EFEITO DE DIFERENTES ÓLEOS ESSENCIAIS NO CONTROLE DA MANCHA DE BIPOLARIS NA CULTURA DO MILHO

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1 EFEITO DE DIFERENTES ÓLEOS ESSENCIAIS NO CONTROLE DA MANCHA DE BIPOLARIS NA CULTURA DO MILHO Micaele Rodrigues de Souza 1 ; Gil Rodrigues dos Santos 2 1 Aluna do Curso de Agronomia; Campus de Gurupi; micaele.souzasp@gmail; PIBIC/CNPq 2 Orientador do Curso de Agronomia; Campus de Gurupi; gilrsan@mail.uft.edu.br RESUMO: O trabalho desenvolvido teve por finalidade avaliar a fungitoxicidade in vitro dos óleos essenciais de Alecrim Pimenta, Manjericão roxo, Citronela e Capim Limão sobre o fitopatógeno Bipolaris sp., agente etiológico da doença Mancha de Bipolaris. Os tratamentos consistiram em cinco concentrações (1; 2; 3; 4 e 5%) conduzidos em triplicata. Foi adotado uma testemunha absoluta (apenas BDA). Plantas de milho foram submetidas a testes de fitotoxicidade do óleo essencial de alecrim pimenta e posteriormente realizados os testes in vivo preventivo e curativo do óleo essencial com as seguintes concentrações 0,01; 0,05; 0,1; 0,25 e 0,5%. O óleo essencial de alecrim apresenta potencial fungitóxico ao fungo Bipolaris sp., podendo ser utilizado como controle alternativo preventivo da doença mancha de Bipolaris. Palavras-chave: Zea mays; controle alternativo; atividade fungitóxica INTRODUÇÃO O milho (Zea mays L.) destaca-se por ser uma cultura de grande importância econômica e social devido suas diversas maneiras de utilização, sendo indispensável para a segurança alimentar mundial já que juntamente com o arroz e trigo prover 50 % do abastecimento de energia na dieta da humanidade (FAO, 2014; GOES et al. 2014). Todavia diversos fatores têm prejudicado a produção da cultura em questão, dentre eles podemos evidenciar a ocorrência de doenças fúngicas que afeta de maneira significativa o potencial produtivo da planta (CONAB, 2016), sendo umas das causas que tem limitado diversas vezes o crescimento da produção. A utilização de produtos naturais no controle de doenças de plantas vem se tornando uma alternativa promissora para reduzir o uso indiscriminado de defensivos agrícolas. Assim, sistemas de cultivo mais sustentáveis e menos dependentes do uso de agrotóxico têm sido desenvolvidos. Um fator indispensável para a agricultura sustentável é o controle alternativo de doenças de plantas. Assim, Página 1

2 considerando a crescente importância da Mancha de Bipolaris em milho, o objetivo do trabalho desenvolvido foi avaliar a fungitoxicidade in vitro e in vivo dos óleos essenciais de Alecrim Pimenta, Manjericão roxo, Citronela e Capim Limão sobre o fitopatógeno Bipolaris sp., agente etiológico da doença Mancha de Bipolaris. MATERIAL E MÉTODOS A pesquisa foi desenvolvida no laboratório de Fitopatologia do Campus de Gurupi/Universidade Federal do Tocantins TO. O fungo Bipolaris sp. foi isolado de plantas de milho cultivadas na área experimental da UFT com sintomas da doença, e repicado em meio de cultura BDA. Para a extração dos óleos essenciais empregou-se o método de hidrodestilação, utilizando-se o aparelho Clevenger. Preparou-se cinco diferentes concentrações (1; 2; 3; 4 e 5%) que constituíram os tratamentos e a testemunha (apenas meio BDA). Para avaliar o efeito in vitro dos óleos essenciais na inibição do crescimento micelial do fitopatógeno Bipolaris sp., foi distribuído na superfície do meio de cultura BDA, 100 µl de cada uma das cinco concentrações dos óleos essenciais já citadas, com o auxílio de uma alça tipo Drigalsky. Em seguida, no centro de cada placa de Petri depositou-se um disco (6 mm) contendo micélio de Bipolaris sp. As placas foram vedadas com filme plástico PVC, identificadas e incubadas em BOD a 25 C por 10 dias, no qual as avaliações foram realizadas aferindo-se com paquímetro digital o diâmetro de crescimento micelial do fungo em dois sentidos ortogonalmente opostos, com intervalos regulares de 48 horas. Todos os experimentos foram conduzidos em triplicata. As análises qualitativas foram realizadas por cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massa CG-EM. O cromatógrafo utilizado foi o modelo Shimadzu GC-2010 equipado com detector seletivo de massa modelo QP2010Plus. Os constituintes foram identificados comparando seus espectros de massas com aqueles dos bancos de dados das bibliotecas Nist e Wiley 229, e também por meio da comparação entre os seus índices de retenção calculados com aqueles presentes na literatura (Adams, 2007). A quantificação dos teores dos compostos, expressa em porcentagem tendo como base a normalização de áreas, foram obtidas por meio de um cromatógrafo Página 2

3 gasoso equipado com um detector de ionização de chamas (DIC), utilizando-se um aparelho Shimadzu GC Para realizar os testes in vivo, primeiramente, avaliou-se a fitotoxicidade do óleo essencial de Alecrim Pimenta, nas seguintes concentrações 0,01; 0,1; 0,5; 0,75; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0 %, por este ter apresentado o melhor resultado comparando com os demais nos testes in vitro. Em casa de vegetação, foram cultivadas plantas de milho em dez vasos de polietileno contendo latossolo vermelho amarelo e substrato comercial na proporção (2:1), mantendo-se três plantas por vaso, irrigadas diariamente. Foram adicionados 10 g de adubo NPK ( ) por vaso. As aplicações foram realizadas em plantas com vinte dias após a emergência, utilizando-se um borrifador manual, pulverizando-se 10 ml das diferentes soluções de óleo essencial. Após 24 horas da aplicação, realizouse a avaliação de fitotoxicidade adotando-se a escala de notas adaptada de Freitas et al. (2009). Para implantar os testes preventivo e curativo, preparou-se uma solução de esporos a partir de placas de Petri contendo o inóculo de sete dias. Adicionou-se 10 ml de água destilada em cada placa e efetuouse o desprendimento dos esporos com o auxílio de um pincel de cerdas macias. Em seguida, a solução de esporos foi filtrada em gaze e quantificados os esporos em câmara de Neubauer, ajustando-se à concentração 10 4 esporos ml -1. Os testes in vivo foram implantados em delineamento inteiramente casualizado em triplicata, sendo testadas as concentrações 0,01; 0,05; 0,1; 0,25 e 0,5% de óleo essencial de Alecrim Pimenta e como testemunha absoluta as plantas foram pulverizadas apenas com água destilada. As avaliações de severidade da doença foram efetuadas com intervalos regulares de 48 horas após a inoculação, totalizando cinco avaliações, adotando-se uma escala de notas segundo Santos et al. (2005). Os testes de efeito preventivo e curativo do óleo essencial de Alecrim Pimenta sobre a doença mancha de Bipolaris foram realizados adotando-se a metodologia descrita por Perini et al. (2011). RESULTADOS E DISCUSSÃO Os óleos de Manjericão Roxo (Ocimum pupuraceus), Citronela (Cymbopogon nardus) e Capim Limão (Cymbopogon citratus) não apresentaram efeitos significativos nos ensaios in vitro realizados, por isso apenas o óleo essencial de Alecrim Pimenta (Lippia sidoides), foi utilizado para as avaliações Página 3

4 de efeitos fitotóxicos e fungitóxicos. Tendo este como composto majoritário o timol, resultado obtido através da cromatografia gasosa acoplada ao espectro de massas (CG-MS). Verificou-se que já aos dois dias de incubação houve a inibição total do patógeno em todas as concentrações, exceto na concentração C1 (1% de óleo) que teve 50,8% do crescimento do patógeno inibido ao ser comparado com a testemunha. Já na concentração C 5 (5%) verificou-se completa inibição ate o décimo dia de incubação. Aos quatro dias de incubação (Tabela 1), houve crescimento em todas as doses submetidas, exceto na dose C5 (5%) que promoveu inibição até o décimo dia de avaliação. Provavelmente, o crescimento micelial nas doses mais baixas ocorreu devido à volatilização ou fotólise de alguns compostos presentes no óleo essencial. Tabela1- Diâmetro micelial (mm) do fungo Bipolaris maydis sob cinco diferentes concentrações (C 1 = 1%; C 2 = 2%; C 3 = 3%; C 4 = 4% e C 5 = 5%) do óleo essencial de Alecrim Pimenta (Lippia sidoides Cham.) e sob testemunha (água destilada). Tratamento Épocas de avaliação Equação de Regressão R Test. 15,06 21,38 27,98 34,91 38,57 C 1 7,41 11,0 15,87 19,83 20,95 C 2 0 4,91 12,07 21,08 25,44 C 3 0 5,1 7,51 15,56 20,17 C 4 0 3,79 7,34 15,24 19,82 C y = 7,4x - 2,9167 0,95 y = 4,194x - 2,1607 0,96 y = 5,6429x - 9,1633 0,95 y = 4,2797x - 6,9173 0,94 y = 4,2334x - 7,112 0,93 y = 0 1 Sintomas de fitotoxidez surgiram após 12 h decorridas das aplicações nas folhas. Verificou-se que a partir da concentração C 4 (0,75% de óleo) surgiram sintomas de injúrias nas folhas, com 60% de fitotoxidez. A concentração C9 (3,0% de óleo) Página 4

5 provocou 96,6% de fitotoxidez, com lesões irreversíveis nas plantas aplicadas. Desta forma, verificou-se que a dose de 0,5% (C3) de óleo do Alecrim Pimenta, é a dose máxima em que as plantas de milho podem suportar sem provocar sintomas visíveis de fitotoxidez. Observou-se que as plantas tratadas com as concentrações de 0,1; 0,25 e 0,5% no teste preventivo do óleo essencial de Alecrim Pimenta no progresso da doença Mancha de Bipolaris (Figura 1) apresentaram menores níveis da doença quando comparada com as demais doses e com a testemunha absoluta. Entretanto no teste curativo verificou-se que o óleo essencial de Alecrim Pimenta não apresentou eficiência de controle, levando-se em consideração que de um modo geral a AACPD foi maior que no controle preventivo e também houve alto nível de doença até nas maiores doses utilizadas.. Figura 1- Área Abaixo da Curva de Progresso da Doença (AACPD) da Mancha de Bipolaris do milho, em função da aplicação preventiva e curativa do óleo essencial de Alecrim Pimenta (Lippia sidoides Cham.) aplicado em cinco concentrações crescentes. Página 5

6 Diante do exposto é possível afirmar que o óleo essencial de Alecrim Pimenta pode ser um promissor agente antifúngico, devido a sua mistura de componentes ativos para o efeito preventivo do progresso da doença Mancha de Bipolaris. LITERATURA CITADA CONAB. Companhia Nacional de Abastecimento. Disponível em: _2016.pdf. Acessado em setembro de FAO. Food and Agriculture Organization. Disponível em: Acessado em setembro de GOES,R. J. Universidade Estadual Paulista (UNESP). Revista Agrarian. Dourados,v.7, p.257, 2014 PEIXOTO, C., M. O milho no Brasil, sua importância e evolução. Revista Seed Newes, Ed. Becker&Peske Ltda, Pelotas- RS, SANTOS, G. R.; CAFÉ-FILHO, A. C.; LEÃO, F. F.; CÉSAR, M.; FERNANDES, L. E. Progresso do crestamento gomoso e perdas na cultura da melancia. Horticultura Brasileira, Brasília, v. 23, n. 2, p , FREITAS, S.P.; MOREIRA, J.G.; FREITAS, I.L.J.; FREITAS JÚNIOR, S.P.; AMARAL JÚNIOR, A.T.; SILVA, V.Q.R. Fitotoxicidade de herbicidas a diferentes cultivares de milho-pipoca. Planta Daninha, Viçosa, v.27, n.esp. p , PIRINI,V.B.M.; CASTRO, P.G.; SANTOS, G.R.; AGUIAR, R.W.S.; LEÃO, E.U.; SEIXAS, P.T.L. Avaliação do efeito curativo e preventivo do óleo essencial do capim citronela no controle de Pyricularia grisea. Journal of Biotechnoly and Biodiversity, v.2, n.2, p.23-27, AGRADECIMENTOS "O presente trabalho foi realizado com o apoio do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico CNPq Brasil" Página 6