Hematologia Marcos K. Fleury Laboratório de Hemoglobinas Faculdade de Farmácia - UFRJ mkfleury@ufrj.br Coleta com anticoagulante adequado. Identificação do paciente. Rotulagem prévia dos frascos de coleta. Posição do paciente sentado ou deitado. Imobilização correta de crianças. Uso de luvas durante a coleta. 1
Coleta de material preferencialmente da fossa antecubital (cubital mediana, cefálica ou basílica). Desinfecção da pele com etanol a 70%. O garroteamento deve se estender por, no máximo, 1 minuto. Coleta a vácuo ou com seringa. (0,9 mm e 0,8 mm para adultos e 0,7 mm e 0,6 mm para as crianças). Pressão negativa mínima. Liberar o garrote antes de retirar a agulha. Pressionar o local da punção com o braço esticado. Homogeneizar o material por inversão (4 ou 5 vezes). 2
Sangue capilar Preferencialmente colhido da superfície plantar do calcanhar em bebês ou crianças até dois anos. Em crianças maiores ou adultos a coleta deve ser feita na superfície palmar das falanges distais dos dedos. Sangue capilar O dedo médio ou o anular são os preferidos. Em adultos a picada deve ultrapassar 1,5 mm de profundidade. Lancetas mais curtas devem ser usadas em RN e prematuros. A primeira gota de sangue deve ser desprezada. 3
Anticoagulantes e contêineres. Anticoagulante de escolha K 2 EDTA, K 3 EDTA e o Na 2 EDTA. K 2 EDTA seco ou em solução, em concentração final de 1,5 a 2,2 mg/ml (ICSH). Evitar o excesso de EDTA morfologia e eritrócitos. K 3 EDTA causa desidratação dos eritrócitos. Padronização dos procedimentos. Toda amostra é considerada como potencialmente infectante. Uso de luvas pelo coletador em qualquer circunstância. As luvas devem ser trocadas a cada paciente. O sistema a vácuo é preferível ao de seringas. Se a transferência de material for necessária, não retirar a tampa do tubo. O tubo não deve ser segurado com a mão durante a transferência. 4
2. Preparo da distensão de sangue Amostra Pode ser feita com sangue sem anticoagulante venoso ou capilar, ou com EDTA. O EDTA impede a agregação plaquetária distribuição homogênea. Sangue capilar apresenta grumos plaquetários. 2. Preparo da distensão de sangue Amostra Distensões sem anticoagulantes são isentas de artefatos. Boa Prática Anotar hora da coleta e hora da confecção da lâmina. 5
2. Preparo da distensão de sangue Lâminas limpas desengorduradas e não devem ser porosas coloração de fundo Uso de luvas. A rolha do tubo não deve ser usada como conta-gotas. O sangue deve ser manipulado com um capilar. 2. Preparo da distensão de sangue Colocação de uma gota de sangue na extremidade da lâmina Ângulo de 25 o a 30 o aplicado na frente da gota. Movimento suave e uniforme. Bain B, 4ª Ed. 2007 6
3. Coloração Vários corantes estão disponíveis Wright, Giemsa, May- Grünwald. Todos estão baseados no método de Romanowsky (eosina + azul de metileno). Os azures conferem aos ácidos nucléicos, às nucleoproteínas e ao grânulos basófilos a coloração azul. A eosina confere a cor laranja à hemoglobina, aos grânulos eosinofílicos e combinado á proteínas confere um gradiente de tons de azul a várias estruturas. 3. Coloração A coloração deve ser feita em ph correto. ph muito baixo leucócitos pálidos com grânulos vermelhos. ph alto impregnação de corante básico, impede a visualização de policromatofilia, os grânulos eosinófilos ficam acinzentados. O ph ideal deve estar entre 6,4 e 7,2. Os corantes devem ser filtrados. 7
Técnicas Básicas Hematócrito fração ocupada pelos eritrócitos em uma coluna de sangue centrifugado expresso como plasma fração decimal volume/volume. Hematócrito -Representa o percentual de células vermelhas na amostra de sangue. VN: 39 a 48% É determinado por meio de centrifugação a uma velocidade de 10.000 a 15.000 g por 5 minutos de um capilar preenchido com sangue. X cm Y cm hemácias Pode ser usado sangue com EDTA ou heparina. Pode apresentar uma variação de 2 a 3% em relação aos equipamentos automatizados. 8
Hemoglobina medida por colorimetria sendo expressa como uma fração decimal massa/volume. A dosagem é feita pela dissolução de um volume de sangue em diluente que lisa as hemácias produzindo uma solução de hemoglobina. VN: 13,0 a 16,0 g/dl A dosagem é feita por densidade ótica (ou absorvância) em 540 nm. O método recomendado pelo ICSH é o da cianometehemoglobina. Contagem de eritrócitos Contados automaticamente permite uma estimativa do volume globular correlacionando-a ao hematócrito. Expressa como número de células por unidade de volume. Realizada em contadores automatizados pelo método de impedância. VN: 4,30 a 5,60 x 10 12 /l Os equipamentos contam de 20.000 a 50.000 células melhorando a reprodutibilidade. 9
Contagem de leucócitos contados em câmara (hemocitômetro) ou automaticamente. Expressos em número de células por unidade de volume. VN 5 a 9 x 10 9 /l Na contagem manual é difícil distingui-los dos eritroblastos. Amostras leucopênicas devem ser contadas manualmente. Contagem de plaquetas Contadas por microscopia ótica ou automaticamente são expressas como número de células por unidade de volume. VN de 150 a 450 x 10 9 /l As técnicas manuais incluem metodologias usando sangue total ou plasma rico em plaquetas sedimentado ou centrifugado. O tamanho das plaquetas pode interferir nas contagens. 10
Índices hematimétricos - calculados a partir dos dados relativos a série vermelha Volume globular médio (VGM) -VN: 80 a 96 fl. VGM (fl) = Ht (%) x 10 Hm (milhões/µl) Hemoglobina globular média (HGM) VN: 27 a 32 pg HGM (pg) = Hb (g/dl) x 10 Hm (milhões/µl) Concentração de Hemoglobina globular média (CHGM) VN: 31 a 35% CHGM (g/dl ou %) = Hb (g/dl) x 100 Ht (%) Contagem de reticulócitos Podem ser contados manualmente ou por métodos automatizados. Os métodos manuais carecem de reprodutibilidade devido ao pequeno número de células contadas. As metodologias automatizadas podem classificar os reticulócitos de acordo com o grau de maturação da célula além de calcular os índices hematimétricos. 11
Contagem diferencial de leucócitos é a especificação dos tipos leucocitários expressa em percentagem. O ICSH preconiza a expressão dos resultados em valores absolutos. Distribuição desigual dos leucócitos na lâmina. Neutrófilos final da lâmina. Monócitos - nas bordas ao longo de toda a lâmina. Blastos e células imaturas concentram-se nos bordos. 12
Leucócitos Leucometria Normal 5,0 a 9,0 x 10 9 /l Leucopoese Granulócitos Neutrófilos Basófilos Eosinófilos Monócitos Linfócitos 13