PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO PARA MANIPULAÇÃO DE PRODUTOS QUÍMICOS E AMOSTRAS BIOLÓGICAS

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1 PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO PARA MANIPULAÇÃO DE PRODUTOS QUÍMICOS E AMOSTRAS BIOLÓGICAS LABORATÓRIO: VIROLOGIA E CULTIVO CELULAR Docente responsável pelo laboratório: Profa. Tereza Cristina Cardoso Silva

2 1. Introdução No Laboratório de Virologia e Cultivo Celular, são manipulados microrganismos classificados na Classe de Risco I (baixo risco individual e para a coletividade), que inclui os agentes biológicos conhecidos por não causarem doenças em pessoas ou animais adultos sadios, e na Classe de Risco II (risco individual moderado, risco comunitário limitado), que inclui os agentes biológicos que provocam infecções no homem ou nos animais, cujo potencial de propagação na comunidade e de disseminação no meio ambiente é limitado, e para os quais existem medidas terapêuticas e profiláticas eficazes. Dentre esses microrganismos, destacam-se diversas famílias virais como Herpesviridae e o gênero Coronavirus (Classe de Risco II). No entanto, há possibilidade de exposição a outros microrganismos que podem estar presentes em amostras biológicas manipuladas no laboratório, particularmente durante necropsias de aves e manipulação de amostras fecais de diversas espécies de animais. 2. Procedimentos operacionais padrão para manipulação de amostras biológicas ou reagentes químicos Todas as atividades no Laboratório de Virologia e Cultivo Celular devem ser realizadas de acordo com as condições previstas para o Nível de Biossegurança 2 (NB-2). Neste documento, estão relacionados os procedimentos padrão comuns a todas as técnicas relacionadas à manipulação de amostras biológicas ou de reagentes químicos, visando à segurança do pessoal do laboratório. Os protocolos detalhados de cada técnica utilizada estão disponíveis no laboratório. 2.1 Procedimentos antes do início dos trabalhos Somente pessoas autorizadas podem entrar no laboratório. Durante o trabalho, as portas devem ser mantidas fechadas.

3 O uso de tamancos, sandálias e chinelos é proibido no ambiente do laboratório. Utilize calçados fechados. Objetos de uso pessoal devem ser guardados em armário disponível para essa finalidade, incluindo mochilas, pastas, etc. É proibido utilizar relógios, anéis, brincos ou outros objetos que podem interferir na utilização de luvas ou ser contaminados durante a manipulação de amostras. É proibida a utilização de aparelho celular durante a manipulação de amostras químicas ou biológicas Procedimentos durante a execução dos trabalhos Lave as mãos antes de iniciar o trabalho e após a manipulação de reagentes químicos ou de amostras biológicas, mesmo após o uso de luvas de proteção, bem como antes de deixar o laboratório. Adquira o hábito de conservar as mãos longe da boca, nariz, olhos e rosto. É obrigatória a utilização dos seguintes equipamentos de proteção individual (EPI): Protetores faciais e oculares: utilize máscara de proteção facial e óculos de proteção ao manipular qualquer reagente (líquido ou pó) que possa ser inalado/ingerido (ex: dodecil sulfato de sódio, isotiocianato de guanidina). Vestimenta tipo jaleco: a utilização de jalecos é obrigatória no ambiente do laboratório. Após a manipulação de amostras biológicas, obrigatoriamente devem ser utilizados jalecos descartáveis, que serão descartados imediatamente após o uso, em recipiente para lixo biológico. Luvas: Para manipulação de amostras biológicas, utilize luvas de látex descartáveis e óculos de proteção. Para manipulação de reagentes químicos, utilize luvas de acordo com sua resistência química ( É proibido utilizar qualquer EPI em ambientes fora do laboratório.

4 Equipamentos de proteção coletiva (EPC), como cabines de biossegurança ou cabines de exaustão devem ser utilizadas obrigatoriamente durante a manipulação de amostras biológicas ou de reagentes químicos destinadas a esses fins. Na cabine de biossegurança, deve haver sinalização informando sobre a utilização de luz UV. A manipulação de substâncias líquidas voláteis ou irritantes como éter, fenol e ácido clorídrico deve ser realizada na cabine de exaustão. Procedimentos para a cabine e capelas destinadas à PCR (preparo de mix e adição de DNA): ligue a lâmpada UV 30 minutos antes e 30 minutos após a realização de suas atividades. Caso haja contaminação com solução contendo DNA, proceda à limpeza com hipoclorito de sódio 2%, deixe a solução agir por 10 minutos e depois retire o excesso com toalha absorvente e água. Procedimentos para a cabine de biossegurança destinada à manipulação de organismos: ligue a lâmpada UV 30 minutos antes e 30 minutos após a realização de suas atividades. Caso haja contaminação com solução contendo células bacterianas, proceda à limpeza com hipoclorito de sódio 2%, deixe a solução agir por 10 minutos e depois retire o excesso com papel toalha absorvente e álcool 70%. Procedimentos para a cabine de biossegurança destinada à manipulação de amostras biológicas (tecidos e fezes): ligue a lâmpada UV 30 minutos após a realização de suas atividades. Caso haja contaminação da cabine de segurança biológica com amostras biológicas com status de contaminação desconhecido, o local da contaminação deve ser coberto com papel toalha embebido em hipoclorito de sódio 2%, por 10 minutos, seguindo-se desinfecção com álcool 70º C e exposição à luz UV por 30 minutos. Caso haja contaminação da cabine de segurança biológica o local da contaminação deve ser coberto com papel toalha, seguindo-se a aplicação de peróxido de hidrogênio 6%, por 30 minutos, a limpeza com álcool 70º C e exposição à luz UV por 30 minutos.

5 Durante a manipulação de amostras biológicas contendo agentes infecciosos todo o material reaproveitável (tubos, frascos de plástico, vidraria, etc.) deve ser imerso em água quente (no mínimo 70º C por 15 minutos) Procedimentos após o término dos trabalhos Qualquer material armazenado no laboratório deve estar organizado e claramente identificado. Não armazene amostras ou reagentes em sacos plásticos, frascos de margarina, papel alumínio, etc.. Utilize frascos e caixas adequadas para armazenamento. Sempre proceda à limpeza total de qualquer superfície ou equipamento, imediatamente após o uso, como pias, bancadas, fluxo laminar, armários, gavetas, banho-maria, balanças e centrífugas, utilizando papel toalha descartável embebido em álcool 70%. Remova qualquer solução ou reagente (solução salina, solução de Sheather, bicromato de potássio) presentes em equipamentos como balança, centrífuga logo após o uso. Faça a limpeza com álcool 70% ou então, em caso de centrifugação de material infeccioso, coloque o rotor da centrífuga em água quente (no mínimo 70º C por 15 minutos). Nunca deixe a limpeza e a desinfecção para serem realizadas no outro dia. Micropipetas ou qualquer outro material utilizado para manipulação de material biológico devem ser limpas com papel toalha embebido em álcool 70% e submetidas à luz UV por 30 minutos, no interior da cabine de biossegurança ou capela. Nunca deixe qualquer material sobre a bancada, como pedaços de papel alumínio, tubos, adesivos, fitas, grampos, etc.

6 2.1.4 Descarte de resíduos biológicos Os meios de cultura sólidos e/ou líquidos utilizados para crescimento de bactérias devem ser autoclavados por 20 minutos a 121º C antes de serem descartados em lixo destinado a material biológico. Resíduos de material biológico, incluindo amostras fecais e material de consumo contaminados com amostras biológicas devem descartados em recipiente adequado para lixo biológico, disponível no laboratório Descarte de resíduos químicos Várias substâncias químicas são manipuladas no laboratório. Os resíduos químicos devem ser embalados, rotulados e armazenados, para posterior envio para destinação final conforme preconizado pelo manual de descarte de resíduos químicos da unidade Descarte de material perfurocortante Os materiais perfurocortantes, tais como, agulhas de injeção, lâmina de bisturi, lâminas histológicas, lamínulas, ampolas de medicamentos ou qualquer vidraria quebrada e contaminada com amostra química ou biológica, devem ser descartados em caixas apropriadas para a coleta de materiais perfurocortantes. Vidraria quebrada e não contaminada pode ser descartada em lixo reciclável Procedimentos em caso de acidentes Acidente com substâncias químicas

7 A FISPQ (Ficha de Informações de Segurança de Produtos Químicos) dos produtos químicos utilizados no laboratório deve estar acessível a todas as pessoas que manipulam agentes químicos no laboratório. As informações dessa ficha, referentes à identificação dos perigos e medidas de primeiro-socorros, devem ser utilizadas para elaboração dos procedimentos necessários em caso de acidentes com agentes químicos. Como procedimento emergencial, em caso de: contato com a pele: lavar abundantemente com água corrente e remover imediatamente as roupas contaminadas. Se necessário, utilizar o chuveiro de emergência. Contato com os olhos: lavar com o chuveiro lava-olhos por 15 minutos e procurar assistência médica. Acidente com material biológico: Em caso de contato com solução contendo suspensão viral com a mucosa oral ou a conjuntiva ocular, deve-se proceder imediatamente à lavagem do local (chuveiro lava-olhos) ou com água corrente. O responsável pelo laboratório deve ser imediatamente comunicado e a a pessoa possivelmente infectada deve ser encaminhada para assistência médica. Material biológico com status de contaminação desconhecido: Em caso de contato com a mucosa ocular, proceder à lavagem em chuveiro lava-olhos, com água corrente. Após contato com a pele, lavar com água e sabão, enxaguar e realizar antissepsia com álcool 70%. Local de atendimento médico e contatos de plantões de informações Quando necessário, a pessoa exposta a substâncias químicas ou agentes biológicos deverá ser encaminhada ao Pronto Socorro Municipal de Araçatuba no endereço: rua Dona Ida, 1350, Bairro Aviação (Telefone: ). Em caso de impossibilidade de encaminhamento, solicitar atendimento ao Serviço de Atendimento Municipal de Urgência SAMU (Telefone: 192).

8 Para sanar dúvidas sobre qualquer tipo de intoxicação, utilize o Disque-Intoxicação, da ANVISA, pelo número A ligação é gratuita e o usuário é atendido por uma das 36 unidades da Rede Nacional de Centros de Informação e Assistência Toxicológica (Renaciat). Outras alternativas para assistência em casos de intoxicação com produtos químicos: 1) Centro de Assistência Toxicológica de São José do Rio Preto/SP, Hospital de Base - Fundação Faculdade Regional de Medicina (FUNFARME). Av. Brigadeiro Faria Lima, 5416, Bairro São Pedro. Telefone (17) , ramais 1380 ou Atendimento 24 h pelo telefone (17) ceatox.hbase@famerp.br. 2) Centro de Assistência Toxicológica (CEATOX) do Instituto de Biociências, UNESP, Campus de Botucatu. O CEATOX oferece atendimento telefônico na prevenção, orientação e informações tóxico-farmacológicas a profissionais de saúde, hospitais, prontos-socorros, postos de saúde e à comunidade em geral por meio dos contatos: telefone (14) e plantão telefônico 24 horas pelo número ceatox@ibb.unesp.br. Os contatos de outros centros de assistência toxicológica estão relacionados no endereço CIENTE E DE ACORDO: Todos que realizam atividades no laboratório.