Scire Salutis, Aquidabã, v.3, n.1, Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013.

RESUMO Journal homepage: www.arvore.org.br/seer ESTUDO COMPARATIVO DE TÉCNICAS PARASITOLÓGICAS BASEADA NO PRINCÍPIO DE SEDIMENTAÇÃO ESPONTÂNEA (HOFFMAN) E PARASITOKIT As parasitoses, entre as quais se destacam as enteroparasitoses, são mais frequentes na população mais carente. Diante de várias metodologias conhecidas para realização do exame parasitológico de fezes para identificação de cistos, protozoários, ovos e larvas de helmintos dos parasitos intestinais, e do surgimento de novas técnicas, o presente trabalho tem como objetivo avaliar o grau de concordância de um novo teste (Parasitokit ) com base em uma metodologia de reconhecida eficiência para o diagnóstico de helmintos e protozoários, em relação a outro método tradicionalmente utilizado em Análises Clínicas (Hoffman, Pons e Janner - HPJ). A técnica do Parasitokit tem como vantagem o dinamismo na confecção e a organização no que diz respeito ao menor espaço utilizado para a preparação e leitura do exame; o método de HPJ requer maior volume de vidraria na bancada para a confecção e leitura dos exames. Foram avaliadas quatrocentas amostras no período de doze meses e a análise dos dados foi feita por meio de estatística descritiva. O método do Parasitokit demonstra fácil manuseio, custo baixo e pequena demanda no espaço físico, apresentando um grau de não conformidade insignificante já que ocorreu concordância em 99,5% em relação ao método de HPJ que utiliza o cálice de sedimentação. PALAVRAS-CHAVE: Diagnóstico; Fezes; Parasitokit. COMPARATIVE STUDY OF PARASITOLOGICAL TECHNIQUES BASED ON THE PRINCIPLE SPONTANEOUS SEDIMENTATION (HOFFMAN) E PARASITOKIT Scire Salutis, Aquidabã, v.3, n.1, Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013. ISSN 2236 9600 SECTION: Articles TOPIC: Biomedicina DOI: 10.6008/ESS2236 9600.2013.001.0001 Lorena Mota Lopes Sant'Anna Universidade Tiradentes, Brasil http://lattes.cnpq.br/7135441400640283 lorenamotalopes@hotmail.com Fernanda de Jesus Oliveira Universidade Tiradentes, Brasil http://lattes.cnpq.br/2064553152351510 feh.nanda.oliver@gmail.com Cláudia Moura de Melo Universidade Tiradentes, Brasil http://lattes.cnpq.br/0905716723973397 claudiamouramelo@hotmail.com ABSTRACT The parasites, among which stand out the parasitic infections, are more common among the poor population. In front of many known methodologies in making the parasitological examination of feces for identification of cysts, protozoa, eggs and helminth larvae of the intestinal parasites, and the emergence of new techniques, the present work aims at evaluating the agreement degree of a new test (Parasitokit ) based in a methodology recognized efficiency to the diagnosis of protozoa and helminths, compared to another method traditionally used in Clinical Analysis (Hoffman, Pons and Janner - HPJ). The Parasitokit technique has as an advantage the dynamism in the making and organization with respect to the smaller space used for the preparation and reading exam; HPJ method requires a larger volume of glassware on the bench for making and reading tests. Four hundred samples were evaluated in twelve months and the data analysis took place by means of descriptive statistics. The Parasitokit method demonstrates easy handling, low cost and demand in the physical space, presenting a negligible degree of non-compliance, because agreement occurred in 99.5% compared to the HPJ method that uses the cup of sedimentation. Received: 12/09/2012 Approved: 20/02/2013 Reviewed anonymously in the process of blind peer. KEYWORDS: Diagnostic; Feces; Parasitokit. Referencing this: SANT'ANNA, L. M. L.; OLIVEIRA, F. J.; MELO, C. M.. Estudo comparativo de técnicas parasitológicas baseada no princípio de sedimentação espontânea (Hoffman) e Parasitokit. Scire Salutis, Aquidabã, v.3, n.1, p.6 15, 2013. DOI: http://dx.doi.org/10.6008/ess2236 9600.2013.001.0001 Scire Salutis (ISSN 2236 9600) 2013 Escola Superior de Sustentabilidade. All rights reserved. Rua Dr. José Rollemberg Leite, 120, Bairro Bugio, CEP 49050 050, Aquidabã, Sergipe, Brasil WEB: www.arvore.org.br/seer Contact: contato@arvore.org.br Phone: +055 (79) 9979 8991

Estudo comparativo de técnicas parasitológicas baseada no princípio de sedimentação espontânea (Hoffman) e Parasitokit INTRODUÇÃO As doenças parasitárias ou as parasitoses são mais frequentes entre a população mais carente. Para que se rotule um animal como parasito não existe um caráter único que possibilite essa classificação, sendo o parasitismo apenas um entre vários tipos associações interespecíficas (WILSON, 1980). O parasito se alimenta de seu hospedeiro, consumindo-lhe os tecidos e humores ou o conteúdo intestinal, com base nutricional e/ou energética, geralmente não causando lesões drásticas e evitando alterações que possam comprometer ou levar a perda deste (MASCARINI, 2003). A história da parasitologia não é uma história de grandes eventos; ela se desenrola ao longo dos séculos XIX e XX nos laboratórios das Universidades, na maioria das vezes, em precárias condições (MASCARINI, 2003). As oportunidades de desenvolvimento da parasitologia aumentaram com a criação e o estabelecimento das escolas de medicina e hospitais nos trópicos, fato que só ocorreu no final do século XIX, criando assim oportunidade de estudar os parasitas tropicais (LACAZ, 1972). No início de século XXI, as doenças parasitárias deixaram de mobilizar recursos internacionais de diferentes ordens, cedendo lugar a outros problemas como as chamadas doenças da modernidade, que são a SIDA (Síndrome da Imunodeficiência Adquirida), e as chamadas doenças reemergentes, como a tuberculose. A história da saúde humana tem mostrado que os males antigos persistem nos países subdesenvolvidos e também nos desenvolvidos, na sua grande maioria associados às deficiências existentes nas condições sanitárias, higiênicas, socioeconômicas, a não distribuição igualitária de renda e do acesso universal restrito à educação e aos serviços básicos de saneamento e de saúde (MASCARINI, 2003). Em vista da importância epidemiológica das infecções enteroparasitárias, o presente trabalho propõe-se analisar qualitativamente o grau de concordância entre dois métodos diagnósticos: Parasitokit e a técnica de sedimentação espontânea de Hoffman, Pons e Janer (1934), enfocando a eficácia diagnóstica e operacionalidade. REVISÃO TEÓRICA Parasitos intestinais apresentam ampla distribuição geográfica tanto no Brasil quanto nos demais países em desenvolvimento, sofrendo variações de acordo com as condições de saneamento básico, nível socioeconômico, grau de escolaridade, idade e hábitos higiênicos (SATURNINO et al., 2003). Métodos laboratoriais para diagnosticar doenças transmitidas por parasitas são de grande importância pela grande frequência de infecções enteroparasitárias que comprometem a saúde humana mundial (MARIANO et al., 2005). Os mais prevalentes agravos infecciosos são causados por infecções enteroparasitárias e o número de infectados a nível mundial é de aproximadamente 3,5 bilhões de pessoas. No Brasil, Scire Salutis v.3 n.1 Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013 Page 7

SANT'ANNA, L. M. L.; OLIVEIRA, F. J.; MELO, C. M. 130 milhões de habitantes são acometidos por alguma espécie de parasito (SHIMIZU et al., 2003). Desta forma, o exame parasitológico de fezes é um dos exames de rotinas mais realizado em Laboratório de Análises Clínicas. O presente trabalho propõe-se analisar qualitativamente o grau de concordância entre o Parasitokit e a técnica de sedimentação espontânea de Hoffman, Pons e Janer (1934), enfocando a eficácia diagnóstica e operacionalidade. O estudo coprológico ou exame de fezes visa o estudo das funções digestivas; abrangendo as provas de digestibilidade macroscópico e microscópico, exame químico, pesquisa de sangue oculto e outras provas, cujos resultados permitem estabelecer determinadas síndromes coprológicas. Como exames complementares, ainda restam os protoparasitológicos e a coprocultura, aliados aos exames radiográficos, bioquímica do sangue, tubagem gástrica, duodenal e todo o arsenal da moderna propedêutica armada ao alcance do clínico especializado. A principal função do trato alimentar é prover o organismo de um contínuo suprimento de água, eletrólitos e nutrientes, devendo o alimento ser conduzido ao longo do tubo digestivo a uma velocidade apropriada para que as funções digestivas e absortivas se realizem. Sofrendo influência poderosa do psiquismo e comandada pelo sistema nervoso, desempenha suas funções juntamente com o sistema endócrino (VALLADA, 1998). Em análises coproparasitológicas, a recuperação e a identificação de parasitos em diferentes estágios de desenvolvimento podem ser viáveis com a utilização de alguns métodos de concentração, tais como Sedimentação Espontânea, Ritchie e Coprotest. Existem também os específicos, sendo esses destinados à pesquisa e levantamentos epidemiológicos, como os métodos de Baermann-Moraes, Faust, Graham e Kato-Katz (GRAEFF et al., 1997). Dentre os métodos listados acima, os mais solicitados na prática médica para diagnóstico clínico na rotina laboratorial são os de Sedimentação Espontânea e a Baermann-Moraes que têm como objetivo principal a pesquisa de ovos/larvas de helmintos e cistos de protozoários (DE CARLI, 2007). A maioria dos serviços de saúde voltados para diagnósticos, no entanto, adota apenas a Sedimentação espontânea como metodologia, devido ao seu amplo espectro na observação/identificação de espécies parasitas e ao seu baixo custo quando comparada com a de Baermann-Moraes. Porém, apesar da técnica de Sedimentação Espontânea não necessitar de centrifugação, dispensar reagentes e ainda economizar nas vidrarias, a água fria envolvida no método não proporciona uma boa migração das larvas, exceto em infecções maciças (DE CARLI, 2007). Geralmente a concentração de ovos e cistos das fezes visa o seu achado, de modo mais rápido, nas infecções, mesmo ligeiras, em que o exame direto é negativo. Só o fato da existência de numerosas técnicas de enriquecimento de ovos e cistos prova que nenhuma delas é de todo eficiente. Via de regra, estas técnicas servem para concentrar os cistos de protozoários, e viceversa. O método de sedimentação espontânea por Hoffman, Pons e Janner (1934) é indicado principalmente para pesquisa de ovos de Schistosoma mansoni, serve também para a de ovos e larvas de outros vermes, sendo o mesmo de fácil execução e baixo custo. Scire Salutis v.3 n.1 Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013 Page 8

Estudo comparativo de técnicas parasitológicas baseada no princípio de sedimentação espontânea (Hoffman) e Parasitokit A técnica de sedimentação espontânea pelo método de Hoffmann, Pons e Janer foi desenvolvida para o diagnóstico das enteroparasitoses. Os principais objetivos das técnicas de sedimentação são o aumento da concentração de ovos operculados e não-operculados, larvas ou cistos e o isolamento de óleos e gorduras da maior parte dos detritos. Nessa técnica, os organismos são sedimentados por igual pela gravitação ou quando centrifugados. A sedimentação apresenta uma ação contrária quando comparada com a flutuação. Os cistos, oocistos, ovos e larvas são retidos no fundo do recipiente, enquanto os detritos são suspensos para a superfície, não interferindo no diagnóstico final, com ela podem ser encontrados ovos e larvas de helmintos, bem como cisto (DE CARLI, 2007). Geralmente, a solicitação de exames parasitológicos de fezes é feita por um profissional com competência para tal, especificando a forma da coleta, o tipo de exame, amostra e o método a ser utilizado de acordo com anamnese realizada na consulta clínica, pois sabendo que cada parasita intestinal tem sua variabilidade morfológica e biológica, será solicitado o método especifico para a detecção de tal parasita (SOUZA et al, 2009). Na prática, quem decide na maioria das vezes a técnica a ser utilizada nestes casos é o responsável técnico do Laboratório de Análises Clínicas, que escolhe o procedimento que proporcione um amplo espectro na identificação de parasitas ao nível de espécie. Mesquita et al. (1999) expõem que para que se obtenha um aumento da eficiência para qualquer diagnóstico parasitológico fecal, é ideal que pelo menos duas técnicas com diferentes fundamentos sejam utilizadas. Os estudos populacionais ou programas de controle são dirigidos com frequência a um parasito em especial ou a um grupo de espécie parasitária, sendo assim necessária apenas uma metodologia para a pesquisa do parasita em questão. Diversos são os métodos já propostos com a finalidade de qualificar e quantificar ovos de helmintos e cistos de protozoários em amostras fecais. Cada vez mais, são lançados no mercado sistemas comerciais, utilizados nas rotinas laboratoriais, dentre eles podendo ser citado o coprotest que trata-se de um kit que propicia a coleta de volume padronizado de fezes e que mostrou-se da fácil aplicação e viável, porém merece ser mais bem avaliado e aperfeiçoado para aplicação em estudo populacional. Sua utilização requer um laboratório com centrifuga, além da aquisição do próprio kit e outros suprimentos básicos (ARAÚJO et al, 2003). No Parasitokit são utilizadas diversas metodologias com fundamentos distintos. A utilização simultânea de técnicas com diferentes princípios tem o objetivo de aumentar a acurácia diagnóstica e, consequentemente diminuir os resultados falsos negativos utilizando o menor espaço possível na bancada. O diagnóstico parasitológico deve ser realizado de maneira apropriada, com maior sensibilidade e especificidade para detecção dos parasitos intestinais, vez que dele dependerá o tratamento específico (ARAÚJO et al, 2003). Conforme Frei (2008) afirma, por causa das más condições de vida das camadas populacionais menos privilegiadas, as endoparasitoses, decorrente de protozoários e\ou helmintos representam um problema de saúde pública grave. Existem três fatores indispensáveis para que Scire Salutis v.3 n.1 Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013 Page 9

SANT'ANNA, L. M. L.; OLIVEIRA, F. J.; MELO, C. M. ocorra a infecção, a clássica tríade epidemiológica das doenças parasitárias, que são: as condições do hospedeiro apresentando fatores predisponentes como idades, condição nutricional, fatores genéticos, culturais, comportamentais e profissionais, o parasito quando apresentando resistência ao sistema imune do hospedeiro e os mecanismos de escape vinculado a transformação bioquímicas e biológicas verificada ao longo do ciclo do parasito, e o meio ambiente quando associado as condições do hospedeiro e do parasito. METODOLOGIA O trabalho foi realizado no Laboratório de Análises Clínicas Bio Saúde, na cidade de Ribeira do Pombal, no estado da Bahia, situado a 300 km de Salvador e 200 km de Aracaju. Trata-se de um estudo comparativo de técnicas parasitológicas sendo realizado da seguinte forma: um quantitativo de 400 amostras fecais frescas foram coletadas em recipientes universais para exames laboratoriais, com volumes entre 50 ml e 60 ml e tampa de rosca, sem conservante. Este grupo amostral foi composto por usuários de demanda espontânea e induzida do Laboratório de Análises Clínicas Bio Saúde, onde foram processadas e analisadas durante12 meses de funcionamento rotineiro. Análise das técnicas parasitológicas Uma fração de cada amostra fecal foi submetida a processamento pelo Parasitokit. Cada unidade do referido Kit contêm: sistema de filtragem, tubo cônico, bastões de vidro (Figura 1), uma estante que comporta 36 Parasitokit. O tubo cônico tem capacidade para 11 ml de volume. Deste sedimento foi retirada uma alíquota de 700 µl, para subsequente observação em microscopia ótica (100X). Uma segunda fração de cada amostra fecal foi submetida à técnica coproparasitológica de Hoffman, Pons e Janer (1934) (Figura 2), considerada padrão ouro por ser a técnica mais utilizada nos laboratórios de parasitologia pelo fato de apresentar fácil manuseio, custo baixo e detectar cisto de protozoários, larva e ovos de helmintos em amostras formada, pastosa e semi-pastosa. Figura 1: Parasitokit. Fonte: Laboratório Bio Saúde. Scire Salutis v.3 n.1 Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013 Page 10

Estudo comparativo de técnicas parasitológicas baseada no princípio de sedimentação espontânea (Hoffman) e Parasitokit Figura 2: Cálice de Sedimentação - 150 ml; Tamis. Fonte: Laboratório Bio Saúde A avaliação da operacionalidade dos dois procedimentos diagnósticos, segundo a demanda por espaço físico, foi precedida de simulação de ocupação destes em bancadas do setor de Parasitologia do Laboratório de Análises Clínicas Bio Saúde. RESULTADOS E DISCUSSÃO Foi avaliado o espaço físico para o experimento, onde houve simulação de ocupação deste aplicado às duas técnicas em bancada do setor de Parasitologia do Bio Saúde Laboratório de Análises Clínicas. A bancada de trabalho com 1m de comprimento por 0,40 m de profundidade comportou um microscópio de luz e cinco taças com capacidade de 150 ml para Sedimentação Espontânea, enquanto no caso do Parasitokit, houve espaço para abrigar uma galeria contendo até 36 aparelhos (Figura 3). Figura 3: Bancada de Parasitologia contendo 5 cálices e 36 Parasitokit. Fonte: Laboratório Bio Saúde. Durante o desenvolvimento das técnicas, ambas apresentaram manuseio fácil, porém o Parasitokit apresentou vantagem no que diz respeito à demanda de espaço na bancada de manipulação e na bancada de leitura. Para cada três cálices pode-se utilizar uma galeria contendo Scire Salutis v.3 n.1 Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013 Page 11

SANT'ANNA, L. M. L.; OLIVEIRA, F. J.; MELO, C. M. trinta e seis aparelhos de Parasitokit. Com a otimização espacial da bancada para manipulação, diminuem as chances de acidentes de trabalho, pois os tubos cônicos são acondicionados em galerias contendo tampas bem vedadas, podendo até serem utilizados em trabalhos de campo para estudos epidemiológicos ou preparados em Unidades de coletas distantes do laboratóriosede. O Parasitokit, de acordo com levantamento de custo, apresentou vantagem sobre os materiais utilizados na técnica de Hoffman em 42% (Tabela 1). Tabela 1: Levantamento de custos dos materiais utilizados nas Técnicas de Hoffman, Pons e Janer e no Parasitokit. MATERIAIS CUSTO POR UNIDADE (R$) HOFFMAN PARASITOKIT Bastão de vidro 1,40 X X Cálice de plástico (200 ml) 1,80 X Tamis 0,50 X Parasitokit 1,20 X CUSTO TOTAL 3,70 2,60 Fonte: Labovida: Materiais para laboratório. É grande a evidência das desvantagens da utilização de cálices de sedimentação, uma vez que o método de Hoffman em relação ao Parasitokit apresenta custo mais elevado (Tabela 1), manuseio difícil e grande demanda de espaço da bancada do laboratório, acreditando assim que a sedimentação em tubo tende a torna-se rotineira em parasitologia clínica. Segundo Moitinho e Ferreira (1994), não é necessário muito rigor no peso ou no volume de amostras fecais para realização de exames parasitológicos de fezes. A avaliação visual da quantidade de fezes retirada com a ponta de uma espátula, como a utilizada no Parasitokit, é suficiente, entretanto, requer o treinamento de pessoal técnico para que sejam usadas suspensões de aproximadamente 1,0%, que por sua limpidez, permitem exames rápidos sem perda de rendimento em termo de positividade ou de número de espécie de ovos e cistos por lâmina. O aumento da concentração das suspensões fecais, como no método de Hoffman, não acarreta o aumento da sensibilidade dos exames parasitológicos de fezes ou a quantidade de ovos de helmintos/lâmina microscópica. Suspensões concentradas, por outro lado, tendem a gerar maior proporção de detritos fecais, dificultando a identificação dos parasitas. Em ambos os métodos os equipamentos são reutilizáveis após lavagem e secagem apropriadas, porém o descarte é inevitável com o aumento do tempo de uso. O Parasitokit apresenta vantagem neste aspecto por obter um volume menor que o cálice e tamis juntos, já que a vida útil de ambos é praticamente a mesma por se tratar da mesma matéria prima. A diferença de volume deve ser levada em conta no que diz respeito ao descarte de lixo, especialmente ao tratar-se de lixo biológico oriundo de resíduos de serviços de saúde (Laboratório de Análises Clínicas) devido ao seu poder contaminante. Neste contexto, o Parasitokit tem a vantagem adicional de causar um menor impacto ambiental. Das 400 amostras analisadas, 256 foram negativas (64%) e 144 positivas (36%) para infecções por protozoários e helmintos em ambas as técnicas, Parasitokit e Hoffman, Pons e Janer (1934) (Figura 4). Scire Salutis v.3 n.1 Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013 Page 12

Estudo comparativo de técnicas parasitológicas baseada no princípio de sedimentação espontânea (Hoffman) e Parasitokit 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 64% 64% 36% 36% Hoffman Parasitokit Positivas Negativas Figura 4: Percentagem das amostras negativas e positivas para ambas as técnicas: Hoffman, Pons e Janer e Parasitokit. Para ovos de helmintos na técnica de Hoffman, Pons e Janner, das 400 amostras analisadas, 22 apresentaram ovos de Ascaris lumbricoides (5,5%), 18 apresentaram ovos de Ancylostomidae (5%), 3 apresentaram ovos de Trichuris trichiura (0,75%), 2 apresentaram ovos de Schistosoma mansoni e Enterobius vermiculares (0,5%). Apenas houve não conformidade em duas amostras, onde uma apresentou positiva para ovo de Ascaris lumbricoides no Hoffman e negativo no Parasitokit e a outra, ao contrário, apresentou positiva para ovo de Ascaris lumbricoides no Parasitokit e negativo no Hoffman, mostrando que o nível de discordância entre as técnicas não foi estatisticamente significativo (Figura 5). 6,00% 5,00% 5,5% 5,5% 5,0% 5,0% 4,00% 3,00% 2,00% 1,00% 0,5% 0,5% 0,8% 0,8% 0,5% 0,5% 0,00% Ascaris lumbricoides Ancylostomatidae Schistosoma mansoni Trichuris trichiura Enterobius vermiculares Hoffman Parasitokit Figura 5: Percentagem de positividade para ovos de helmintos nas técnicas de Hoffman e Parasitokit. Ambas as técnicas apresentaram 100% de concordância para protozoários (Gráfico 3). Scire Salutis v.3 n.1 Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013 Page 13

SANT'ANNA, L. M. L.; OLIVEIRA, F. J.; MELO, C. M. 12% 11,0% 11,0% 11,0% 11,0% 11,0% 11,0% 10% 8% 6% 4% 2% 2,3% 2,3% 1,0% 1,0% 0% Entamoeba coli Endolimax nana Entamoeba histolytica/dispar Giardia lamblia Iodamoeba buchilli Figura 5: Percentagem de positividade para cisto de protozoários nas técnicas de Hoffmann, Pons e Janer e Parasitokit. CONCLUSÕES Hoffman Parasitokit Diante dos dados coletados, conclui-se que os métodos de Hoffman, Pons e Janer e do Parasitokit apresentam um alto grau de concordância, sendo que a vantagem deste último é a otimização do espaço físico para manuseio das amostras e para a leitura das mesmas, podendo até mesmo ser transportados. Outra vantagem reside no descarte de equipamentos utilizados uma vez que ambos são provenientes da mesma matéria prima, porém o Parasitokit possui um volume menor que o cálice e o tamis, causando assim um menor impacto ambiental. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ARAUJO, A. J. U. S.; KANAMURA, H. Y.; DIAS, L. C. S.; GOMES, J. F.; ARAÚJO, S. M.. Coprotest quantitativo: quantificação de ovos de helmintos em amostras fecais utilizando-se sistema de diagnóstico comercial. Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial, Rio de Janeiro, v.39, n.2, p.115-124, 2003. DOI: http://dx.doi.org/10.1590/s1676-2444.2003.000.200005 DE CARLI, G. A.. Parasitologia clínica: Seleção de métodos e técnicas de laboratório para diagnóstico das parasitoses humanas. 2 ed. Rio de Janeiro: Atheneu, 2007. FREI, F.; JUNCANSEN, C.; RIBEIRO-PAES, J. T.. Levantamento epidemiológico das parasitoses intestinais: viés analítico decorrente do tratamento profilático. Cadernos de Saúde Pública, Rio de Janeiro, v.24, n.12, p.2919-2925, 2008. DOI: http://dx.doi.org/10.1590/s0102-311x2008001200021 GRAEFF, T. C.; MEDEIROS, E.; ZANINI, G.; BRASIL, C. A. A.; CARDOZO, B. L.; DALPIAZ, M. G.; BISSOLL, W.. Inexpressive alternative, material for the isolation of larvae whit the Baermann method. Laboratório de parasitologia e pós-graduação em ciências, PUCRS, Porto Alegre, 1997. Disponível: <http:www.dbbm.fiocruz.br/ catálogos/processos/larvagem.html>. Acesso: 6 Ago 2003. HOFFMANN, W. A.; PONS, J. A.; JANER, J. L.. Sedimentation concentration method in schistosome. Porto Rico, 1934. Scire Salutis v.3 n.1 Out, Nov, Dez 2012, Jan, Fev, Mar 2013 Page 14

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