Microbiolização de sementes de Crotalaria sp com bactérias antagonistas visando a promoção do crescimento de plantas e o biocontrole

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1 Microbiolização de sementes de Crotalaria sp com bactérias antagonistas visando a promoção do crescimento de plantas e o biocontrole Microbiolization of Crotalaria sp seeds with antagonistic bacteria for the promotion of plant growth and biocontrol ROCHA, Lara Rezek, TEIXEIRA, Amanda Guerra; DURE, Laís Mayara Mello; CORRÊA, Bianca Obes. 1 Graduanda em Agronomia, Bolsista PIBIC/CNPq, Universidade Anhaguera Uniderp, Campo Grande-MS, lara_rezek@hotmail.com; 2 Graduanda em Agronomia Universidade Anhaguera Uniderp, Campo Grande-MS; 3 Eng. Agr. Mestranda em Produção Vegetal, Universidade Federal do Mato Grosso do Sul, Chapadão do Sul-MS; 4 Bióloga Profª. Drª em Fitopatologia, Universidade Anhaguera Uniderp, Campo Grande-MS, bianca.obescorrea@yahoo.com.br Resumo: O objetivo do trabalho foi isolar micro-organismos de diferentes nichos e avaliar a capacidade dos mesmos em reduzir a incidência de micro-organismos contaminantes de sementes, além da promoção do crescimento de Crotalaria sp. Para tanto, foram pesados 10g de amostra de solo e as mesmas submetidas à diluição seriada para isolamento dos micro-organismos. Além disso, também realizou-se a patologia de sementes tratadas com as bactérias Fit03 e Fit04, além da microbiolização das sementes de C. junceae e C. spectabillis para avaliação da promoção do crescimento em casa de vegetação. Na avaliação de promoção de crescimento vegetal, as sementes de C. spectabillis tratadas com a bactéria Fit 03 e Fit04 alcançaram resultados significativos para as variáveis de crescimento. Na avaliação da capacidade de controle de micro-organismos sobre as sementes das duas espécies de Crotalaria sp, Fit-03 e Fit-04 reduziram a incidência de fungos como Aspergillus e Penicillium. Palavras-chave: Crotalaria spectabilis, Crotalaria junceae, controle biológico, antagonistas. Abstract:The objective was to isolate microorganisms of different niches and assess the ability of them to reduce the incidence of seed contaminating microorganisms, in addition to promoting the growth of Crotalaria sp. For that, we 10g soil sample heavy and the same subjected to serial dilution for isolation of microorganisms. It also held the pathology of seeds treated with Fit03 bacteria and Fit04, beyond microbiolization of C. junceae seeds and C. spectabillis for evaluation of promoting growth in the greenhouse. In the evaluation of plant growth promotion, the C. spectabillis seeds treated with the bacteria Fit 03 and Fit04 achieved significant results for the growth variables. In assessing the control capabilities of micro -organisms on the seeds of two species of Crotalaria sp, Fit- 03 and Fit- 04 reduced the incidence of fungi such as Aspergillus and Penicillium. Keywords: Crotalaria spectabilis, Crotalaria junceae, biological control, antagonists.

2 Introdução O controle biológico é tido como a redução do inóculo ou dos fatores determinantes da doença, causados por um patógeno, exercido por micro-organismos (COOK & BAKER, 1983). As bactérias habitantes do solo que colonizam a rizosfera de plantas e agem sobre micro-organismos prejudiciais às plantas, atuam por diversos mecanismos de ação, sendo um dos principais a antibiose, que se dá pela ação de metabólitos tóxicos, geralmente antibióticos e bacteriocinas, tendo ação negativa sobre fitopatógenos (BETTIOL; GHINI 1995). Uma das estratégias de seleção de micro-organismos para programas de controle de doenças, é o uso de bactérias com potencial antagonista, que produzem substâncias capazes de inibir o desenvolvimento de fitopatógenos (BETTIOL; GHINI; 2005). Essas bactérias do solo quando associadas às plantas podem ser capazes de promover o crescimento vegetal das mesmas, aumentando a área radicular e sucessivamente proporcionando maior capacidade na remoção de água e nutrientes pelas plantas, além de promoverem efeito antagônico sobre fitopatógenos, desenvolvendo um eficiente controle biológico na natureza (DA SILVEIRA, 2008). Dentre diversas espécies vegetais de importância econômica, encontra-se a crotalária, muito utilizada como adubo verde, eficiente na produção de massa vegetal e na fixação de nitrogênio (SALGADO et al.,1982), além de possuir potencial antagônico sobre nematoides, e muito utilizada em rotação de culturas em consorcio com café, soja, cana-de-açúcar, entre outras. O objetivo do trabalho foi selecionar bactérias isoladas de diferentes nichos e avaliar a capacidade das mesmas em reduzir a ocorrência de micro-organismos contaminantes de sementes, além de testar a capacidade de promoção de crescimento vegetal nas espécies de Crotalaria spectabilis e Crotalaria juncea. Metodologia Os experimentos foram realizados no Campo experimental da Universidade Anhanguera Uniderp Agrárias e no Laboratório de Fitopatologia, no município de Campo Grande MS. Foram coletadas amostras de solo com 20 cm de profundidade nos cultivos de canade-açúcar em dois pontos, e um ponto de milho, café, crotalária e feijão. Após a

3 coleta, realizou-se o procedimento de diluição seriada das amostras para isolamento dos micro-organismos, em meio de cultura BDA (batata-dextrose-agar), que foram acondicionadas em BOD por 48 horas a 28ºC. As bactérias utilizadas nos próximos ensaios foram Fit03 e Fit04, identificadas como Pseudomonas fluorescens, por testes bioquímicos (DURE, 2015). Para tanto, as mesmas foram repicadas em meio de cultura ágar-nutriente, posteriormente ocorreu a suspensão bacteriana em solução salina (NaCl 0,85%) onde as sementes das duas cultivares ficaram embebidas por 30 minutos. Após foram semeadas em vasos com capacidade para 5 litros, com solo pobre em matéria orgânica, o delineamento foi inteiramente casualizado com cinco repetições. As avaliações foram baseadas no índice de velocidade de emergência (IVE), número e massa fresca de folhas, massa fresca das raízes e massa fresca da parte aérea. Para o potencial antagonista sobre sementes de Crotalaria juncea e Crotalaria spectabilis, as sementes foram microbiolizadas com suspensão das bactérias Fit-03 e Fit-04, as testemunhas das duas espécies foram embebidas apenas em solução salina. As mesmas, foram submetidas ao Blotter test (Brasil, 2009) em caixas gerbox, que foram incubadas por 7 dias. A avaliação foi realizada sobre cada semente em microscópio estereoscópico para identificação dos fungos que estavam sobre as mesmas. Resultados e discussões Foram isoladas 93 bactérias, sendo 46 de solo sob cultivo de milho, 34 sob o cultivo de cana-de-açúcar e 13 bactérias sob cultivo de feijão. Estes isolados apresentaram grande diversidade em suas características morfológicas, além disso em testes in vitro foram selecionadas pela capacidade de reduzir o crescimento de alguns fungos fitopatogênicos (ROCHA et al., 2016). Nos ensaios de promoção do crescimento, as duas bactérias tiveram efeitos significativos para número de folhas para as duas espécies vegetais, no entanto para C. juncea o tratamento das sementes proporcionou os melhores resultados para todas as variáveis. Já para C. spectabilis as duas bactérias promoveram crescimento, pois diferiram significativamente da testemunha tratada somente com solução salina (Tabela 1). Tabela 1: Número de folhas (NF), massa seca de folhas (MSF), massa seca da parte aérea (MSPA), massa seca de raízes (MSR) e índice de velocidade de emergência (IVE) de plantas de C. juncea e C. spectabilis oriundas de sementes microbiolizadas com as bactérias Fit-03 e Fit-04 (Pseudomonas fluorescens).

4 Tratamentos Crotalaria juncea NF MSF MSPA MSR IVE Testemunha 9b 0,09a 0,18b 0,04b 0,86a Fit-03 32a 0,31a 0,69a 0,11a 1,3a Fit-04 18ab 0,20a 0,39ab 0,04b 1,1a Crotalaria spectabilis Tratamentos NF MSF MSPA MSR IVE Testemunha 5b 0,0b 0,11b 0,1b 0,0b Fit-03 12a 0,26a 0,36a 0,5a 0,21a Fit-04 12a 0,27a 0,37a 0,4a 0,23a Médias seguidas pela mesma letra na coluna foram significativas pelo teste de Tukey a 0,05% de probabilidade. Nos ensaios que avaliavam, as habilidades de redução de micro-organismos, observou-se que quando as sementes eram tratadas com suspensão das bactérias Fit03 e Fit04 (Figura 1), houve redução da incidência de fungos como Aspergillus e Penicillium nas duas espécies vegetais, estes de importância porque os dois ocasionam perdas significativas na emergência de plântulas (PESKE, ROSENTHAL, ROTA, 2012). Figura 1: Microbiolização de sementes das duas espécies de Crotalaria sp. e incidência de patógenos. Conclusões Pode-se afirmar que as bactérias isoladas Fit03 e Fit04 reduziram micro-organismos contaminantes de sementes das espécies Crotalaria spectabilis e Crotalaria juncea. Além disso, as mesmas promoveram o crescimento vegetal significativo nas sementes de Crotalaria spectabillis tratadas com a mesma.

5 Agradecimentos (opcional) Agradeço ao CNPq, pela concessão da bolsa de Iniciação Cientifica, a Prof.ª Dra. Bianca Obes Corrêa pela orientação, oportunidade e conhecimentos adquiridos. Referências bibliográficas BETTIOL, W.; GHINI, R. Controle biológico. In: BERGAMIN FILHO, A.; KIMATI, H.; AMORIM, L. (Ed.). Manual de fitopatologia, v.1: Princípios e conceitos. 3ed. São Paulo: Agronômica Ceres, p , BETTIOL, W.; GHINI, R. Solos supressivos. Ecologia e Manejo de Patógenos Radiculares em Solos Tropicais. Recife. Imprensa Universitária da Universidade Federal Rural de Pernambuco, p , BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Manual de Análise Sanitária de Sementes/Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuária Brasília: Mapa/ACS, p. COOK, R.J.; BAKER, K.F. The Nature and Practice of Biological Control of Plant Pathogens. St. Paul: APS Press, p. DA SILVEIRA, E. L. Inoculações de bactérias promotoras de crescimento no cultivo de arroz em solução nutritiva. (Tese de Doutorado em Microbiologia Agropecuária). Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal, SP, DURE, L.M.M. Seleção e prospecção de bactérias habitantes do solo e rizosfera de plantas visando uso no controle biológico de plantas. 29f. Trabalho de Conclusão de Curso. Anhanguera Uniderp, Campo Grande-MS. FLORES, A.S.; MIOTTO, S.T.S. Aspectos fitogeográficos das espécies de Crotalaria L. (Leguminosae Faboideae) na região Sul do Brasil. Acta Botanica Brasilica, v.19, n.2, p , MICHEREFF, S.J.; MARIANO, R.L.R. Controle biológico de doenças de plantas. Recife. Imprensa Universitária-UFRPE, PESKE, S.T.; ROSENTHAL, M.D.; ROTA, G.R.M. Sementes: Fundamentos Científicos e Tecnológicos. 3ª edição. Pelotas, p. ROCHA, L.R. Seleção de bactérias antagonistas com potencial para o controle biológico de patógenos habitantes do solo. Resumo. Seminário de Iniciação Cientifica Kroton Institucional. Valinhos, 2016.

6 SALGADO, A.L.B., AZZINI, A., FEITOSA, C.T.; et al. Efeito da adubação NPK na cultura da crotalária. Bragantia, v.41, p.21-33, 1982.