NOLASCO, GWS; SILVA AB Avaliação do potencial anti-inflamatório e mutagênico do látex de avelós. Horticultura Brasileira 30: S6105-S6111.

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1 Avaliação do potencial anti-inflamatório e mutagênico do látex de avelós George Wallace Santos Nolasco 1 ; Anderson Brito da Silva 1 1 FTC - Faculdade de Tecnologia e Ciências - Campus de Vitória da Conquista. Rua Ubaldino Figueira, Exposição, Vitória da Conquista - BA, brito_genetica@yahoo.com.br RESUMO As plantas medicinais vêm sendo utilizadas pelo homem ao longo de toda a história da humanidade na terapêutica e cura de enfermidades. Para garantir a integralidade da atenção à saúde, o Ministério da Saúde em 2006, implantou a Política Nacional de Práticas Integrativas e Complementares (PNPIC) no SUS. Por esse motivo o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial anti-inflamatório e mutagênico do Avelós (Euphorbia turicalli L.), bem como suas potencialidades como recurso terapêutico complementar. A pesquisa foi experimental e de caráter exploratório e descritivo com dois grupos, um controle e um submetido ao bioteste ensaio do micronúcleo com Allium cepa. Nas concentrações de 0,2 e 0,1%, próximas daquelas utilizadas, respectivamente, na medicina popular e homeopatia, foram observados que pelo menos uma das amostras avaliadas apresentou atividade mutagênica significativa, pelo teste de Kruskal-Wallis a 5% de probabilidade, enquanto as demais interações não foram significativas nas condições experimentais testadas. Portanto, há necessidade de aprofundamento nos estudos da mutagenicidade, bem como do potencial anti-inflamatório de Avelós nas terapias complementares, sendo sugeridos testes com mamíferos, dada a escassez de estudos com modelos animais vertebrados para esta espécie com propriedades e potencialidades medicinais. PALAVRAS-CHAVE: Micronúcleo, Euphorbia turicalli L., Fitoterapia. ABSTRACT Evaluation of potential anti-inflammatory and mutagenic of the latex of Avelós. Medicinal plants have been used by man throughout the history of mankind on treatment and cure of diseases. To ensure the comprehensiveness of health care, the Ministry of Health in 2006, introduced the National Policy on Integrative and Complementary Practices (PNPIC) in the SUS. Therefore the aim of this study was to evaluate the anti-inflammatory and mutagenic potential of Avelós (Euphorbia turicalli L.) and its potential as a therapeutic supplement to physical therapy and to analyze the benefits and risks caused by his latex. The experimental research was exploratory and explanatory, descriptive, inferential and analytical epidemiological model with experimental groups, a control and subjected to a biotest micronucleus assay with Allium cepa. At concentrations of 0,2 and 0,1%, similar to those previously used, respectively, in folk medicine and homeopathy, were observed at least one of the samples showed activity Mutagenic significant by Kruskal-Wallis test at 5% probability while the other interactions were not significant in the experimental conditions tested. So there is need for further studies of mutagenicity and anti-inflammatory potential of Avelós in complementary therapies, and suggested tests with mammals, given the paucity of studies in vertebrate animal models for this species with medicinal properties. Keywords: biotest micronucleus, Euphorbia turicalli L., Phytotherapy. Hortic. bras., v. 30, n. 2, (Suplemento - CD Rom), julho 2012 S 6105

2 Estudos realizados para avaliar a atividade biológica do látex de Euphorbia turicalli L., constataram a presença de substâncias com potencial analgésico, anti-inflamatório e anticancerígeno, sendo elas Eufol, Fenólicos e Ingenol (Albuquerque & Hanazaki, 2006; ANVISA, 2012). Plantas ricas em ácido tânico são empregadas na medicina tradicional no tratamento de diversas moléstias, tais como diarreia, hipertensão arterial, reumatismo, hemorragias, feridas, queimaduras, problemas estomacais, renais e do sistema urinário, e processos inflamatórios em geral (Lima, 2009). As plantas medicinais vêm sendo utilizadas pelo homem ao longo de toda a história da humanidade na terapêutica e cura de enfermidades. Para garantir a integralidade da atenção à saúde, o Ministério da Saúde em 2006, implantou a Política Nacional de Práticas Integrativas e Complementares (PNPIC) no SUS (Brasil, 2012). Devido o uso tradicional por parte da população, do látex de Avelós com intuito de tratar doenças como câncer, lesões de pele, inflamações e infecções sem levar em consideração os riscos e toxidades. O presente estudo pretende contribuir para avaliação de sua eficácia e/ou riscos a saúde humana em suas possíveis aplicações na Fitoterapia. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial anti-inflamatório e mutagênico do Avelós (Euphorbia turicalli L.), bem como suas potencialidades como recurso terapêutico desta espécie medicinal. MATERIAL E MÉTODOS O material biológico foi coletado em arbustos da espécie nas regiões rural e central da cidade de Vitoria da Conquista-BA, entre os dias 07 e 08 de maio de 2011, com material esterilizado. Foram feitos cortes longitudinais no tronco das árvores, com posterior coleta do látex por gotejamento. Procedeu-se ao bioensaio do micronúcleo com Allium cepa L. no Laboratório da Faculdade de Tecnologia e Ciências - FTC. Células de cebola (Allium cepa L.) foram submetidas aos tratamentos que consistiram da exposição ao látex de Avelós (Euphorbia tirucalli L.) nas concentrações de 0,5, 0,2% e 0,1% a partir das amostras de procedência das localidades Urbis I (Amostra 1), Santa Marta (Amostra 2), Povoado da Choça (Amostra 3) e José Gonçalves (Amostra 4), tendo como controle negativo água destilada e deionizada. Hortic. bras., v. 30, n. 2, (Suplemento - CD Rom), julho 2012 S 6106

3 As raízes jovens de aproximadamente 1 a 2 centímetros de comprimento foram coletadas e pré-tratadas com 2 mm 8-hidroxiquinoleína (Sigma) a 8 C por 24 horas, fixadas em etanol absoluto: ácido acético (3:1, v/v) por 24 h à temperatura ambiente e armazenadas a -20 C. As preparações citológicas foram convencionalmente confeccionadas pelo método do esmagamento de acordo com Guerra & Souza (2003). As raízes foram hidrolizadas em HCl 5N (Merck) por 20 min e esmagadas em uma gota de ácido acético a 45%. As lamínulas foram removidas a frio, coradas com Giemsa 2% e montadas com Bálsamo do Canadá sintético (Rhenohistol) (Merck). Para a análise foi consideradas pelo menos a contagem de 3000 células de cada sítio para a análise de células micronucleadas por lâmina. A avaliação das lâminas foi procedida em teste cego, em que o observador não teve conhecimento das amostras estudadas (Guerra & Souza, 2003). O acido tânico foi utilizado como parâmetro na determinação dos Fenólicos Totais pelas suas propriedades antioxidante, anti-inflamatória e antimalárica reconhecidos na Farmacopéia Brasileira e Mundial (ANVISA, 2012). A leitura das amostras utilizando padrão do ácido tânico deu-se por espectrofotometria do visível/uv, conforme Farmacopéia Brasileira (ANVISA, 2012). As análises estatísticas (ANOVA e testes de comparação de médias) foram processadas com uso do software estatístico Bioestat, versão 5.0. RESULTADOS E DISCUSSÃO A Amostra 4 proveniente de José Gonçalves, localiza-se na região norte de Vitoria da Conquista onde termina a mata de cipó e inicia-se a caatinga caracterizada pelas árvores de Avelós com 8 metros de altura, confirmando apresentou uma menor concentração de Fenólicos Totais em relação à Amostra 3 (conforme Figura 1). Amostra 3 proveniente do Povoado da Choça, localiza-se na região leste de Vitoria da Conquista, caracterizada pela maior altitude e por ser uma região de mata de cipó, apresentou maior concentração de Fenólicos Totais em ralação às outras três (Figura 1). A análise de variância (ANOVA) e a aplicação do Teste Tukey permitiram observar a existência de diferenças entre os tratamentos, sobretudo entre o controle negativo e o uso do látex em diluição de 0,5 %, sendo evidenciada atividade mutagênica para todas as amostras analisadas obtidas no município de Vitória da Conquista (Tabela 1). Hortic. bras., v. 30, n. 2, (Suplemento - CD Rom), julho 2012 S 6107

4 De acordo com Oliveira & Nepumoceno (2004), o uso fitoterápico do látex de Avelós na medicina tradicional constitui-se em duas gotas para cada litro de água, sendo que em seu artigo, para o teste de genotoxidade e antigenotoxidade com Drosophila melanogaster (mosca das frutas), não foram obtidos resultados positivos significativos de seu efeito. No presente estudo, resultados semelhantes foram obtidos para a concentração de 0,2%, o que equivale dizer que nas concentrações utilizadas na fitoterapia tradicional de Vitória da Conquista apenas a Amostra 2 mostrou atividade mutagênica (conforme Figura 2). Para Lima et al. (2009), avaliando o potencial mutagênico do uso homeopático e na fitoterapia com o látex de Avelós, usando de organismo procarioto (Teste AMES), há necessidade de um maior número de ensaios de mutagenicidade para Euphorbia tirucalli L., haja visto que seu trabalho inicial apontou que não houve efeito mutagênico significativo para os usos tradicional e homeopático da planta. Na concentração de 0,1%, próxima daquela utilizada na homeopatia, foi observado que pelo menos uma das amostras avaliadas apresentou atividade mutagênica significativa, pelo teste de Kruskal-Wallis a 5% de probabilidade (Figura 3), enquanto as demais interações não foram significativas nas condições experimentais testadas. Os ensaios de mutagênese evidenciaram que mesmo nas concentrações utilizadas na medicina tradicional existe o risco de mutagenicidade sendo necessários novos estudos visando determinar um limite seguro para a utilização do látex de Avelós. REFERÊNCIAS ALBUQUERQUE UP; HANAZAKI N As pesquisas etnodirigidas na descoberta de novos fármacos de interesse médico e farmacêutico: fragilidades e perspectivas. Rev. Bras. Farmacogn., 16 (Supl): ANVISA. Farmacopeia Brasileira. v.1 e v.2. Disponível em Acessado em 10 de abril de BRASIL. Política Nacional de Práticas Integrativas e Complementares no SUS. Ministério da Saúde. Secretaria de Atenção à Saúde. Departamento de Atenção Básica. Brasília, Disponível em Acesso em 01 de abril de GUERRA M; SOUZA MJ Como observar cromossomos: um guia de técnicas em citogenética vegetal, animal e humana. Ribeirão Preto: FUNPEC. 131p. Hortic. bras., v. 30, n. 2, (Suplemento - CD Rom), julho 2012 S 6108

5 LIMA, LGS et al Avaliação do potencial genotóxico e mutagênico de soluções diluídas e dinamizadas de Euphorbia tirucalli Lineu (Aveloz). Brazilian Homeopathic Journal, 11(1). OLIVEIRA AP; NEPOMUCENO JC Avaliação dos Efeitos Genotoxicos e Antigenotoxico do Avelos (Euphorbia Tirucalli) em Drosophila melanogaster. Biosci. J., Uberlândia, 20(2): Tabela 1 - Análise de Variância (ANOVA) para ocorrência de mutagênese com uso dos extratos de Avelós (Euphorbia tirucalli L.) na concentração de 0,5% avaliada pelo Teste do Micronúcleo com Allium cepa. Fontes de Variação Grau de Soma de Quadrados F Tratamentos Erro Fonte: Dados da pesquisa, Liberdade 4 10 Quadrados 3874, ,667 Médios 968,667 43,667 22,1832* Concentração do ácido tânico na amostra (µl/dl) Figura 1 - Gráfico representativo da diferença entre as concentrações de Fenólicos totais com atividade antioxidante a partir do padrão do ácido Tânico. Diferenças obtidas pelo teste Tukey a 1% de probabilidade. Medidas em µl/dl de amostra. 1 - Urbis I, 2 - Santa Marta, 3 - Choça, 4 - José Gonçalves. Fonte: Dados da pesquisa, Hortic. bras., v. 30, n. 2, (Suplemento - CD Rom), julho 2012 S 6109

6 Mutagenêse - Número de células micronucleadas Figura 2 - Gráfico representando a análise de variância e as diferenças entre as médias obtidas pelo teste Tukey a 5% e 1% de probabilidade de ocorrência de mutagênese do látex de Avelós na concentração de 0,5% avaliada pelo Teste do Micronúcleo com Allium cepa. 1 - Urbis I, 2 - Santa Marta, 3 - Choça, 4 - José Gonçalves, 5 - Controle Negativo. Hortic. bras., v. 30, n. 2, (Suplemento - CD Rom), julho 2012 S 6110

7 Mutagenêse - Número de células micronucleadas Figura 3 - Gráfico representando a análise de variância e as diferenças entre as médias obtidas pelo teste Kruskal-Wallis a 5% de probabilidade de ocorrência de mutagênese do uso do látex de Avelós na concentração de 0,2% avaliada pelo Teste do Micronúcleo com Allium cepa. 1 - Urbis I, 2 - Santa Marta, 3 - Choça, 4 - José Gonçalves, 5 - Controle Negativo. Valor de H = 10,8554. Hortic. bras., v. 30, n. 2, (Suplemento - CD Rom), julho 2012 S 6111