este tempo ideal para o cultivo in vivo, já que com sete meses e meio de transplante, os FOPA's não estão mais presentes. Desta forma, este estudo preliminar pode sugerir o autotransplante intraperitoneal do tecido ovariano, como um local apropriado, para manutenção de folículos, para posterior avaliação do desenvolvimento folicular após a criopreservação de tecido cortical ovariano, por um período máximo de seis meses. Ainda é necessário melhorar a técnica de transplante para permitir a sobrevivência folicular e funcionalidade ovariana por longos períodos. RE ER NCIAS BIBLIO R ICAS DOMINGUES, S. F. S.; FERREIRA, H. S.; MUNIZ, J. A. P. C.; LIMA, A. K. F.; OHASHI, O. M.; FIGUEIREDO, J. R.; SILVA L. D. M. Mechanical isolation of capuchin monkey (Cebus apella) preantral ovarian follicles. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. v. 55, p. 301-308, 2003. DONNEZ, J. & DOLMANS, M. M. Cryopreservation and transplantation of ovarian tissue. Clinical Obstetrics & Gynecology, v. 53, n. 4, p.787-796, 2010. SANTANA, L. N.; BRITO, A. B.; BRITO, D. C.; LIMA, J. S.; DOMINGUES, S. F.; SANTOS, R. R. Adaptation of a trap door technique for the recovery of ovariancortical biopsies from Cebus apella (capuchin monkey) Zygote, v. 5 p. 1 4, 2012. 20
SANTOS, R. R.; RODRIGUES, A.P.; COSTA, S. H.;SILVA, J. R.; MATOS, M. H.; LUCCI, C. M.; BÁO, S. N.; VAN DEN HURK, R.; FIGUEIREDO, J. R. Histological and ultrastructural analysis of cryopreserved sheep preantral follicles. Animal Reproduction Science, v. 91, p. 249-263, 2006. SANTOS, R. R.; AMORIM, C.; CECCONI, S.; FASSBENDER, M.; IMHOF, M.; LORNAGE, J.; PARIS, M.; SCHOENFELDT, V.; MARTINEZ-MADRID, B. Cryopreservation of ovarian tissue: An emerging technology for female germline preservation of endangered species and breeds. Animal Reproduction Science. Aug 18, 2010. VON SCHÖNFELDT, V.; CHANDOLIA, R.; KIESEL, L.; NIESCHLAG, E.; SCHLATT, S.; SONNTAG, B. Advanced follicle development in xenografted prepubertal ovarian tissue: the common marmoset as a nonhuman primate model for ovarian tissue transplantation, Fertility and Sterility, v. 95, p. 1428-1434, 2010. WALKER, M. L.; ANDERSON, D. C.; HERNDON, J. G.; WALKER, L. C. Ovarian aging in squirrel monkeys (Saimiri sciureus). Reproduction, v. 138, n. 5, p.793-799. 2009. 21
Características ultrassonográficas das estruturas ovarianas encontradas durante o ciclo estral de catetos (Tayassu tajacu) Ultrasonographic characteristics of the ovarian structures found during the estral cycle in collared peccaries (Tayassu tajacu) Keilla Moreira Maia 1* ; Gislayne Christianne Xavier Peixoto 1 ; Mariana Araújo Silva 1 ; Aracely Rafaelle Fernandes Ricarte 1 ; Moacir Oliveira Franco 1 ; Alexandre Rodrigues Silva 1 1 Laboratório de Conservação de Germoplasma Animal LCGA, Universidade Federal Rural do Semi-Árido UFERSA, Mossoró, RN, Brasil * Email: keillamaia@hotmail.com ABSTRACT The objective of the present study was to describe the ultrasonographic characteristics of the ovarian structures found during the estrous cycle in collared peccaries. The estrous cycles of four sexually mature female collared peccaries were monitored. Through ultrasonography, an ovary detection rate of 100% was achieved. The diameter of the ovarian follicles was 0.23 ± 0.1 cm during the estrogen peak. Corpora lutea were the hyperechoic ovoid bodies presenting 0.36 ± 0.2 cm identified during the progesterone phase. To the best of our knowledge, the ultrasonographic characteristics of the ovarian structures were for the first time described in collared peccaries. Key words: ovarian morphology; imaging techniques; Collared peccary. Palavras-chave: morfologia ovariana; técnicas de imagem; cateto. INTRODUÇÃO Os catetos (Tayassu tajacu) estão constantemente expostos às ações do desmatamento e da caça predatória. Como consequência, foram recentemente classificados como vulneráveis a extinção no Brasil, especialmente nos biomas Caatinga e Mata Atlântica (ICMBio, 2011). Na tentativa de ampliar os conhecimentos acerca da espécie, sugere-se a utilização da ultrassonografia como um método de estudo de seus parâmetros reprodutivos, haja vista que até o presente momento, tal recurso foi apenas utilizado para diagnóstico de gestação (Mayor et al., 2005). Desse modo, o objetivo do presente estudo foi descrever as características ultrassonográficas das estruturas ovarianas encontradas durante o ciclo estral de catetos. MATERIAIS E MÉTODOS 22
No Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA), foram selecionadas quatro fêmeas de cateto com idade média de 16 ± 0,4 meses e pesando 20,6 ± 1,1 Kg. Estas foram monitoradas ao longo de pelo menos um ciclo estral completo, a cada três dias, utilizando-se um aparelho portátil de ultrassonografia (Aquila vet, Pie Medical, Nutricell, Campinas, SP, Brasil), com transdutor microconvexo em modo B, de 5-7,5 MHz. Os ovários foram identificados e avaliados quanto à aparência, ecogenicidade e ecotextura, e presença de estruturas, durante as fases folicular e luteal do ciclo estral. Comparações referentes à morfometria ovariana foram realizadas utilizando-se ANOVA seguida do teste t de Student (P<0,05). RESULTADOS E DISCUSSÃO Ao exame ultrassonográfico, os ovários foram definidos como estruturas ovais, levemente hipoecóicas em relação ao tecido circundante, e simétricas (P > 0,05). Os mesmos se mostraram com ecotextura heterogênea, quando da presença de folículo ou corpo lúteo. As dimensões ovarianas encontradas por ultrassonografia no presente trabalho foram de 1,05 ± 0,1cm de comprimento, 0,92 ± 0,1cm de largura, semelhantes às descritas por exame, após necropsia, em animais que viviam sob as mesmas condições do presente estudo (Lima, 2011). Entretanto, os mesmos valores foram maiores que os verificados em animais capturados da Floresta Amazônica (Mayor et al., 2006). Tais diferenças podem ser devido ao fato de que os animais deste estudo foram criados em cativeiro desde o nascimento, com melhores condições de alimentação, apresentando um peso corporal maior do que os recém capturados da Floresta Amazônica. Quanto à avaliação de estruturas ovarianas na fase folicular, os folículos ovarianos foram identificados em todos os animais deste estudo durante o pico de estrógeno, apresentando-se como uma estrutura circular, regular, contendo líquido anecóico. O diâmetro encontrado para o folículo pré-ovulatório foi 0,23 ± 0,1 cm (Figura 1A). No auge da fase luteal, o corpo lúteo se mostrou como uma estrutura ovóide, protuberante, projetado na superfície do ovário, com dimensão de 0,36 ± 0,2 cm, atingindo valores máximos de 1,02 cm (Figura 1B). As dimensões encontradas para estruturas foliculares durante o pico estrogênico correspondem aos descritos anteriormente para os grandes folículos antrais (~0,23 cm), através de análise histológica, para a mesma espécie (Mayor et al., 2006). O diâmetro do corpo lúteo 23
encontrado neste mesmo estudo (~0,7 cm) está dentro da variação dos dados encontrados por ultrassonografia. Figura 1. Imagens ultrassonográficas dos ovários (setas brancas) de fêmeas de cateto durante a fase folicular (A) com um grande folículo antral (círculo) projetado na superfície, e durante a fase luteal (B), mostrando a presença de um corpo lúteo (elipse). CONCLUSÃO Ao nosso conhecimento, este estudo descreveu, pela primeira vez, os aspectos ultrassonográficos das estruturas ovarianas encontradas durante o ciclo estral de catetos. Constatou-se a eficiência da ultrassonografia quanto a identificação e a caracterização das referidas estruturas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ICMBio Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade. Seis espécies de mamíferos ungulados estão ameaçadas de extinção no Brasil. Acesso em: 22 de novembro de 2011. Disponível em: http://www.icmbio.org.br. LIMA, G. Caracterização e conservação da população de folículos ovarianos pré antrais de catetos (Tayassu tajacu, Linnaeus, 1758). 2011. 132 p. Dissertação Curso de Pós Graduação em Ciência Animal, Universidade Federal Rural do Semi-árido. MAYOR, P.; LOPEZ-GATIUS, F.; LOPEZ-BEJAR, M. Integrating ultrasonography within the reproductive management of the collared peccary (Tayassu tajacu). Theriogenology v. 63, p. 1832 1843, 2005. MAYOR, P.; FENECH, M.; BODMER, R.; LOPEZ-BEJAR, M. Ovarian features of the wild collared peccary (Tayassu tajacu) from the northeast Peruvian Amazon. Gen Comp Endocrinol v. 147, p. 268 275, 2006. 24
Caracterização da população de folículos ovarianos pré-antrais de cutias (Dasyprocta agouti) criadas no semi-árido nordestino do Brasil Characterization of the ovarian follicle population of agoutis (Dasyprocta agouti) bred under captivity in the northeastern Brazilian semiarid Erika Aparecida Araújo dos Santos* 1 ; Gabriela Liberalino Lima 1 ; Patrícia da Cunha Sousa 1 ; Lizandra de Souza Cordeiro 1 ; Pedro Augusto Cordeiro Borges 1 ; Alexandre Rodrigues Silva 1 1 Laboratório de Conservação de Germoplasma Animal LCGA, Universidade Federal Rural do Semi-Árido UFERSA, Mossoró, RN, Brasil *erikasantos_vet@gmail.com ABSTRACT The aim of this research was to estimate the ovarian follicular population in agoutis. A total of 6 female were used and their ovaries were submitted to classical histology. Preantral ovarian follicles were defined as those presenting an oocyte surrounded by one or more layers or granulose cells, with absence of the antrum, classified as primordial, primary and secondary. The estimative of the follicular population was found by the formula: Follicular population = [(Nº of follicles X Nº of sections X Thickness of the cut)/(nº of observed sections X means of the diameter of the nucleus)]. Comparison on the follicular categories was conducted by the ANOVA. A total of 2550.3 ± 3000.7 e 2880.9 ± 2992.7 follicles were found for right and left ovary, respectively, without significant differences between them. From those, proportions of 84.89% primordial, 14.94% primary and 0.17% secondary follicles were found. Key words: Agouti, ovary, preantral follicles Palavras-chave: Cutias, ovário, folículo pre antral INTRODUÇÂO A cutia (Dasyprocta agouti) é um roedor pertencente à família Dasyproctidae, que apresenta um importante papel na propagação de muitas espécies de plantas. Sua carne representa uma importante fonte de proteína alternativa, com potencial exploração econômica (Mollineu et al., 2011). Embora esta espécie não esteja em risco de extinção, sua população tem sofrido uma redução significativa no Brasil, devido à caça indiscriminada e à destruição de seu habitat (Hosken & Silveira, 2001). 25
A obtenção de informações sobre seus aspectos reprodutivos básicos são requeridos para o auxílio da sua produção racional e consequente preservação (Conceição et al., 2008). Nesse sentido, o estudo da população de folículos ovarianos pré antrais forneceria informações que poderiam contribuir para o aumento da eficiência de biotécnicas aplicadas a reprodução nesta espécie. Assim, o objetivo deste trabalho foi estimar a população de folículos ovarianos pré antrais de cutias, no total e por categoria folicular. MATERIAL E MÉTODOS Os animais usados neste trabalho foram provenientes do Centro da Multiplicação dos Animais Silvestres (CEMAS) - UFERSA. Foram utilizadas seis fêmeas, com idade de 2 a 6 anos, pesando 2,42 ± 0,19 kg. Os animais foram mantidos em baias coletivas e alimentados com frutas e ração balanceada produzida na própria universidade, recebendo água à vontade. A eutanásia dos animais seguiu os preceitos éticos internacionais. Foram coletados seis pares de ovários, os quais foram submetidos ao processamento de histologia clássica e avaliada através de microscópio de luz com aumento de 40x (Carl Zeiss Ótico Inc., Chester, EUA). A estimativa da população folicular se deu através da seguinte fórmula recomendada por Carrijo Jr. (2010): População Folicular = Nº de folículos X Nº de seções obtidas X Espessura do corte Nº de seções observadas X Medida do diâmetro do núcleo do oócito Os dados foram expressos em média e desvio padrão. A comparação da população folicular entre as classes foliculares foi executada pelo ANOVA. Os valores foram considerados estatisticamente significativos quando p< 0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO Um total 2550,3 ± 3000,7 e 2880,9 ± 2992,7 folículos foram encontrados nos ovário direito e esquerdo, respectivamente, não sendo observada diferença estatística entre eles (P > 0,05). Estes resultados apresentam-se superiores à população folicular total descrita para camundongas, as quais apresentam uma média de 1.500 folículos por 26
ovário (Shaw et al., 2000). A maioria dos folículos encontrados pertencia à categoria primordial (84,89%), seguida dos primários (14,94%) e apenas 0,17% representavam os folículos secundários. CONCLUSÃO Este resumo mostra, pela primeira vez, a estimativa da população de folículos pré antrais no total e por categorias em ovários de cutias. No momento da contagem, pôde ser observado que existe uma grande variação da população folicular ovariana entre os indivíduos, o que parece ser uma característica comum entre os roedores. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CARRIJO JR, O. A.; MARINHO, A. P. S.; CAMPOS, A. A.; AMORIM, C. A.; BÁO, S. N.; LUCCI, C. M.. Morphometry, Estimation and Ultrastructure of Ovarian Preantral Follicle Population in Queens. Cells Tissues Organs, v. 191, p. 152 160, 2010. CONCEIÇÃO, R. A.; AMBRÓSIO, C. E.; MARTINS, D. S.; CARVALHO, A. F.; FRANCIOLLI, A. L. R.; MACHADO, M. R. F.; OLIVEIRA, M. F.; MIGLINO, M. A. Aspectos morfológicos do saco vitelino em roedores da subordem Hystricomorpha: paca (Agouti paca) e cutia (Dasyprocta aguti). Pesq Vet Bras. v. 28, p. 253 259, 2008. HOSKEN, F. M.; SILVEIRA, A. C. Criação de cutias. Ed. Aprenda fácil, 2001. MOLLINEAU, W. M.; ADOGWA, A. O.; GARCIA, G. W. Liquid and frozen storage of agouti (Dasyprocta leporina) semen extended with UHT milk, unpasteurized coconut water, and pasteurized coconut water. Veterinary Medicine international. 2011. SHAW, J. M.; ORANRATNACHAI, A.; TROUNSON, A. O. Fundamental cryobiology of mammalian oocytes and ovarian tissue. Theriogenology, v.53, p.59-72, 2000. 27
Caracterização dos padrões de temperatura da bolsa escrotal em catetos (Tayassu tajacu Linnaeus, 1758) por termografia infravermelha Characterization of patterns of temperature scrotum in collared peccary (Tayassu tajacu Linnaeus, 1758) by infrared thermography Luanda Rêgo de Lima 1 *, João Batista Freire de Souza Junior², Érika Aparecida Araújo dos Santos 3, Leonardo Lélis de Macedo Costa 4, Moacir Franco de Oliveira 4, Aracely Rafaelle Fernandes Ricarte 4 ¹Mestranda da Universidade Federal do Ceará UFC; ²Doutorando da Universidade Federal Rural do Semi árido UFERSA; 3 Mestranda da Universidade Federal Rural do Semi árido UFERSA; 4 Docente da Universidade Federal Rural do Semi árido UFERSA * Email: luanda_rego@hotmail.com ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the use of infrared thermography in the evaluation of scrotal temperature of collared peccary, listing the seminal parameters and standards thermography of the scrotum. For this we used 12 male adults were first collected the semen and then held thermography of the scrotum. However, it was observed through the data that there was no relationship between semen quality and thermographic patterns and that these animals present thermographic patterns of the scrotum (31.5 C) than most mammals. Is it still necessary to carry out further studies with larger numbers of animals and use of animals with testicular changes in order to certify the use of thermography for the selection of breeding collared peccary. Key words: electroejaculation; scrotal temperature; infrared thermography Palavras-chave: eletroejaculação; temperatura escrotal; termografia infravermelha INTRODUÇÃO Os catetos (Tayassu tajacu) são animais rústicos que produzem carne e couro de excelente qualidade e atingem a maturidade sexual entre 8 e 11 meses. A técnica de termografia infravermelha vem sendo testada e utilizada em diversas espécies para várias finalidades, pois é um método não-invasivo de avaliação da temperatura superficial da pele. De acordo com Kastelic et al. (1997), os mamíferos possuem padrões e simetria da temperatura testicular, qualquer alteração destas variáveis pode 28
resultar em queda da qualidade espermática. A termografia foi utilizada para determinar a temperatura da bolsa escrotal e relacioná-la com os parâmetros seminais. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS) da Universidade Federal Rural do Semiárido (UFERSA), Mossoró-RN. Utilizou-se 12 catetos machos adultos, criados em cativeiros e selecionados através de exame clínico-geral. Através de um puçá os animais foram contidos para obtenção de duas imagens testiculares. Utilizou-se câmera termográfica infravermelha, a um metro de distância, para avaliar as alterações dos padrões e simetria testicular e relacioná-los à qualidade seminal. Apenas dados com alterações dos padrões termográficos seriam comparados com os parâmetros seminais. As imagens foram analisadas pelo software Flir Quickeport 1.2, considerando o padrão de calor oriundo da circulação sanguínea da bolsa escrotal nas porções média, cranial e caudal. Para a realização da coleta seminal, os animais foram contidos quimicamente com Propofol (IV) 5 mg/kg (Souza et al., 2008). Foi utilizado um eletroejaculador e tubos plásticos de 50mL para coleta do ejaculado, o qual foi imediatamente submetido à avaliação quanto ao aspecto e coloração, parâmetros seminais, concentração espermática, viabilidade, integridade da membrana, motilidade e vigor. Foram feitas 2 coletas de sêmen em cada animal, com intervalos de 15 dias. A análise estatística foi realizada através do software estatístico SAS. Os dados referentes às características seminais foram expressos na forma de média e desvio padrão. O teste Shapiro-Wilk verificou as condições de normalidade dos dados. Foram obtidos coeficientes de correlação de Pearson para temperatura da bolsa escrotal e parâmetros seminais. As médias da temperatura da bolsa escrotal foram comparadas pelo teste de Tukey-Kramer e considerado significativo quando p < 0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO A temperatura da superfície da bolsa escrotal não apresentou diferenças significativas, sendo a temperatura média de 31,5 C para as três porções investigadas. Todos os animais apresentaram o mesmo padrão e simetria da temperatura ao longo do testículo. A temperatura superficial do abdômen ficou em torno dos 32 C, apenas 0,5 C acima da temperatura da bolsa escrotal, este dado pode ser característico da espécie ou pode ter sido ocasionado pelo estresse da contenção física, porém de acordo com 29
Gabaldi e Wolf (2002) é um dado discrepante quando comparado com outros mamíferos que pode variar de 2 C a 6 C. Esse decréscimo da temperatura testicular é importante para manutenção da espermatogênese. Os parâmetros seminais estão apresentados na (Tab.1). Não foi observado nenhum tipo de relação entre os padrões de temperatura testicular e os parâmetros seminais. Os resultados mostram que a concentração espermática, assim como o volume do sêmen, obteve desvio padrão superior a média. Este resultado não se encontra em abordagem na literatura, mas pode ser atribuído à possível ejaculação retrógrada, já que não foi observado alterações nos padrões termográficos nestes animais. De acordo com Fagundes et al. (2011), a presença de espermatozóides no ejaculado de felinos, nem sempre é observada, embora seja realizada a obtenção do ejaculado com freqüência, é atribuído à ejaculação retrógrada o motivo para a diminuição de qualidade e quantidade de parâmetros seminais como a concentração espermática e volume. Apesar disto, este é o método de eleição para coleta de sêmen na espécie Tayassu tajacu principalmente pela segurança que oferece aos manipuladores. Tabela 1 Valores médios das variáveis ambientais e parâmetros seminais de catetos em ambiente semiárido. Variáveis e Parâmetros Média ±DP Temperatura de ar (ºC) 26,64 ±0,82 Umidade Relativa do ar (%) 58,58±4,62 Motilidade (%) 86,25±14,92 Vigor (0-5) 4,50±0,68 Concentração (x 10 6 /ml -1 ) 149,63 ±189,63 Vivos (%) 66,09 ±16,93 Hiposmótico (%) 84,22 ±17,05 Volume (µl) 2045,75 ±2519,23 CONSIDERAÇÕES FINAIS Os catetos apresentam padrões de temperatura da bolsa escrotal diferente da maioria dos mamíferos já estudados e não há relação entre os padrões termográficos e a qualidade seminal. Serão necessários estudos posteriores com maior número de animais com alterações testiculares para poder atestar se a termografia pode ser empregada na seleção de reprodutores catetos. 30
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS FAGUNDES, A.K.F., MOURA, M.R.P., OLIVEIRA, E.C.S., SILVA JR., V.A. Colheita de sêmen de gatos domésticos por meio de eletroejaculação... Peculiaridades e desafios. 2011. GABALDI, S. H., WOLF, A. A importância da termorregulação testicular na qualidade do sêmen em touros. Ciências Agrárias. FEA, adrenalina, v. 2, n. 2, jul-dez, p 66-70. 2002. KASTELIC, J.P., SILVA, A.E.D.F., BARBOSA, R.T., MACHADO, R. Novos métodos de avaliação da capacidade reprodutiva de touros. In Convenção Nacional da Raça Canchim, p.35-45. 1997. SOUZA, A.L.P.; CASTELO, T.S.; QUEIROZ, J.P.A.F.; BARROS, I.O.; PAULA, V.V.; OLIVEIRA, M.F.; SILVA, A.R. Evaluation of anesthetic protocol for the collection of semen from captive collared peccaries (Tayassu tajacu) by eletroejaculation. Anim Reprod Sci, v.116, p.370 375, 2009. 31
Comparação entre diferentes curvas de resfriamento utilizadas para a congelação do sêmen de catetos (Tayassu tajacu) Comparison between different chilling curves used for the cryopreservation of collared peccaries (Tayassu tajacu) semen Mariana Araújo Silva 1 ; Gabriela Liberalino Lima 1* ; Gislayne Christianne Xavier Peixoto 1 ; Thibério de Souza Castelo 1 ; Valéria Veras de Paula 1 ; Alexandre Rodrigues Silva 1 1 Laboratório de Conservação de Germoplasma Animal LCGA, Universidade Federal Rural do Semi-Árido UFERSA, Mossoró, RN, Brasil *E mail: gabyliberalino@yahoo.com.br ABSTRACT The objective of the study was to verify the interaction between freezing rates and the cryopreservation of collared peccary (Tayassu tajacu) semen. Ejaculates from eight animals were obtained using electroejaculation procedure and evaluated for motility, vigor, viability, functional membrane integrity and morphology. After dilution in coconut powdered water (ACP - 116C) based extender, samples were divided into two aliquots and submitted to a slow (A) or a fast (B) chilling curve, using a final concentration of 20% of egg yolk and 3% of glycerol. Samples were packed in straws of 0.25 ml and stored at -196 oc during one week. After thawing, the freezing-thawed procedures significantly reduced the sperm parameters, but no differences were observed between the curves (p > 0,05). In conclusion, we recommend cryopreservation of collared peccary semen from ACP 116C, using the fast freezing curve, which allows maximizing the time during the process. Key words: freezing curves; powdered coconut water; cryopreservation Palavras-chave: curvas de congelação; água de coco em pó; criopreservação INTRODUÇÃO A criopreservação de gametas é uma importante ferramenta na preservação de animais silvestres, permitindo a manutenção da viabilidade durante longos períodos, de recursos genéticos de várias espécies (Fickel et al., 2007), como o cateto (Tayassu tajacu). Recentemente, foi demonstrado que o sêmen de catetos pode ser criopreservado com o uso do diluente à base de água de coco em pó, utilizando uma 32
curva de resfriamento e congelação lenta, descrita para suínos domésticos e adaptada a esta espécie (Silva, 2012). No entanto, as variações de temperatura envolvidas na congelação do sêmen reduzem inevitavelmente a proporção de espermatozoides móveis e causa danos estruturais, bioquímicos e funcionais (Salomon & Maxwel, 1995), por isso a importância de adequar, para o sêmen das diferentes espécies, uma curva ideal, a fim de minimizar esses danos. Assim, o objetivo deste estudo foi comparar diferentes curvas de resfriamento na criopreservação do sêmen de catetos (Tayassu tajacu). MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados oito catetos sexualmente maduros provenientes do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS) da UFERSA. Foram obtidos 12 ejaculados obtidos através de eletroejaculação, os quais foram avaliados quanto a motilidade espermática, vigor, viabilidade, morfologia e funcionalidade e integridade da membrana acrossomal. Após a diluição em água de coco em pó (ACP-116c ) acrescido de 20% de gema de ovo, as amostras foram divididas em duas alíquotas, sendo uma delas submetida à curva de resfriamento lenta (0,092 oc/min) durante 240 min, previamente descrita para os catetos (Castelo et al., 2010); a segunda alíquota (B) foi submetida a uma curva de resfriamento rápida (0,3 oc/min) durante 70 min, previamente descrita para cães (Silva et al, 2006). Após atingirem 5 oc, em ambas as curvas, as amostras receberam uma concentração final de 3% de glicerol. Em seguida, foram acondicionadas em palhetas de 0,25 ml, expostas ao vapor de nitrogênio, e armazenadas em botijão criobiológico. Após uma semana, foram descongeladas em banho-maria a 37 oc/ 60s, e reavaliadas. Os resultados foram expressos em médias e erro padrão e submetidos a ANOVA seguida do teste t de Student (P < 0,05), exceto o vigor que foi avaliado pelo teste de Mann-Whitney (P < 0,05). RESULTADOS O processo de congelação e descongelação provocou uma redução nos valores para todas as características espermáticas avaliadas (P<0,05). Em relação à comparação das curvas de resfriamento, não foram verificadas diferenças entre as mesmas (P> 0,05), conforme demonstrado na tabela 1. 33