EFEITOS DA SEXAGEM SOB AS CARACTERÍSTICAS ESPERMATICAS DE TOUROS 5/8 GIROLANDO Effects of sexing under sperm bulls features 5/8 Girolando

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1 EFEITOS DA SEXAGEM SOB AS CARACTERÍSTICAS ESPERMATICAS DE TOUROS 5/8 GIROLANDO Effects of sexing under sperm bulls features 5/8 Girolando Pábola Santos NASCIMENTO 1, Maiana Silva CHAVES 1, Antônio Santana do SANTOS FILHO 2, Helder Melo de SOUZA 1, Ludymila Furtado CANTANHÊDE 1, Cláudio Coutinho BARTOLOMEU 1 1 Universidade Federal Rural de Pernambuco, DMV. pabolasn@hotmail.com 2 Instituto Agronômico de Pernambuco, Recife-PE, Brasil.

2 Introdução Avanços no processo de sexagem espermática (SHARPE; EVANS, 2008) e mudanças nos protocolos de produção in vitro de embriões (PIVE) puderam permitir a proximidade entre as taxas de produção embrionária alcançadas com sêmen sexado daquelas alcançadas com sêmen convencional (BLONDIN et al., 2009). A utilização de análises computadorizadas como a exemplo o Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) (RUPERT et al., 2004), e sondas fluorescentes por meio de microscopia de epifluorescência ou citometria de fluxo são métodos que vem sendo amplamente utilizados em algumas espécies (SILVA et al., 2012). O grande desafio seria apontar dentre os animais férteis, aqueles que suportariam os danos causados pela técnica de sexagem mantendo sua capacidade fecundante (SEIDEL JR, 2003). E das diversas variáveis obtidas pelo CASA aquelas que teriam uma maior influencia sobre o potencial de fertilidade (ARRUDA et al., 2010). O objetivo deste trabalho foi comparar as análises obtidas pelo CASA realizadas com sêmen sexado e convencional de três touros da raça 5/8 Girolando, e observar a influencia da sexagem sob as características espermáticas, identificando possíveis alterações, lesões e danos provocados pela técnica. Material e Métodos O estudo oi realizado no Laboratório de Andrologia do Departamento de Medicina Veterinária ANDROLAB, da Universidade Federal Rural de Pernambuco em Recife. Foram feitas três repetições de cada procedimento para o sêmen convencional e três para o sêmen sexado de cada touro, todas submetidas às mesmas condições. Foram utilizadas palhetas criopreservadas contendo sêmen convencional (três doses) e sêmen sexado (três doses), provenientes de três touros da raça pura sintética 5/8 Girolando (T1, T2 e T3), de mesma partida para cada tipo de sêmen/touro. Para a cinética, o método utilizado foi o mesmo descrito por Nascimento (2014). Para a cinética, 5 µl de cada amostra foi colocada em uma lâmina previamente aquecida (37 C), e uma lâminula depositada por cima da gota. A lâmina foi colocada sob o microscópio de contraste de fase (Eclipse 50i; Nikon, Tóquio, Japão) e as imagens foram captadas com uma câmera digital Basler A312FC (Basler Vision Technologies, Ahrensburg, Alemanha). As imagens foram capturadas e analisadas utilizando o software SCA v 5.1 (Microptics, SL, Barcelona, Espanha). Pelo menos cinco campos microscópicos, não consecutivos selecionados aleatoriamente por amostra foram digitalizados, registrando pelo menos espermatozoides móveis. As definições de parâmetros padrão foram: motilidade progressiva (MP)), velocidade (VEL), linearidade (LIN), retilinearidade (STR),

3 expressos em valores porcentuais (%); velocidade curvilínea (VCL), velocidade linear progressiva (VSL) e velocidade média da trajetória (VAP) expressas em micrometros por segundo (µm/s); amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) expresso em micrometros (µm); e frequência de batimento flagelar (BCF), expresso em hertz (Hz). Os dados foram analisados pelo programa estatístico SPSS 16.0 empregando-se a análise de variância (ANOVA). Para todas as análises, os valores foram considerados significativos (P< 0,05). Antes dessas análises, dados percentuais para linearidade e retilinearidade foram transformados em arcoseno. Todos os resultados foram expressos em média ± erro padrão. Resultados e Discussão O resultado das análises estatísticas mostraram diferenças (P< 0,05) nas análises do CASA entre os tipos de sêmen (sexado e convencional) dos touros em diversas variáveis principalmente as que se referem ao padrão de movimento dos espermatozoides VCL, VSL, VAP, BCF, ALH e STR (tabela 1). Alguns autores relataram que o sêmen sexado necessita de menos tempo para a capacitação devido ao processo de separação por citometria de fluxo (BLONDIN et al., 2009). Os espermatozoides sexados apresentaram padrão de cinética espermática superior ao sêmen convencional como reportado por GALLEGO (2010) fator que favorece o processo de fertilização quando da utilização desse tipo de sêmen na FIV. Estudos associaram alta motilidade com a habilidade de espermatozoides fertilizarem corroborando AITKEN et al., 2012 que afirmaram que aqueles espermatozoides com diminuição da motilidade além de estarem comprometidos quanto a possibilidade fecundante tem menor habilidade para sofrerem capacitação, apresentam maior produção de radicais livres e dificuldades de realizar processos considerados chaves na fertilização do oócito. GERHARDT et al., (2012) obtiveram taxas de 53,85% e 17,86% com sêmen convencional e sexado respectivamente utilizando o sêmen do mesmo touro na IA. Observando os resultados do presente trabalho, e fazendo comparações entre as amostras convencionais e sexadas de sêmen do mesmo touro podemos afirmar que independente do touro utilizado as variáveis obtidas pelo CASA sofreram alterações que influenciam no padrão de movimento espermático para o sêmen sexado. Conclusão O processo de sexagem afeta a cinética espermática de touros 5/8 Girolando, induzindo a um aumento nos parâmetros de velocidade. Comite de Ética O projeto foi aprovado pelo comitê de ética da Faculdade Pio Décimo. Processo nº 05/11.

4 Referências Bibliográficas AITKEN, R.J., GIBB, Z., MITCHELL, L. A., et al. Sperm motility is lost in vitro as a consequence of mitochondrial free radical production and the generation of electrophilic aldehydes but can be significantly rescued by the presence of nucleophilic thiols, Biology of Reproduction, New York, v. 87, n. 5, p. 1-11, ARRUDA, R.L.; ORROS, I.R.; PASSOS, T.S.; et al. Técnicas para avaliação laboratorial da integridade estrutural e funcional do sêmen congelado de touros, Rev. Bras. Reprod. Anim., Belo Horizonte, v.34, n.1, p , BLONDIN, P.; BEAULIEU, M.; FOURNIER, V. et al. Analysis of bovine sexed sperm for IVF from sorting to the embryo. Theriogenology, Stoneham, v.71, n. 1, p , GALLEGO, A.M. Avaliação das características da motilidade (CASA), morfologia e funcionalidade da membrana plasmática (HOST) de espermatozóides bovinos sexados por citometria de fluxo f. Dissertação - Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, São Paulo. GERHARDT, B.T.; SINEDINO, L.D.P.; DOURADO A.P. et al. Taxa de concepção com sêmen sexado ou convencional e viabilidade econômica em vacas Girolandas. Rev. Bras. Reprod. Anim., Belo Horizonte, v.36, n.2, p , NASCIMENTO, P. S. Fertilização in vitro com sêmen sexado de bovinos da raça 5/8 Girolando. Dissertação (Mestrado) - Programa de Pós-Graduação em Sanidade e Reprodução de Ruminantes da Universidade Federal Rural de Pernambuco, p. RUPERT P. AMANN & DAVID F. KATZ. Reflections on CASA After 25 Years. Journal of Andrology, Philadelphia, v.25, n. 3, p , SEIDEL JR. G.E. Economics of selecting for sex: the most important genetic trait. Theriogenology, Stoneham, v. 59, n. 2, p , SHARPE, J.C. EVANS, K.M. Advances in flow cytometry for sperm sexing. Theriogenology, Stoneham, v. 71, n.1, p. 4 10, SILVA, E.C.B.; CAJUEIRO, J.F.P.; SILVA, S.V. et al. Effect of antioxidants resveratrol and quercetin on in vitro evaluation of frozen ram sperm, Theriogenology, Stoneham, v.77, n. 8, p , 2012.

5 Tabela 1: Análise comparativa do sêmen convencional X sexado de três touros 5/8 Girolando quanto às variáveis da cinética espermática. Touro 1 Touro 2 Touro 3 VCL 66,5±0,8 a Convenc. Sexado Convenc. Sexado Convenc. Sexado A 46,2±2,5 b 80,2±2,3 B 64,6±5,1 c 86,4±5,7 C 117,7±1,6 VSL 36,9±0,3 a 60,0±0,3 A 27,6±2,3 b 47,0±2,0 B 35,3±0,6 c 46,2±2,7 C VAP 46,4±0,5 a 73,6±0,4 A 33,8±2,4 b 57,7±0,9 B 44,2±1,0 c 53,8±2,8 C LIN 55,4±1,0 a 55,7±0,7 a 59,6±2,4 b 58,7±2,4 b 55,1±3,1 c 53,6±2,6 c STR 79,4±1,5 a 81,6±0 a 81,4±1,0 b 81,4±2,2 b 79,7±0,3 c 85,7±0,5 C ALH 2,7±0,0 a 3,2±0,2 a 2,0±0,0 b 2,4±0,1 B 2,6±0,4 c 3,2±0,3 c BCF 10,1±0,2 a 14,5±0,3 A 9,3±0,4 b 10,5±0,3 b 9,9±0,2 c 13,0±0,4 C VCL (Velocidade curvilínea, µm/s); VSL (Velocidade linear, µm/s); VAP (Velocidade de trajeto, µm/s); LIN (Linearidade,%); STR (Retilineariade, %); ALH (Deslocamento lateral da cabeça, µm); BCF (Frequência de batimento de cauda, Hz). a, A Na mesma linha, médias com letras sobescrito diferentes (P<0,05). c,c Na mesma linha, médias com letras sobescrito diferentes (P<0,05). b,b Na mesma linha, médias com letras sobescrito diferentes (P<0,05).