Questionário - Proficiência Clínica

Transcrição

1 Tema FAN-HEp2 Elaborador Luís Eduardo Coelho Andrade. Médico, Professor Adjunto Livre-Docente da Disciplina de Reumatologia da UNIFESP e Assessor Médico em Imunologia do Fleury Medicina & Saúde. Texto Introdutório A pesquisa de autoanticorpos contra antígenos celulares (FAN-HEp2) tem como objetivo a triagem de autoanticorpos em amostras de soro de indivíduos que tenham como suspeita clínica a presença de uma doença reumática autoimune (DRAI) e certas doenças autoimunes órgão-específicas, como por exemplo, as hepatites autoimunes e a cirrose biliar primária. A metodologia para essa pesquisa é a técnica de imunofluorescência indireta (IFI) utilizando as células HEp-2 como fonte de antígenos. Essas células são de origem tumoral humana e podem ser mantidas em cultura celular contínua. Após seu crescimento são transferidas para lâminas de vidro, fixadas e permeabilizadas para que autoanticorpos, se presentes em amostras de soro, tenham acesso aos componentes celulares para os quais são dirigidos. Questão 1 Questão 2 Um texto complementar a este questionário aborda alguns aspectos críticos desse exame. O propósito do texto complementar é orientar os interessados em participar do questionário sobre as ações e interpretações relativas ao processo desse ensaio. Uma lâmina com células HEp-2 é considerada adequada para utilização em rotina quando: Há quantidade apreciável de células em divisão, apresenta boa confluência, apresenta os padrões esperados quando um painel com amostras conhecidas é processado, e não tem células em metáfase; Apresenta tapete celular com boa confluência e células em divisão; Apresenta os padrões e títulos esperados quando um painel com amostras conhecidas é processado, tem quantidade apreciável de células em divisão e apresenta boa confluência; Apresenta os padrões e títulos esperados quando um painel com amostras conhecidas é processado. O padrão nuclear homogêneo pode ser indicativo da presença de autoanticorpos: Padrão nuclear homogêneo. (A) Células em interfase; (B) Células em divisão (placa cromossômica metafásica positiva com padrão homogêneo). Células HEp-2, aumento de 400x, conjugado anti-ig total marcado com FITC (isotiocianato de fluoresceína). Anti-DNA topoisomerase 1; Antiproteína P risossomal e anti-dna nativo; Anti-DNA nativo, antinucleossomo e anti-histona; Antifibrilarina, anti-dna nativo e antijo- Página 1 de 5

2 Questão 3 O padrão nuclear pontilhado fino com placa metafásica não corada em título 1/320 pode estar associado a: Padrão nuclear pontilhado fino com placa metafásica não corada. (A) Células em interfase; (B) Células em divisão (placa cromossômica metafásica negativa). Células HEp-2, aumento de 400x, conjugado anti-ig total marcado com FITC (isotiocianato de fluoresceína). Anticorpos anti-ss-a/ro em pacientes com síndrome de Sjögren, artrite reumatoide ou LES; Anticorpos anti-rna polimerase I em pacientes com esclerodermia; Anticorpos anti-nucleoplasmina em indivíduos hígidos; Anticorpos anti-dna topoisomerase I em pacientes com DRAI. Questão 4 Questão 5 Questão 6 Para titular o conjugado é necessário: Diluir o conjugado do kit em água ultrapura e titular um controle com título conhecido; Diluir o conjugado do kit em PBS e titular controles com título conhecido; Diluir o conjugado do kit em água ultrapura e processar amostras diluídas a 1/80; Diluir o conjugado do kit em PBS e processar amostras diluídas a 1/80. O tempo de vida da lâmpada do microscópio pode ser monitorado: Pelo título obtido em controles conhecidos; Pelo contador de horas do microscópio; Pela utilização de lâminas comerciais com escala de fluorescência pré-ajustada; Todas as alternativas. Qual das opções a seguir contempla autoanticorpos que não coram a placa cromatínica metafásica: Anti-DNA nativo, anti-ss-a/ro, anti-sm, Anti-SS-B/La; Anti-SS-A/Ro, antinucleossomo, anti-rnp, anti-histona; Anti-SS-A/Ro, anti-rnp e anti-ss-b/la; Anti-LEDGF/p75, anti-ss-a/ro e anti-pm/scl. Página 2 de 5

3 Questionário - Proficiência Clínica Questão 7 Assinale a afirmação incorreta, considerando-se a possibilidade de lúpus eritematoso sistêmico. O FAN-HEp-2 é caracterizado sensibilidade e baixa especificidade; por alta As informações padrão e título devem ser avaliadas conjuntamente; O FAN-HEp-2 é um teste de alto valor preditivo negativo; O FAN-HEp-2 é um teste de alto valor preditivo positivo. B A C Imagens ilustrativas de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico. (A) Lúpus cutâneo; (B) Glomerulonefrite mesangial e (C) artrite não erosiva. Questão 8 Questão 9 Questão 10 Questão 11 Qual é o melhor controle de qualidade diário para o teste de FAN-HEp-2? Amostra negativa e positiva presentes no kit; Amostras com padrão conhecido, amostra negativa e amostras com graus diferentes de intensidade (três cruzes e uma cruz de intensidade); Amostra negativa e amostras com padrão centromérico e homogêneo com quatro cruzes de intensidade; Painel de amostras com especificidade conhecida. Para validar um novo lote de lâminas HEp-2 é importante processar: Amostras negativas e positivas tituladas que estão presentes no kit; Amostras com padrão conhecido com três cruzes de intensidade e comum cruz de intensidade, além de amostra negativa; Amostra negativa e amostras com padrão centromérico e homogêneo com quatro cruzes de intensidade; Painel de amostras com especificidade conhecida, incluindo amostra positiva para anti-ss-a/ro. Qual dos fatores ou condições pode ocasionar interpretação inadequada dos padrões e títulos encontrados? PBS com ph menor que 7,2; Glicerina tamponada em ph alcalino; Conjugado preparado em PBS com Azul de Evans; Lâminas incubadas em câmara úmida ao abrigo da luz durante o procedimento. Qual dos autoantígenos a seguir pode não estar presente ou estar presente em quantia insuficiente em determinadas preparações de células HEp-2, prejudicando o reconhecimento do padrão associado aos respectivos autoanticorpos: Anti-RNP; Anti-CENP-C; Anti-SS-A/Ro; Anti-Scl-70. Página 3 de 5

4 Questão 12 Com relação ao padrão nuclear pontilhado fino denso pode-se dizer que: Padrão nuclear pontilhado fino denso. 1- Imagem com zoom: (A) Células em interfase; (B) Células em divisão (placa cromossômica metafásica positiva); 2- Imagem panorâmica. Células HEp-2, aumento original de 400x, conjugado anti-ig total marcado com FITC (isotiocianato de fluoresceína). Questão 13 Questão 14 Sua valorização clínica depende do título da reatividade; Está frequentemente associado a enfermidades autoimunes órgão-específicas; Pode indicar a presença de múltiplos autoanticorpos na amostra; É mais comumente observado em indivíduos sadios bem como em pacientes com uma grande variedade de doenças não autoimunes O padrão Scl-70 é caracterizado por: Padrão nuclear pontilhado fino e nucleolar; Padrão nuclear pontilhado fino; padrão nucleolar homogêneo e placa cromossômica corada com Região Organizadora do Nucléolo positiva; Padrão nuclear pontilhado fino; padrão nucleolar fraco e inconstante; placa cromossômica corada e com Região Organizadora do Nucléolo positiva; e citoplasma rendilhado; Padrão nuclear pontilhado fino, padrão nucleolar pontilhado e placa cromossômica corada com Região Organizadora do Nucléolo positiva. Na vigência de um FAN positivo com padrão sugestivo de determinado autoanticorpo, qual das condutas a seguir é inadequada? Sugerir a realização de testes específicos para os autoanticorpos associados ao padrão encontrado; Reportar a amostra como reagente para os autoanticorpos associados ao padrão em questão; Editar uma observação reportando as possíveis associações do padrão encontrado; Realizar os testes específicos para os autoanticorpos associados ao padrão em questão e incluir no laudo do exame. Página 4 de 5

5 Questão 15 Uma amostra apresentou padrão nuclear pontilhado grosso- com título 1/640 em 2012 e agora apresenta padrão nuclear pontilhado fino 1/80. Que conduta é apropriada? Padrão nuclear pontilhado grosso. 1-Imagem com saturação: (A) Células em interfase; (B) Células em divisão (placa cromossômica metafásica negativa); 2- Imagem sem saturação para melhor visualização da região de splicing: (A) Células em interfase; (B) Células em divisão (placa cromossômica metafásica negativa). Células HEp-2, aumento de 400x, conjugado anti-ig total marcado com FITC (isotiocianato de fluoresceína). Referências Bibliográficas Verificar se o lote está expressando os possíveis autoantígenos associados com painel de amostras conhecidas; Repetir a amostra; Avaliar a amostra em lâminas de outras procedências; Todas as alternativas. Dellavance A. Gabriel Jr A, Cintra AFU, Ximenes AC, Nuccitelli B, von Mühlen CA et al. The first Brazilian Consensus for Standardization of ANA in HEp-2 cells. J Bras Patol Med Lab 2002; 38(3): Dellavance A, Gabriel Jr G, Cintra AFU, Ximenes AC, Nuccitelli B, Taliberti BH et al. II Brazilian Consensus on Antinuclear Antibodies in HEp-2 Cells. Definitions for standardization of autoantibody testing against the nucleus (ANA HEp-2), nucleolus, cytoplasm, and mitotic apparatus, as well as its clinical associations. Rev Bras Reumatol 2003;43(3): Dellavance A, Gabriel Jr A, Nuccitelli B, Taliberti BH, von Mühlen CA, Bichara CDA et al. Third Brazilian Consensus for autoantibodies screening in HEp-2 cells (ANA). Recommendations for standardization of the autoantibody testing in HEp-2 cells, quality control, and clinical associations. Rev Bras Reumatol, 2009; 49(2): Francescantonio PLC, Cruvinel WM, Andrade LEC, Dellavance A, Taliberti BH et al: IV Brazilian Consensus in Autoantibody Testing in HEp-2 Cells. Rev Bras Reumatol 2014; 54(1): Pham BN, Albarede S, Guyard A, Burg E, Maisonneuve P. Impact of external quality assessment on antinuclear antibody detection performance. Lupus 2005;14(2): Sack U, Conrad K, Csernok E, Frank I, Hiepe F, Krieger T, et al. Autoantibody detection using indirect immunofluorescence on HEp-2 cells. Ann N Y Acad Sci 2009; 1173:166-7 Dellavance, A.; Andrade, L. E. C. Como interpretar e valorizar adequadamente o teste de anticorpos antinúcleo. J Bras Patol Med Lab 2007;43(3): Wiik AS, Hoier-Madsen M, Forslid J, Charles P, Meyrowitsch J. Antinuclear antibodies: a contemporary nomenclature using HEp-2 cells. J Autoimmun 2010;35(3): Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibody-hep-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibodypositive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum 2011; 63(1): Página 5 de 5