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Copyright 2015 Eppendorf AG, Germany. All rights reserved, including graphics and images. No part of this publication may be reproduced without the prior permission of the copyright owner. Eppendorf and the Eppendorf logo are registered trademarks of Eppendorf AG, Germany. Combitips, ept.i.p.s., and Reference 2 are registered trademarks of Eppendorf AG, Germany. Registered trademarks and protected trademarks are not marked in all cases with or in this manual. Protected by U.S. Patent Nos. 7,434,484; 7,673,532; 7,674,432; 8,297,134 P-TR-0000469-00/092015
Índice 3 Índice 1 Requisitos para um ajuste........................................................... 5 1.1 Ajuste de fábrica.............................................................. 6 1.2 Ajuste do usuário............................................................. 7 1.2.1 Exemplo de ajuste...................................................... 8 1.3 Alteração do volume em caso de ajuste de usuário alterado............................ 9 1.3.1 Alteração do volume em pipetas monocanal................................. 9 1.3.2 Alteração do volume em pipetas multicanal.................................. 9 1.4 Ajuste para ept.i.p.s. Long..................................................... 10 2 Líquidos com densidade elevada ou reduzida.......................................... 11 2.1 Cloreto de césio CsCl......................................................... 11 2.1.1 Valores de configuração para pipeta monocanal............................. 11 2.1.2 Valores de configuração para pipeta multicanal.............................. 11 2.2 Glicerina C 3 H 8 O 3............................................................. 12 2.2.1 Valores de configuração para pipeta monocanal............................. 12 2.2.2 Valores de configuração para pipeta multicanal.............................. 12 2.3 Soda cáustica líquida NaOH.................................................... 13 2.3.1 Valores de configuração para pipeta monocanal............................. 13 2.4 Ácido fosfórico H 3 PO 4......................................................... 14 2.4.1 Valores de configuração para pipeta monocanal............................. 14 3 Ação capilar na imersão da ponteira de pipeta......................................... 15 3.1 Dimetilsulfóxido DMSO........................................................ 15 3.1.1 Valores de configuração para pipeta monocanal............................. 15 4 Erros........................................................................... 16 4.1 Erros de medição de acordo com a Eppendorf AG................................... 16 4.1.1 Pipetas monocanal com volume variável................................... 16 4.1.2 Pipetas multicanal com volume variável.................................... 17 4.2 Limites de erro de acordo com ISO 8655-2002..................................... 18
4 Índice
Requisitos para um ajuste 5 1 Requisitos para um ajuste Através do ajuste o volume de dispensação é ajustado de forma que os erros de medição sistemáticos para a aplicação prevista sejam reduzidos. Através de um ajuste o volume de dispensação é alterado ao longo de toda a faixe de volume aproximadamente pelo mesmo volume. O desvio do volume real do valor configurado pode ter diversas causas. Antes de realizar um ajuste verifique que é possível excluir outras causas para desvios na dispensação. Cone de pico está OK Ponteira de pipeta é compatível com a pipeta Pipeta está estanque Foi realizada uma pré-molhagem suficiente Líquido, instrumento e ar ambiente têm a mesma temperatura Modo de trabalho e velocidade de pipetagem corretos Resolução suficiente da balança Local de pesagem sem correntes de ar Cálculo correto do volume É necessário ajustar a pipeta, se em uma verificação gravimétrica for detectada a existência de um erro a corrigir. A alteração do ajuste é útil quando: Soluções que se diferenciam grandemente da água em suas propriedades físicas (densidade, viscosidade, tensão superficial, pressão de vapor) Ação capilar na imersão da ponteira da pipeta (por ex. no caso de DMSO) Pressão atmosférica alterada devido a altura geográfica do local de utilização Ponteiras de pipeta cuja geometria se diferencia claramente de ponteiras padrão (por ex. ep T.I.P.S. long) A alteração do ajuste não influencia o erro de medição aleatório da dispensação. O erro de medição aleatório pode ser melhorado através da substituição de peças desgastadas. O erro de medição aleatório é ainda influenciado fortemente através do manuseio.
ADJ ADJ ADJ 6 Requisitos para um ajuste 1.1 Ajuste de fábrica Requisito Pino Tampão de segurança vermelho de plástico Indicação do ajuste na posição "0" 1. Verificar o instrumento gravimetricamente e registrar os resultados. 2. Perfurar o tampão de segurança no centro com o pino. 3. Remover o tampão de segurança. Re 4. Inserir a ferramenta de ajuste. Re 5. Fixar o botão de comando. 6. Rodar a ferramenta de ajuste para alterar a indicação do volume. Re 7. Ajustar o volume determinado através da análise gravimétrica. 8. Analisar gravimetricamente a configuração nos volumes de teste.
ADJ Requisitos para um ajuste 7 9. Inserir o tampão de segurança vermelho. A pipeta é identificada com o tampão de segurança vermelho como uma pipeta ajustada e calibrada pelo usuário. Re 1.2 Ajuste do usuário A alteração do ajuste do usuário é representada claramente na janela. Na entrega o indicador de ajuste está ajustado para "0". Repondo para "0" é possível restaurar o ajuste de fábrica. Requisito Pino Vedação de ajuste vermelha de plástico 1. Determinar gravimetricamente o desvio do volume dispensado em relação ao volume ajustado. 2. Com base no desvio calculado (aqui na pág. 9)determinar o valor para o ajuste do usuário. Reference 2 ADJ 3. Perfurar a vedação de ajuste no centro com o pino. 4. Retirar a vedação de ajuste. 5. Inserir a ferramenta de ajuste. Reference 2 6. Rodar a ferramenta de ajuste até o indicador de ajuste indicar o valor pretendido.
8 Requisitos para um ajuste 7. Analisar gravimetricamente o ajuste do volume de teste. 8. Inserir a vedação de ajuste vermelha. Reference 2 9. Identificar o tempo de validade da pipeta. A pipeta é identificada com a vedação de ajuste vermelha como uma pipeta ajustada e calibrada pelo usuário. 1.2.1 Exemplo de ajuste Problema Ajuste do volume 300 μl Líquido dimetilsulfóxido (DMSO) Devido a ação capilar aspiração de volume de 303 μl Solução Ajustar a escala do ajuste do usuário para -4. O volume de dispensação efetivo é reduzido em aprox. 3 μl para 300 μl.
Requisitos para um ajuste 9 1.3 Alteração do volume em caso de ajuste de usuário alterado Os valores de volume (Δ V) são valores teóricos e se destinam apenas a orientação. Eles se aplicam a pipetas com ajuste de volume variável para cada volume ajustado. Em função do modo de trabalho e outras condições (temperatura, densidade, etc.) podem ocorrer desvios em relação aos valores. 1.3.1 Alteração do volume em pipetas monocanal Volume nominal Código de cor Ajuste do usuário Δ V [μl] +8 +6 +4 +2-2 -4-6 -8 1 μl cinza escuro 0,05 0,0375 0,025 0,0125-0,012-0,025-0,037-0,05 2 μl 2,5 μl 5 5 5 μl cinza médio 0,2 0,15 0,1 0,05-0,05-0,1-0,15-0,2 10 μl 20 μl cinza claro 0,4 0,3 0,2 0,1-0,1-0,2-0,3-0,4 10 μl amarelo 0,4 0,3 0,2 0,1-0,1-0,2-0,3-0,4 20 μl 25 μl amarelo 2 1,5 1 0,5-0,5-1 -1,5-2 50 μl 100 μl 200 μl amarelo 4 3 2 1-1 -2-3 -4 300 μl laranja 6 4,5 3 1,5-1,5-3 -4,5-6 200 μl azul 20 15 10 5-5 -10-15 -20 250 μl 500 μl 1000 μl 2 ml vermelho 50 37,5 25 12,5-12,5-25 -37,5-50 2,5 ml 5 ml violeta 100 75 50 25-25 -50-75 -100 10 ml azul turquesa 200 150 100 50-50 -100-150 -200 1.3.2 Alteração do volume em pipetas multicanal Volume nominal Código de cor Ajuste do usuário Δ V [μl] +8 +6 +4 +2-2 -4-6 -8 10 μl cinza médio 0,2 0,15 0,1 0,05-0,05-0,1-0,15-0,2 100 μl amarelo 2 1,5 1 0,5-0,5-1 -1,5-2 300 μl laranja 6 4,5 3 1,5-1,5-3 -4,5-6
10 Requisitos para um ajuste 1.4 Ajuste para ept.i.p.s. Long A geometria das ponteiras de pipeta diferencia-se claramente da de ponteiras padrão. Na utilização de ept.i.p.s. Long é aspirado um volume menor. É recomendável uma alteração da configuração do usuário para a redução de erros de medição sistemáticos. Condições de teste Utilização de água desmineralizada Pipetagem a temperatura ambiente Ponteira pré-molhada Profundidade de imersão da ponteira aprox. 5 mm Aspiração e dispensação lentas da água Blow-out é acionado com um retardo de aprox. 2 segundos Aspiração preferencialmente vertical e dispensação ligeiramente inclinada na parede ept.i.p.s. Código de cor pipeta Ajuste do volume Ajuste recomendado para o ajuste do usuário 1250 μl L azul 500 μl +4 1000 μl +4 5 ml L violeta 2,5 ml +1,5 5 ml +1,5 10 ml L azul turquesa 5 ml +2 10 ml +5 Os valores de medição dependem em grande medida do modo de trabalho individual. As configurações recomendadas têm de ser verificadas através de uma medição gravimétrica.
Líquidos com densidade elevada ou reduzida 11 2 Líquidos com densidade elevada ou reduzida No caso de líquidos com densidade elevada ou reduzida é aconselhável ajustar a pipeta. Os valores para o ajuste encontram-se nas tabelas. Os valores de medição dependem em grande medida do modo de trabalho individual. As configurações recomendadas têm de ser verificadas através de uma medição gravimétrica. 2.1 Cloreto de césio CsCl Condições de teste Concentração 45 % Temperatura 22 C Densidade 1,501 g/ml Dispensação de líquido na parede do tubo Blow-out 3 s após dispensação Ponteira de pipeta não está pré-molhada Ponteira de pipeta nova para cada dispensação de líquido 2.1.1 Valores de configuração para pipeta monocanal Volume nominal Código de cor Valor de configuração 100 % volume nominal 2,5 μl cinza escuro 10 μl cinza médio +6,5 +3,5 20 μl cinza claro +6,5 +2,5 20 μl amarelo +6,5 +2,5 100 μl amarelo +3 +3 200 μl amarelo +2,5 +2 300 μl laranja +2,5 +2,5 1000 μl azul +2 +2 2,5 ml vermelho +1,5 +1,5 5 ml violeta +1,5 +1,5 10 ml azul turquesa +5 +4 Valor de configuração 50 % volume nominal 2.1.2 Valores de configuração para pipeta multicanal Volume nominal Código de cor Valor de configuração 100 % volume nominal 10 μl cinza médio +3 +3 100 μl amarelo +1 +1 300 μl laranja +1 +1 Valor de configuração 50 % volume nominal
12 Líquidos com densidade elevada ou reduzida 2.2 Glicerina C 3 H 8 O 3 Condições de teste Concentração 50 % Temperatura 25 C Densidade 1,124 g/ml Dispensação de líquido na parede do tubo Blow-out 3 s após dispensação Ponteira de pipeta não está pré-molhada Ponteira de pipeta nova para cada dispensação de líquido 2.2.1 Valores de configuração para pipeta monocanal Volume nominal Código de cor Valor de configuração 100 % volume nominal 2,5 μl cinza escuro 0 0 10 μl cinza médio 0 0 20 μl cinza claro +1 0 20 μl amarelo +1 0 100 μl amarelo +1 +1 200 μl amarelo +1 +1 300 μl laranja +1 +1 1000 μl azul +1 +1 2,5 ml vermelho +1 +1 5 ml violeta +1 +0,5 10 ml azul turquesa +2 +0,5 Valor de configuração 50 % volume nominal 2.2.2 Valores de configuração para pipeta multicanal Volume nominal; código de cor Código de cor Valor de configuração 100 % volume nominal 10 μl cinza médio 0 0 100 μl amarelo 0 0 300 μl laranja +0,5 +0,5 Valor de configuração 50 % volume nominal
Líquidos com densidade elevada ou reduzida 13 2.3 Soda cáustica líquida NaOH Condições de teste Concentração 40 % Temperatura 25 C Densidade 1,437 g/ml Dispensação de líquido na parede do tubo Blow-out 3 s após dispensação Ponteira de pipeta não está pré-molhada Ponteira de pipeta nova para cada dispensação de líquido 2.3.1 Valores de configuração para pipeta monocanal Volume nominal Código de cor Valor de configuração 100 % volume nominal 20 μl cinza claro +3 20 μl amarelo +5 100 μl amarelo 0 200 μl amarelo +2 300 μl laranja +3 1000 μl azul +0,5 2,5 ml vermelho +2 5 ml violeta +4 10 ml azul turquesa +6
14 Líquidos com densidade elevada ou reduzida 2.4 Ácido fosfórico H 3 PO 4 Condições de teste Concentração 85 % Temperatura 25 C Densidade 1,689 g/ml Dispensação de líquido na parede do tubo Blow-out 3 s após dispensação Ponteira de pipeta não está pré-molhada Ponteira de pipeta nova para cada dispensação de líquido 2.4.1 Valores de configuração para pipeta monocanal Volume nominal Código de cor Valor de configuração 100 % volume nominal 20 μl cinza claro 0 20 μl amarelo 0 100 μl amarelo +1 200 μl amarelo +2 300 μl laranja +2 1000 μl azul +2 2,5 ml vermelho +3 5 ml violeta +5 10 ml azul turquesa +8
Ação capilar na imersão da ponteira de pipeta 15 3 Ação capilar na imersão da ponteira de pipeta Devido a efeitos capilares é aspirada uma maior quantidade de líquido em caso de líquidos como, por exemplo, dimetilsulfóxido. É recomendável uma alteração da configuração do usuário para a redução de erros de medição sistemáticos. Os valores de medição dependem em grande medida do modo de trabalho individual. As configurações recomendadas têm de ser verificadas através de uma medição gravimétrica. 3.1 Dimetilsulfóxido DMSO Condições de teste Concentração 99,8 % Temperatura 25 C Densidade 1,097 g/ml Dispensação de líquido na parede do tubo Blow-out 3 s após dispensação Ponteira de pipeta não está pré-molhada Ponteira de pipeta nova para cada dispensação de líquido 3.1.1 Valores de configuração para pipeta monocanal Volume nominal Código de cor Valor de configuração 100 % volume nominal 20 μl cinza claro -4 20 μl amarelo -4 100 μl amarelo -4 200 μl amarelo -4 300 μl laranja -4 1000 μl azul -2 2,5 ml vermelho -1 5 ml violeta -2 10 ml azul turquesa 0
16 Erros 4 Erros 4.1 Erros de medição de acordo com a Eppendorf AG 4.1.1 Pipetas monocanal com volume variável Modelo Ponteira de teste ept.i.p.s. 0,1 μl 2,5 μl 0,1 μl 10 μl cinza escuro 34 mm 0,5 μl 10 μl 0,1 μl 20 μl cinza médio 40 mm 2 μl 20 μl 0,5 μl 20 μl L cinza claro 46 mm 2 μl 20 μl 2 μl 200 μl amarelo 53 mm 10 μl 100 μl 2 μl 200 μl amarelo 53 mm 20 μl 200 μl 2 μl 200 μl amarelo 53 mm 30 μl 300 μl 20 μl 300 μl laranja 55 mm 100 μl 1000 μl 50 μl 1000 μl azul 71 mm 0,25 ml 2,5 ml 0,25 ml 2,5 ml vermelho 115 mm Volume de teste sistemático Erro aleatório ± % ± μl ± % ± μl 0,1 μl 48,0 0,048 12,0 0,012 0,25 μl 12,0 0,03 6,0 0,015 1,25 μl 2,5 0,031 1,5 0,019 2,5 μl 1,4 0,035 0,7 0,018 0,5 μl 8,0 0,04 5,0 0,025 1 μl 2,5 0,025 1,8 0,018 5 μl 1,5 0,075 0,8 0,04 10 μl 1,0 0,10 0,4 0,04 2 μl 3,0 0,06 1,5 0,03 10 μl 1,0 0,10 0,6 0,06 20 μl 0,8 0,16 0,3 0,06 2 μl 5,0 0,10 1,5 0,03 10 μl 1,2 0,12 0,6 0,06 20 μl 1,0 0,2 0,3 0,06 10 μl 3,0 0,3 0,7 0,07 50 μl 1,0 0,5 0,3 0,15 100 μl 0,8 0,8 0,2 0,2 20 μl 2,5 0,5 0,7 0,14 100 μl 1,0 1,0 0,3 0,3 200 μl 0,6 1,2 0,2 0,4 30 μl 2,5 0,75 0,7 0,21 150 μl 1,0 1,5 0,3 0,45 300 μl 0,6 1,8 0,2 0,6 100 μl 3,0 3,0 0,6 0,6 500 μl 1,0 5,0 0,2 1,0 1000 μl 0,6 6,0 0,2 2,0 0,25 ml 4,8 12 1,2 3 1,25 ml 0,8 10 0,2 2,5 2,5 ml 0,6 15 0,2 5
Erros 17 Modelo 0,5mL 5mL 0,5mL 5mL Ponteira de teste ept.i.p.s. 0,1mL 5mL violeta 120 mm 0,1mL 5mL L violeta 175 mm 1 ml 10 ml 1 ml 10 ml azul turquesa 165 mm 1 ml 10 ml 1 ml 10 ml L azul turquesa 243 mm Volume de teste sistemático Erro aleatório ±% ±μl ±% ±μl 0,5 ml 2,4 12 0,6 3 2,5 ml 1,2 30 0,25 6 5,0 ml 0,6 30 0,15 7,5 0,5 ml 5,0 25 1,0 5,0 2,5 ml 3,0 75 0,9 22,5 5,0 ml 2,0 100 0,8 40 1,0 ml 3,0 30 0,6 6 5,0 ml 0,8 40 0,2 10 10,0 ml 0,6 60 0,15 15 1,0 ml 6,0 6 1,0 10 5,0 ml 3,0 150 0,9 45 10,0 ml 2,0 200 0,7 70 4.1.2 Pipetas multicanal com volume variável Modelo Ponteira de teste ept.i.p.s. 0,5 μl 10 μl 0,1 μl 20 μl cinza médio 40 mm 10 μl 100 μl 2 μl 200 μl amarelo 53 mm 30 μl 300 μl 20 μl 300 μl laranja 55 mm Volume de teste sistemático Erro aleatório ±% ±μl ±% ±μl 0,5 μl 12,0 0,06 8,0 0,04 1 μl 8,0 0,08 5,0 0,05 5 μl 4,0 0,2 2,0 0,1 10 μl 2,0 0,2 1,0 0,1 10 μl 3,0 0,3 2,0 0,2 50 μl 1,0 0,5 0,8 0,4 100 μl 0,8 0,8 0,3 0,3 30 μl 3,0 0,9 1,0 0,3 150 μl 1,0 1,5 0,5 0,75 300 μl 0,6 1,8 0,3 0,9
18 Erros 4.2 Limites de erro de acordo com ISO 8655-2002 Volume nominal Erros sistemático aleatório ± % ± μl ± % ± μl 1 μl 5,0 0,05 5,0 0,05 2 μl 4,0 0,08 2,0 0,04 5 μl 2,5 0,125 1,5 0,075 10 μl 1,2 0,12 0,8 0,08 20 μl 1,0 0,2 0,5 0,1 50 μl 1,0 0,5 0,4 0,2 100 μl 0,8 0,8 0,3 0,3 200 μl 0,8 1,6 0,3 0,6 500 μl 0,8 4,0 0,3 1,5 1000 μl 0,8 8,0 0,3 3,0 2000 μl 0,8 16,0 0,3 6,0 5000 μl 0,8 40,0 0,3 15,0 10000 μl 0,6 60,0 0,3 30,0
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