Introdução de métodos rápidos na rotina de um Laboratório de Saúde Pública Laboratório de Saúde Pública da Guarda Ana Marília Bidarra Monteiro Dionísio 11 de Abril de 2018
O Laboratório de Saúde Pública da Guarda Localiza-se no edifício da Unidade de Saúde Pública e serviços centrais da ULS da Guarda. Para além das atividades inerentes ao apoio à vigilância e programas de saúde pública, realiza também a prestação de serviços a clientes externos, outras entidades públicas, empresas e a particulares. 2
Número de parâmetros acreditados O Laboratório de Saúde Pública da Guarda É acreditado pelo IPAC segundo a norma NP EN ISO 17025:2005 desde 2011, com o anexo técnico L0570-1, onde constam 31 parâmetros acreditados. Evolução do número de parâmetros Acreditados 40 30 20 10 12 14 15 21 24 27 31 0 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 Ano 3
O Laboratório de Saúde Pública da Guarda Avaliação da qualidade da água nas vertentes Físico-química e Microbiológica, de acordo com as exigências da legislação nacional e comunitária e com as recomendações da OMS, numa abordagem de problemas ambientais que representam risco para a saúde humana. Planos de vigilância e monitorização de fatores de risco, em articulação com os Serviços de Saúde e outros com âmbito alargado de utilização pública. 4
Matrizes analisadas no Laboratório de Saúde Pública da Guarda Águas de consumo Águas termais Águas de processo (hemodiálise) Águas de processo (uso industrial) Águas minerais naturais e de nascente Águas naturais doces subterrâneas Águas de piscina Águas naturais doces balneares Águas naturais doces superficiais 5
Programas em que o Laboratório de Saúde Pública da Guarda está envolvido Projetos de pesquisa e investigação propostos pela DGS e ARS Centro e de iniciativa da ULS e/ou em articulação com a UBI, IPG, IPCB Escola Superior de Saúde Dr. Lopes Dias, Instituto Piaget Bragança e outras entidades públicas ou privadas. Realiza ainda análises para a execução e desenvolvimento dos programas de âmbito regional: Vigilância de cantinas escolares e refeitórios públicos Projeto «minorsal.saúde» «pão.come» «sopa.come» 6
Número de amostras Volume de Amostras 2017 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 2038 88 93 Total por tipo de amostra 1434 54 16 513 2 116 2 11 846 6 453 587 16 2502 704 3543 7
Os métodos rápidos no LSP da Guarda 8
Os métodos rápidos no Laboratório de Saúde Pública da Guarda Colilert ISO9308-2 Colilert 44ºC Coliformes fecais (Procedimento Interno) Enterolert (E e DW) Procedimento Interno Pseudalert Procedimento Interno Legiolert - Procedimento Interno (implementado e levado a auditoria interna a 09-04-2018) 9
Métodos Rápidos versus Membrana Filtrante 10
Procedimento para Pesquisa e Quantificação de Coliformes e E. coli (Método do Número Mais Provável NMP) 1 Leitura de resultados: Agitar de modo a dissolver todo o substrato A 100 ml de amostra adicionar o substrato 2 4 3 Verter todo o conteúdo do frasco para um Quanti- Tray ou Quanti-Tray 2000 Reação positiva para coliformes Contar os poços amarelos. Expressão dos resultados: Reação positiva para E.coli Sob luz UV contar os poços com fluorescência. Fechar o Quanti-Tray usando o selador 5 Converter os poços em NMP/ 100 ml recorrendo às respetivas tabelas incluídas na norma. Para quantificação de coliformes fecais, incubar durante 18-22h a (44±0,5)ºC. Incubar durante 18-22h a (36±2)ºC
Procedimento interno para Pesquisa e Quantificação de Enterococos fecais (Método do Número Mais Provável NMP) 1 Leitura de resultados: Enterolert - E Reação positiva para Enterococos Sob luz UV contar os poços com fluorescência azul A 100 ml de amostra adicionar o substrato Enterolert- E / Enterolert DW Agitar de modo a dissolver todo o substrato 2 4 3 Verter todo o conteúdo do frasco para um Quanti-Tray ou Quanti- Tray 2000 Reação positiva para Enterococos Contar os poços verdes Enterolert - DW Fechar o Quanti-Tray usando o selador. 5 Expressão dos resultados: Converter os poços em NMP/ 100 ml recorrendo às tabelas 12 dos kits Incubar durante (41±0,5)ºC durante 24h-28h
Procedimento interno para Pesquisa e Quantificação de Pseudomonas aeruginosa (Método do Número Mais Provável NMP) 1 Leitura de resultados: A 100 ml de amostra adicionar o substrato 2 3 Verter todo o conteúdo do frasco para um Quanti-Tray ou Quanti- Tray 2000 Reação positiva para Pseudomonas aeruginosa Sob luz UV contar os poços com fluorescência azul Agitar de modo a dissolver todo o substrato 4 Expressão dos resultados: Converter os poços em NMP/ 100 ml recorrendo à tabela do kit 13 Fechar o Quanti-Tray usando o selador Incubar durante (38±0,5) ºC durante 24h 5
Procedimento interno para Pesquisa e Quantificação de Legionella pneumophila (Método do Número Mais Provável NMP) Protocolo para Águas potáveis Pré tratamento para águas de consumo Medir a dureza da amostra usando a fita de teste da dureza Nº quadrados rosa 0 1 2 3 4 CaCO 3 < 3 > 4 > 7 > 14 > 21 Dureza Baixa Baixa Baixa Alta Alta Suplemento a adicionar a 100mL de amostra: Dureza baixa: 0.33 ml Dureza alta adicionar 1,0 ml 2 1 Colocar 100 ml de amostra num frasco Adicionar o substrato e agitar bem. 3 5 Leitura de resultados: Reação positiva qualquer cor castanha e/ou turvação maior do que o controlo negativo 4 Colocar no Quanty-Tray e fechar usando o selador. Incubar a (39±0.5)ºC Expressão dos resultados: 14 Reação negativa sem alteração de cor e sem turvação Converter os poços em NMP/ 100 ml recorrendo à tabela do kit
Procedimento interno para Pesquisa e Quantificação de Legionella pneumophila (Método do Número Mais Provável NMP) Protocolo para Águas não potáveis Piscinas AMNN e Termais Processo (T. Refrigeração e HD) 1 Num frasco colocar 100 ml de água desionizada estéril. Adicionar o substrato Legiolert e agitar bem. 2 Pipetar 2mL de reagente de pré tratamento para um tubo estéril Adicionar 2mL de amostra de água não potável Deixar incubar à temperatura ambiente durante 60 segundos 3 4 Homogeneizar e transferir 2mL para o frasco de 100mL com Legiolert. 5 Leitura de resultados: Reação positiva qualquer cor castanha e/ou turvação maior do que o controlo negativo Reação negativa sem alteração de cor e sem turvação 15 Colocar no Quanty-Tray e fechar usando o selador. Incubar a (37±0.5)ºC Expressão dos resultados: Converter os poços em NMP/ 100 ml recorrendo à tabela do kit
Legiolert e RT-PCR O LSP está acreditado pelo IPAC para a Pesquisa e Quantificação de Legionella spp e Legionella pneumophila segundo a norma ISO 12869 Não tem implementado método cultural pela técnica clássica Legiolert como complemento da RT-PCR 16
Legiolert versus Método Cultural Clássico Facilidade de implementação e de execução Rapidez dos resultados sem necessidade de testes confirmatórios Especificidade para Legionella pneumophila Espécie associada à maioria dos casos de doença (DDO) 17
A equipa do Laboratório de Saúde Pública da Guarda 3 Técnicas Superiores 7 Técnicas de Análises Clínicas e de Saúde Pública 2 Assistentes Operacionais 1 Técnico Saúde Ambiental 18
19 Obrigada